一種髓過氧化物酶定量檢測的化學(xué)發(fā)光免疫分析方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及心腦血管疾病檢測領(lǐng)域，具體是一種髓過氧化物酶定量檢測的化學(xué)發(fā) 光免疫分析方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 髓過氧化物酶(myeloperoxidase，ΜΡ0)又稱過氧化物酶，是血紅素輔基的血紅素 蛋白酶，是血紅素過氧化物酶超家族成員之一。，存在于髓系細(xì)胞(主要是中性粒細(xì)胞和單 核細(xì)胞）的嗜苯胺藍(lán)顆粒中，是髓細(xì)胞的特異性標(biāo)志，隨著對ΜΡ0研究的深入，人們發(fā)現(xiàn)ΜΡ0 基因多態(tài)性導(dǎo)致個(gè)體對一些疾病易感性的差異，與人類多種疾病的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，因 此越來越受到國內(nèi)外學(xué)者的重視。髓過氧化物酶(ΜΡ0)是檢測冠狀動(dòng)脈疾病、急性冠脈綜合 征(ACS)的重要檢測標(biāo)志物，ΜΡ0可獨(dú)立預(yù)測健康人未來患心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)，權(quán)威雜志新 英格蘭醫(yī)學(xué)期刊在2003年報(bào)道了一項(xiàng)研究，通過檢測604名胸痛患者的ΜΡ0濃度水平，能預(yù) 測30天至6個(gè)月內(nèi)發(fā)生心血管事件的概率。
[0003] 因此，準(zhǔn)確的、定量的檢測ΜΡ0是臨床醫(yī)學(xué)迫切的需求，然而市場上使用的檢測試 劑盒為膠體金法、酶聯(lián)免疫法不具備定量功能，其檢測靈敏度、線性范圍也無法滿足ΜΡ0作 為預(yù)測心血管疾病的功能需求。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種髓過氧化物酶定量檢測的化學(xué)發(fā)光免疫分析方法，以 解決上述【背景技術(shù)】中提出的問題。
[0005] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：
[0006] -種髓過氧化物酶定量檢測的化學(xué)發(fā)光免疫分析方法，由酶標(biāo)板、標(biāo)準(zhǔn)品、樣本稀 釋液、濃縮洗滌液、反應(yīng)液和放光底物共同組成試劑盒進(jìn)行檢測，具體包括以下步驟：
[0007] (1)準(zhǔn)備：自4°C冰箱取出試劑，室溫平衡15分鐘；濃縮洗滌液以1: 20稀釋成工作 液；
[0008] (2)加樣定位:將樣品及標(biāo)準(zhǔn)品分別加入酶標(biāo)板，標(biāo)準(zhǔn)品各濃度各設(shè)一孔，另設(shè)一 孔作空白對照；
[0009] (3)加樣:樣品或標(biāo)準(zhǔn)品于相應(yīng)孔分別加100ul，每孔再各加反應(yīng)液100ul，在震蕩 器上混勻一分鐘，置37°C恒溫反應(yīng)60分鐘；
[0010 ](4)洗板:吸除板孔中的反應(yīng)液，各孔加入工作液約200u 1，靜置15-2 5秒，除去其中 液體;如此共洗五次，最后一遍將吸除板中液體拍盡；
[0011] (5)加底物:開啟化學(xué)發(fā)光檢測儀及主控制計(jì)算機(jī)，設(shè)定測定模式與參數(shù);將微孔 板置于化學(xué)發(fā)光檢測儀測定室，用加樣器加放光底物，每孔50ul，加放光底物時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生 氣泡；
[0012] (6)測定發(fā)光值:于加底物后的第10分鐘測定各孔的發(fā)光值RLU;并將數(shù)據(jù)用化學(xué) 發(fā)光檢測儀定量軟件進(jìn)行定量分析。
[0013] 作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：步驟(4)在吸除板孔中的反應(yīng)液后，用洗板機(jī)洗板五 次。
[0014] 作為本發(fā)明再進(jìn)一步的方案:步驟(5)中用內(nèi)置加樣器加放光底物。
[0015] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明靈敏度高，寬的線性動(dòng)力學(xué)范圍， 光信號(hào)持續(xù)時(shí)間長，分析方法簡便快速，結(jié)果穩(wěn)定、誤差小，安全性好及使用期長。
【附圖說明】
[0016] 圖1為髓過氧化物酶定量檢測的化學(xué)發(fā)光免疫分析方法的結(jié)構(gòu)示意圖。
[0017] 圖2為髓過氧化物酶定量檢測的化學(xué)發(fā)光免疫分析方法中靈敏度對比圖。
[0018] 圖3為髓過氧化物酶定量檢測的化學(xué)發(fā)光免疫分析方法中線性范圍對比圖。
【具體實(shí)施方式】
[0019] 下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例中的附圖，對本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完 整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；?本發(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他 實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。
[0020] 請參閱圖1，本發(fā)明實(shí)施例中，一種髓過氧化物酶定量檢測的化學(xué)發(fā)光免疫分析方 法，由酶標(biāo)板、標(biāo)準(zhǔn)品、樣本稀釋液、濃縮洗滌液、反應(yīng)液和放光底物共同組成試劑盒進(jìn)行檢 測，具體包括以下步驟：
[0021 ] (1)準(zhǔn)備：自4°C冰箱取出試劑，室溫平衡15分鐘；濃縮洗滌液以1: 20稀釋成工作 液；
[0022] (2)加樣定位:將樣品及標(biāo)準(zhǔn)品分別加入酶標(biāo)板，標(biāo)準(zhǔn)品各濃度各設(shè)一孔，另設(shè)一 孔作空白對照；
[0023] (3)加樣:樣品或標(biāo)準(zhǔn)品于相應(yīng)孔分別加100ul，每孔再各加反應(yīng)液100ul，在震蕩 器上混勻一分鐘，置37°C恒溫反應(yīng)60分鐘；
[0024] (4)洗板:吸除板孔中的反應(yīng)液，各孔加入工作液約200ul，靜置15-25秒，除去其中 液體;如此共洗五次，最后一遍將吸除板中液體拍盡;或在吸除板孔中的反應(yīng)液后，用洗板 機(jī)洗板五次；
[0025] (5)加底物:開啟化學(xué)發(fā)光檢測儀及主控制計(jì)算機(jī)，設(shè)定測定模式與參數(shù);將微孔 板置于化學(xué)發(fā)光檢測儀測定室，用加樣器或內(nèi)置加樣器加放光底物，每孔50ul，加放光底物 時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡;用內(nèi)置加樣器時(shí)，操作詳見化學(xué)發(fā)光檢測儀操作指南；
[0026] (6)測定發(fā)光值:于加底物后的第10分鐘測定各孔的發(fā)光值RLU;并將數(shù)據(jù)用化學(xué) 發(fā)光檢測儀定量軟件進(jìn)行定量分析。
[0027]本發(fā)明與其他方法的優(yōu)缺點(diǎn)對比表如下：
[0028]
[0030] 本發(fā)明解決了ΜΡ0臨床檢測準(zhǔn)確度不高的問題，化學(xué)發(fā)光法比市場上使用的更高 的靈敏度和檢測準(zhǔn)確度，同時(shí)具備定量檢測功能。
[0031] 免疫學(xué)檢測主要是利用抗原和抗體的特異性反應(yīng)進(jìn)行檢測的一種手段，由于其可 以利用同位素、酶、化學(xué)發(fā)光物質(zhì)等對檢測信號(hào)進(jìn)行放大和顯示，因此常被用于檢測蛋白 質(zhì)、激素等微量物質(zhì)?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析方法是在放射免疫分析(Radioimmunoassay，RIA) 和酶聯(lián)免疫分析(enzymeimm unoassay，EIA)兩種方法基礎(chǔ)上改進(jìn)的一種新方法，無放射性 和致畸物質(zhì)，兼具有以上兩種方法的優(yōu)點(diǎn)，且產(chǎn)品有效期長、對環(huán)境無污染、對人體無毒無 害，是目前體外診斷試劑檢測方法中的佼佼者，在技術(shù)上具有明顯的優(yōu)勢。
[0032]綜上所述，化學(xué)發(fā)光法檢測ΜΡ0試劑盒解決了臨床醫(yī)學(xué)對于ΜΡ0檢測的需求。
[0033] 當(dāng)該產(chǎn)品匹配專用化學(xué)發(fā)光免疫分析儀時(shí)，能夠達(dá)到最佳檢測效果。
[0034] 化學(xué)發(fā)光免疫分析能夠檢出膠體金免疫層析分析和酶聯(lián)免疫分析等方法無法檢 出的ΜΡ0,對心血管疾病的早期診斷具有十分重要的意義。最高靈敏度可達(dá)l(T 18m〇l/L。如圖 2所示。
[0035] 化學(xué)發(fā)光免疫分析能夠比膠體金免疫層析分析和酶聯(lián)免疫分析等方法檢測更準(zhǔn) 確，線性范圍可達(dá)0-1 〇5mo 1 /L。如圖3所示。
[0036] 對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，顯然本發(fā)明不限于上述示范性實(shí)施例的細(xì)節(jié)，而且在 不背離本發(fā)明的精神或基本特征的情況下，能夠以其他的具體形式實(shí)現(xiàn)本發(fā)明。因此，無論 從哪一點(diǎn)來看，均應(yīng)將實(shí)施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本發(fā)明的范圍由所附權(quán) 利要求而不是上述說明限定，因此旨在將落在權(quán)利要求的等同要件的含義和范圍內(nèi)的所有 變化囊括在本發(fā)明內(nèi)。不應(yīng)將權(quán)利要求中的任何附圖標(biāo)記視為限制所涉及的權(quán)利要求。
[0037]此外，應(yīng)當(dāng)理解，雖然本說明書按照實(shí)施方式加以描述，但并非每個(gè)實(shí)施方式僅包 含一個(gè)獨(dú)立的技術(shù)方案，說明書的這種敘述方式僅僅是為清楚起見，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng) 將說明書作為一個(gè)整體，各實(shí)施例中的技術(shù)方案也可以經(jīng)適當(dāng)組合，形成本領(lǐng)域技術(shù)人員 可以理解的其他實(shí)施方式。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種髓過氧化物酶定量檢測的化學(xué)發(fā)光免疫分析方法，其特征在于，由酶標(biāo)板、標(biāo)準(zhǔn) 品、樣本稀釋液、濃縮洗滌液、反應(yīng)液和放光底物共同組成試劑盒進(jìn)行檢測，具體包括以下 步驟： (1) 準(zhǔn)備：自4 °C冰箱取出試劑，室溫平衡15分鐘;濃縮洗滌液以1:20稀釋成工作液； (2) 加樣定位:將樣品及標(biāo)準(zhǔn)品分別加入酶標(biāo)板，標(biāo)準(zhǔn)品各濃度各設(shè)一孔，另設(shè)一孔作 空白對照； (3) 加樣:樣品或標(biāo)準(zhǔn)品于相應(yīng)孔分別加 lOOul，每孔再各加反應(yīng)液lOOul，在震蕩器上 混勻一分鐘，置37°C恒溫反應(yīng)60分鐘； (4) 洗板：吸除板孔中的反應(yīng)液，各孔加入工作液約200ul，靜置15-25秒，除去其中液 體;如此共洗五次，最后一遍將吸除板中液體拍盡； (5) 加底物:開啟化學(xué)發(fā)光檢測儀及主控制計(jì)算機(jī)，設(shè)定測定模式與參數(shù);將微孔板置 于化學(xué)發(fā)光檢測儀測定室，用加樣器加放光底物，每孔50ul，加放光底物時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣 泡； (6) 測定發(fā)光值:于加底物后的第10分鐘測定各孔的發(fā)光值RLU;并將數(shù)據(jù)用化學(xué)發(fā)光 檢測儀定量軟件進(jìn)行定量分析。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的髓過氧化物酶定量檢測的化學(xué)發(fā)光免疫分析方法，其特征在 于，步驟(4)在吸除板孔中的反應(yīng)液后，用洗板機(jī)洗板五次。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的髓過氧化物酶定量檢測的化學(xué)發(fā)光免疫分析方法，其特征在 于，步驟(5)中用內(nèi)置加樣器加放光底物。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種髓過氧化物酶定量檢測的化學(xué)發(fā)光免疫分析方法，由酶標(biāo)板、標(biāo)準(zhǔn)品、樣本稀釋液、濃縮洗滌液、反應(yīng)液和放光底物共同組成試劑盒進(jìn)行檢測，具體包括以下步驟：(1)準(zhǔn)備；(2)加樣定位；(3)加樣；(4)洗板；(5)加底物；(6)測定發(fā)光值。本發(fā)明靈敏度高，寬的線性動(dòng)力學(xué)范圍，光信號(hào)持續(xù)時(shí)間長，分析方法簡便快速，結(jié)果穩(wěn)定、誤差小，安全性好及使用期長。
【IPC分類】G01N33/573, G01N21/76
【公開號(hào)】CN105606595
【申請?zhí)枴緾N201610016695
【發(fā)明人】李志華, 段年豐
【申請人】杭州檢康生物技術(shù)有限公司
【公開日】2016年5月25日
【申請日】2016年1月12日