多胺對鹽脅迫下北美冬青葉綠素?zé)晒馓匦缘挠绊懷芯糠椒?br>【專利說明】多胺對鹽脅迫下北美冬青葉綠素?zé)晒馓匦缘挠绊懷芯糠椒?【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及鹽脅迫下北美冬青生長研究的技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種多胺對鹽脅迫 下北美冬青葉綠素?zé)晒馓匦缘挠绊懷芯糠椒ā?【【背景技術(shù)】】
[0002] 鹽脅迫是影響植物生長發(fā)育的重要限制因子之一。鹽脅迫引起植物含水量、膨壓、 光合和抗氧化系統(tǒng)等生理生化因子都明顯下降，據(jù)多個研究報道，在鹽脅迫條件下，小麥、 白楊、金銀花、檉柳等植物的生長均會受到不同程度的抑制作用；多胺在調(diào)控植物生長發(fā)育 過程中起到重要的作用，許多研究報道多胺可以明顯增強植物的耐鹽性，鹽脅迫下多胺能 調(diào)節(jié)多種酶的活性并且能夠與光合機構(gòu)結(jié)合，緩解鹽脅迫對光合作用的影響。
[0003] 北美冬青，為冬青科冬青屬多年生落葉灌木，其特點是冬季落葉，落葉后，密集亮 麗的紅果掛滿枝頭，十分耀眼和喜慶。北美冬青的生育特性是喜光，亦耐半陰，喜肥沃微酸 性到中性土壤，弱堿性土壤亦能適應(yīng)，喜溫暖濕潤環(huán)境，耐濕性、抗寒性強，適于我國大部分 地區(qū)，如長江流域及其以北地區(qū)生長、繁殖。引種試驗表明，這些品種表現(xiàn)抗性強，適應(yīng)性 廣，生長中等，能正常開花、結(jié)果和冬季落葉，是秋冬切枝、環(huán)境美化和盆栽的優(yōu)良觀賞樹 種。因此能否選育耐鹽性較強的北美冬青，應(yīng)用于鹽堿灘涂開發(fā)利用及園林美化，對促進鹽 堿地改造具有重要意義。自2006年我國引進北美冬青觀賞品種以來，我國前期開展了北美 冬青引種、嫩枝扦插技術(shù)、組織培養(yǎng)快速繁殖技術(shù)、盆栽北美冬青的矮化技術(shù)等繁育與開發(fā) 利用研究。但我國對北美冬青的研究主要局限于北美冬青的園藝性狀觀察、栽培技術(shù)、組織 培養(yǎng)、扦插繁殖、容器育苗等方面研究。但未見多胺對鹽脅迫條件下北美冬青生理生化特征 方面的影響研究，因此，提出一種多胺對鹽脅迫下北美冬青葉綠素?zé)晒馓匦缘挠绊懷芯糠?法，以北美冬青為研究對象，探討多胺對不同程度的鹽脅迫條件下北美冬青光合和熒光特 性的影響研究，目的在于了解北美冬青在鹽脅迫下的響應(yīng)機制，為北美冬青耐鹽性評價及 抗鹽性篩選提供一定的理論依據(jù)。 【
【發(fā)明內(nèi)容】
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[0004] 本發(fā)明的目的在于克服上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種多胺對鹽脅迫下北美冬青 葉綠素?zé)晒馓匦缘挠绊懷芯糠椒?，其旨在解決現(xiàn)有技術(shù)中多胺對鹽脅迫條件下北美冬青生 理生化特征方面的影響研究較少的技術(shù)問題。
[0005] 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提出了一種多胺對鹽脅迫下北美冬青葉綠素?zé)晒馓匦缘?影響研究方法，包括如下步驟：
[0006] 步驟一、設(shè)定處理：
[0007] 選取生長健壯、無病蟲害、長勢基本一致的北美冬青四年生苗木，于智能實驗大棚 中進行栽培管理，每株苗木均栽培至盆中，常規(guī)管理養(yǎng)護1個月后進行鹽脅迫試驗，包括對 照在內(nèi)共設(shè)以下6種處理：
[0008] ①空白對照：CK;
[0009] ②多胺處理：〇g · L-iNaCl+OAmmol · L-Spd;
[0010] ③中鹽脅迫:4g.L-ICl;
[0011] ④中鹽脅迫和多胺處理：4g · L-iNaCl+O.Smmol · L-Spd;
[0012] ⑤重鹽脅迫:8g · L-ICl;
[0013] ⑥重鹽脅迫和多胺處理：8g · L-iNaCl+O.Smmol · L-Spd;
[0014] 處理方法：
[0015] 每種處理重復(fù)4次，共24盆，每次澆施相隔Id，每盆澆施鹽溶液500mL，并通過花盆 下墊底盤回收外滲溶液，多胺Spd于葉面噴施至葉片沾濕即可。
[0016]步驟二、含量及參數(shù)的測定：
[0017] 在經(jīng)過步驟一處理后的0(1、7(1、14(1、25(1測定鹽脅迫下北美冬青的各項指標，隨機 選取每個處理的3片相同生長部位與朝向的成熟葉片進行葉綠素含量和熒光參數(shù)的測定， 并標記以便下一次測定。每個葉綠素含量和熒光參數(shù)測定3個重復(fù)。
[0018] 葉綠素含量的測定:采用葉綠素含量測定儀(YLS-3N)測定。
[0019] 葉片熒光參數(shù)的測定:各焚光參數(shù)采用PAM2500焚光儀測定。焚光測定采用熒光葉 室，黑暗適應(yīng)一晚，光化學(xué)活性光PFD為1400ymol/m 2s，光照時間30min，飽和閃光ΡΠ )為7200 ymol/m2s。測定前，均進行25mins以上的暗適應(yīng)。首先測定最小焚光產(chǎn)量(F〇)和最大焚光產(chǎn) 量(F m)，隨后打開活化光，強度為800μπι〇1 ?πΓ2。1，待熒光信號到達穩(wěn)定后（5~6mins)打開 飽和脈沖光，測定任意時間的實際焚光產(chǎn)量(F)和光適應(yīng)下的最大焚光產(chǎn)量(Fn/ );然后測 定快速光曲線，共11個光強梯度，每個光強照射20s后打開飽和脈沖光進行熒光淬滅分析， 記錄快速光響應(yīng)曲線。初始熒光產(chǎn)量(Fo)、最大熒光產(chǎn)量(Fm)、PSII最大光化學(xué)量子產(chǎn)量 (Fv/Fm)、PS Π 有效光化學(xué)量子產(chǎn)量(F'v/F'm)、光化學(xué)淬滅(qP)、非光化學(xué)淬滅(qN)、PS Π 實際光化學(xué)量子產(chǎn)量（〇psn)、PSn電子傳遞速率(ETR)均由PAM2500熒光儀自動給出。
[0020] 步驟三、數(shù)據(jù)分析：
[0021 ] 采用SPSS軟件進行統(tǒng)計分析，用Excel軟件進行數(shù)據(jù)處理，采用Sigmaplot 10.0作 圖，對測定后的數(shù)據(jù)進行處理并分析。
[0022]作為優(yōu)選，所述的步驟二中測定快速光曲線的11個光強梯度，分別為788、622、 47736612712011441101671^5411101-11^8^
[0023] 本發(fā)明的有益效果：與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提供的一種多胺對鹽脅迫下北美冬 青葉綠素?zé)晒馓匦缘挠绊懷芯糠椒ǎ軌蚩茖W(xué)合理地量化鹽脅迫對北美冬青葉片葉綠素含 量和熒光參數(shù)的影響，促進了解北美冬青在鹽脅迫下的響應(yīng)機制，同時進行了多胺對北美 冬青的生長進行了研究，表明了外源多胺可以有效緩減鹽脅迫對北美冬青的葉綠素?zé)晒馓?性，從而提高了光合作用，增加了北美冬青的耐鹽堿能力，為生長上進一步在沿海地區(qū)推廣 應(yīng)用起到了一定的理論指導(dǎo)作用，為北美冬青耐鹽性評價及抗鹽性篩選提供一定的理論依 據(jù)。
[0024] 本發(fā)明的特征及優(yōu)點將通過實施例結(jié)合附圖進行詳細說明。 【【附圖說明】】
[0025] 圖1是本發(fā)明實施例鹽脅迫對北美冬青葉片F(xiàn)o、FV/Fm、F'V/F'm、Y(II)、qP、qN和 ETR的影響分析圖。 【【具體實施方式】】
[0026] 為使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點更加清楚明了，下面通過附圖中及實施例，對 本發(fā)明進行進一步詳細說明。但是應(yīng)該理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發(fā) 明，并不用于限制本發(fā)明的范圍。此外，在以下說明中，省略了對公知結(jié)構(gòu)和技術(shù)的描述，以 避免不必要地混淆本發(fā)明的概念。
[0027] 本發(fā)明實施例提供一種多胺對鹽脅迫下北美冬青葉綠素?zé)晒馓匦缘挠绊懷芯糠?法，其特征在于:包括如下步驟：
[0028] 步驟一、設(shè)定處理：
[0029]選取生長健壯、無病蟲害、長勢基本一致的北美冬青四年生苗木，于智能實驗大棚 中進行栽培管理，每株苗木均栽培至盆中，常規(guī)管理養(yǎng)護1個月后進行鹽脅迫試驗，包括對 照在內(nèi)共設(shè)以下6種處理：
[0030] ①空白對照:CK;
[0031] ②多胺處理：0g · L-iNaCl+O · 5mmol · L_1Spd；
[0032] ③中鹽脅迫:4g · L-SaCl;
[0033] ④中鹽脅迫和多胺處理:4g · L-iNaCl+OAmmol · L-Spd;
[0034] ⑤重鹽脅迫:8g · L-SaCl;
[0035] ⑥重鹽脅迫和多胺處理:8g · L-SaCl+OAmmol · L-Spd;
[0036] 處理方法：
[0037] 每種處理重復(fù)4次，共24盆，每次澆施相隔Id，每盆澆施鹽溶液500mL，并通過花盆 下墊底盤回收外滲溶液，多胺Spd于葉面噴施至葉片沾濕即可。
[0038]步驟二、含量及參數(shù)的測定：
[0039] 在經(jīng)過步驟一處理后的0(1、7(1、14(1、25(1測定鹽脅迫下北美冬青的各項指標，隨機 選取每個處理的3片相同生長部位與朝向的成熟葉片進行葉綠素含量和熒光參數(shù)的測定， 并標記以便下一次測定。每個葉綠素含量和熒光參數(shù)測定3個重復(fù)。
[0040] 葉綠素含量的測定:采用葉綠素含量測定儀(YLS-3N)測定。
[0041] 葉片熒光參數(shù)的測定:各熒光參數(shù)采用PAM2500熒光儀測定。熒光測定采用熒光葉 室，黑暗適應(yīng)一晚，光化學(xué)活性光PFD為1400ymol/m 2s，光照時間30min，飽和閃光ΡΠ )為7200 ymol/m2s。測定前，均進行25mins以上的暗適應(yīng)。首先測定最小焚光產(chǎn)量(F〇)和最大焚光產(chǎn) 量(F m)，隨后打開活化光，強度為800μπι〇1 ?πΓ2。1，待熒光信號到達穩(wěn)定后（5~6mins)打開 飽和脈沖光，測定任意時間的實際焚光產(chǎn)量(F)和光適應(yīng)下的最大焚光產(chǎn)量(Fn/ );然后測 定快速光曲線，共11個光強梯度，分別為788、622、477、366、274、201、144、104、67、9、5μ mol · πΓ2^1，每個光強照射20s后打開飽和脈沖光進行熒光淬滅分析，記錄