一種牛奶和奶粉中三聚氰胺的檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種檢測方法，具體涉及一種牛奶和奶粉中三聚氰胺的檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002]自2008年的“三鹿嬰幼兒奶粉事件”起，人們對乳制品安全問題產(chǎn)生了極大的關(guān)注，但牛奶和奶粉中的三聚氰胺事件仍頻頻發(fā)生、屢禁不止。因此，迫切需要發(fā)展簡便、高效的檢測方法，以滿足日益嚴(yán)峻的牛奶和奶粉制品中三聚氰胺檢測要求。目前，國內(nèi)外關(guān)于三聚氰胺的檢測方法，主要有高效液相色譜法(HPLC)、氣相色譜法、離子色譜法、氣質(zhì)聯(lián)用(GC-MS)以及液質(zhì)聯(lián)用(LC-MS)等，雖然這些方法可以準(zhǔn)確地檢測出牛奶和奶粉制品中的三聚氰胺，但都存在操作復(fù)雜、樣品處理時(shí)間長、無法快速篩查、檢測工作量大以及價(jià)格昂貴等問題。
[0003]咖啡環(huán)效應(yīng)是由Deegan等人率先提出的一種分離富集新現(xiàn)象,具有簡單、高效等特點(diǎn)?？Х拳h(huán)效應(yīng)不僅僅局限于咖啡溶液，還廣泛地存在于多種溶液體系中，通過咖啡環(huán)效應(yīng)的分離富集，可極大提高后續(xù)檢測的靈敏度到lmg/L甚至更高。
[0004]共聚焦顯微拉曼光譜是一種具有高分辨、高通量等優(yōu)點(diǎn)的微區(qū)分析技術(shù)，其光譜峰的位置、數(shù)量和強(qiáng)度信息直接反映了分子的構(gòu)成及構(gòu)象信息，可直接對不同形態(tài)的微區(qū)樣品進(jìn)行測試。通過有機(jī)結(jié)合咖啡環(huán)效應(yīng)的分離富集特性及拉曼光譜的精確檢測，可高通量檢測牛奶和奶粉制品中低濃度的三聚氰胺，因此具有十分廣闊的應(yīng)用前景。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]為解決上述問題，本發(fā)明提供了一種牛奶和奶粉中三聚氰胺的檢測方法，操作簡便、快速且結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好；可大大簡化檢測步驟，降低檢測成本，對提高監(jiān)管部門的工作效率、實(shí)現(xiàn)牛奶和奶粉的高通量檢查具有重大的社會效益。
[0006]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為:
[0007]—種牛奶和奶粉中三聚氰胺的檢測方法，包括如下步驟:
[0008]S1、用蒸餾水或純水配制不同濃度的三聚氰胺儲備液；
[0009]S2、將步驟SI制備的不同濃度的三聚氰胺儲備液分別加入本身不含三聚氰胺的牛奶或奶粉溶解液中，充分振蕩混勻得到混合液；
[0010]S3、將步驟S2所得的混合液與無水乙醇以適當(dāng)比例混合，振蕩均勻后，離心得到上層澄清提取液；
[0011]S4、將步驟S3所得的澄清提取液滴在基底上，室溫蒸發(fā)后得到咖啡環(huán)；
[0012]S5、對三聚氰胺進(jìn)行共聚焦顯微拉曼光譜檢測，得到其拉曼光譜；
[0013]S6、對步驟S4形成的咖啡環(huán)物質(zhì)進(jìn)行共聚焦顯微拉曼光譜檢測，得到其拉曼光譜圖；
[0014]S7、對比分析咖啡環(huán)物質(zhì)的拉曼譜峰位置及三聚氰胺的拉曼譜峰位置，判斷有無三聚氰胺存在。
[0015]所述的奶粉溶解液為奶粉的取樣量為Ig,放入25ml的燒杯中用蒸餾水或純水定容至1ml并磁力攪拌混勻得到溶解液。
[0016]所述步驟S2中所配置的混合液中三聚氰胺濃度分別為0mg/kg、lmg/kg、5mg/kg、10mg/kg、50mg/kg、100mg/kg、500mg/kg 和 1000mg/kg。
[0017]所述步驟S3中所用無水乙醇為99.7%，所述混合液與無水乙醇混合比例為1:2。
[0018]所述步驟S3可替換為取步驟S2所得的混合液加酸調(diào)節(jié)PH至蛋白質(zhì)變性析出。
[0019]所用酸為濃度為lmol/L的鹽酸,調(diào)節(jié)PH為4.7。
[0020]所述步驟S4中的基底為金屬片或金屬鍍膜玻璃。
[0021]本發(fā)明具有以下有益效果:
[0022]本發(fā)明充分結(jié)合了咖啡環(huán)效應(yīng)的分離富集特性和共聚焦顯微拉曼光譜的高分辨檢測，提供了一種簡便快捷、成本低且結(jié)果準(zhǔn)確的牛奶和奶粉中低濃度三聚氰胺的檢測新方法，只需通過正常蒸發(fā)過程即可實(shí)現(xiàn)低成本檢測。該方法有利于實(shí)現(xiàn)大批量低成本的快速篩查，為牛奶和奶粉制品中三聚氰胺的檢測提供了一種新技術(shù)手段。
【具體實(shí)施方式】
[0023]為了使本發(fā)明的目的及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0024]本發(fā)明的檢測原理為:
[0025]三聚氰胺具有不飽和鍵結(jié)構(gòu)，拉曼信號強(qiáng)度大，且特征譜峰尖銳，通過咖啡環(huán)效應(yīng)，可以使牛奶或奶粉制品中的物質(zhì)得到分離富集。用共聚焦顯微拉曼光譜判斷咖啡環(huán)上待測物質(zhì)的位置，并測定其拉曼光譜，通過與三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)樣品的譜峰比較判斷待測樣品中是否含有三聚氰胺。
[0026]本具體實(shí)施所使用的儀器設(shè)備為:
[0027]磁力攪拌器，離心機(jī)，pH計(jì)，共聚焦顯微拉曼光譜儀。可調(diào)移液器(1-50 μ L, 20-200 μ L, 100-1000 μ L)，移液器頭 20-200 μ L 和 100-1000 μ L, 25ml 燒杯，1ml
離心管。
[0028]所用試劑如下:
[0029](I)三聚氰胺粉末標(biāo)準(zhǔn)品，市售。
[0030](2)無水乙醇，99.7%，市售；鹽酸，11.9mol/L，市售。
[0031](3)金屬片，市售；鍍膜玻璃，自制。
[0032](4)蒸餾水或純水，市售。
[0033]實(shí)施例1
[0034]SI 1、牛奶處理方法如下:
[0035]分別取2ml含不同濃度三聚氰胺(l、5、10、50、100、500、1000mg/kg)的牛奶樣品至1ml離心管中，準(zhǔn)確加入無水乙醇4ml，充分振蕩混勻得到混合液。將混合液在離心機(jī)中離心5min后，取上層澄清提取液。
[0036]本方法的檢出限是lmg/kg。
[0037]S12、樣品咖啡環(huán)的制備
[0038]用移液器吸取得到的澄清提取液，滴于金屬基底或鍍膜玻璃基底上，室溫條件下蒸發(fā)后，得到待測樣品所形成的咖啡環(huán)。
[0039]S13、咖啡環(huán)物質(zhì)的共聚焦顯微拉曼光譜檢測
[0040]將得到的待測樣品所形成的咖啡環(huán)，置于共聚焦顯微拉曼光譜儀的顯微鏡下，觀察咖啡環(huán)物質(zhì)的分布，對咖啡環(huán)物質(zhì)進(jìn)行拉曼光譜檢測，得到咖啡環(huán)上不同區(qū)域的拉曼光譜圖。對比標(biāo)準(zhǔn)三聚氰胺樣品的共聚焦顯微拉曼光譜，根據(jù)譜峰位置找出三聚氰胺在咖啡環(huán)上的位置，并判斷三聚氰胺是否存在。
[0041]實(shí)施例2
[0042]S21、牛奶處理方法如下:
[0043]取1ml含不同濃度三聚氰胺(l、5、10、50、100、500、1000mg/kg)的牛奶樣品至25ml燒杯中。配制lmol/L的鹽酸(蒸餾水或純水稀釋)，向牛奶樣品中加入適量鹽酸，調(diào)節(jié)PH至4.7，使蛋白質(zhì)變性析出，充分振蕩混勻得到混合液。取混合液5ml置于1ml離心管中，離心機(jī)離心5min后，取上層澄清提取液。
[0044]本方法的檢出限是lmg/kg。
[0045]S22、樣品咖啡環(huán)的制備
[0046]用移液器吸取得到的澄清提取液，滴于金屬基底或鍍膜玻璃基底上，室溫條件下蒸發(fā)后，得到待測樣品所形成的咖啡環(huán)。
[0047]S23、咖啡環(huán)物質(zhì)的共聚焦顯微拉曼光譜檢測
[0048]取得到的待測樣品所形成的咖啡環(huán)，置于共聚焦顯微拉曼光譜儀的顯微鏡下，觀察咖啡環(huán)物質(zhì)的分布，對咖啡環(huán)物質(zhì)進(jìn)行拉曼光譜檢測，得到咖啡環(huán)上不同區(qū)域的拉曼光譜圖。對比標(biāo)準(zhǔn)三聚氰胺樣品的共聚焦顯微拉曼光譜，根據(jù)譜峰位置找出三聚氰胺在咖啡環(huán)上的位置，并判斷三聚氰胺是否存在。
[0049]實(shí)施例3
[0050]S31、奶粉處理方法如下:
[0051]取Ig奶粉樣品至25ml燒杯中，準(zhǔn)確加入蒸餾水或純水9ml，磁力攪拌得到溶解液。將不同濃度的三聚氰胺儲備液加入溶解液中，使其中三聚氰胺的濃度為1、5、10、50、100、500、1000mg/kg。配制lmol/L的鹽酸(蒸餾水或純水稀釋)，向含三聚氰胺的奶粉溶解液中加入適量鹽酸，調(diào)節(jié)PH至4.7，使蛋白質(zhì)變性析出，充分振蕩混勻得到混合液。取混合液5ml置于1ml離心管中，離心機(jī)離心5min，取上層澄清提取液。
[0052]本方法的檢出限是lmg/kg。
[0053]S32、樣品咖啡環(huán)的制備
[0054]用移液器吸取得到的澄清提取液，滴于金屬基底或鍍膜玻璃基底上，室溫條件下蒸發(fā)后，得到待測樣品所形成的咖啡環(huán)。
[0055]S33、咖啡環(huán)物質(zhì)的共聚焦顯微拉曼光譜檢測
[0056]取得到的待測樣品所形成的咖啡環(huán)，置于共聚焦顯微拉曼光譜儀的顯微鏡下，觀察咖啡環(huán)物質(zhì)的分布，對咖啡環(huán)物質(zhì)進(jìn)行拉曼光譜檢測，得到咖啡環(huán)上不同區(qū)域的拉曼光譜圖。對比標(biāo)準(zhǔn)三聚氰胺樣品的共聚焦顯微拉曼光譜，根據(jù)譜峰位置判斷三聚氰胺在咖啡環(huán)上的位置，并判斷三聚氰胺的存在。
[0057]綜上所述，本具體實(shí)施充分結(jié)合了咖啡環(huán)效應(yīng)的分離富集特性和共聚焦顯微拉曼光譜的高分辨檢測，提供了一種簡便快捷、成本低且結(jié)果準(zhǔn)確的牛奶和奶粉中低濃度三聚氰胺的檢測新方法，只需通過正常蒸發(fā)過程即可實(shí)現(xiàn)低成本檢測。該方法有利于實(shí)現(xiàn)大批量低成本的快速篩查，為牛奶和奶粉制品中三聚氰胺的檢測提供了一種新技術(shù)手段。
[0058]以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以作出若干改進(jìn)和潤飾，這些改進(jìn)和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種牛奶和奶粉中三聚氰胺的檢測方法，其特征在于，包括如下步驟: 51、用蒸餾水或純水配制不同濃度的三聚氰胺儲備液； 52、將步驟SI制備的不同濃度的三聚氰胺儲備液分別加入本身不含三聚氰胺的牛奶或奶粉溶解液中，充分振蕩混勻得到混合液； 53、將步驟S2所得的混合液與無水乙醇以適當(dāng)比例混合，振蕩均勻后，離心得到上層澄清提取液； 54、將步驟S3所得的澄清提取液滴在基底上，室溫蒸發(fā)后得到咖啡環(huán)； 55、對三聚氰胺進(jìn)行共聚焦顯微拉曼光譜檢測，得到其拉曼光譜； 56、對步驟S4形成的咖啡環(huán)物質(zhì)進(jìn)行共聚焦顯微拉曼光譜檢測，得到其拉曼光譜圖； 57、對比分析咖啡環(huán)物質(zhì)的拉曼譜峰位置及三聚氰胺的拉曼譜峰位置，判斷有無三聚氰胺存在。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種牛奶和奶粉中三聚氰胺的檢測方法，其特征在于，所述的奶粉溶解液為奶粉的取樣量為lg，放入25ml的燒杯中用蒸餾水或純水定容至1ml并磁力攪拌混勻得到溶解液。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種牛奶和奶粉中三聚氰胺的檢測方法，其特征在于，所述步驟S2中所配置的混合液中三聚氰胺濃度分別為0mg/kg、lmg/kg、5mg/kg、10mg/kg、50mg/kg、100mg/kg、500mg/kg 和 1000mg/kg。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種牛奶和奶粉中三聚氰胺的檢測方法，其特征在于，所述步驟S3中所用無水乙醇為99.7%，所述混合液與無水乙醇混合比例為1:2。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種牛奶和奶粉中三聚氰胺的檢測方法，其特征在于，所述步驟S3可替換為取步驟S2所得的混合液加酸調(diào)節(jié)PH至蛋白質(zhì)變性析出。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種牛奶和奶粉中三聚氰胺的檢測方法，其特征在于，所用酸為濃度為111101/1的鹽酸，調(diào)節(jié)？!1為4.7。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種牛奶和奶粉中三聚氰胺的檢測方法，其特征在于，所述步驟S4中的基底為金屬片或金屬鍍膜玻璃。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種牛奶和奶粉中三聚氰胺的檢測方法，本發(fā)明充分結(jié)合了咖啡環(huán)效應(yīng)的分離富集特性和共聚焦顯微拉曼光譜的高分辨檢測，提供了一種簡便快捷、成本低且結(jié)果準(zhǔn)確的牛奶和奶粉中低濃度三聚氰胺的檢測新方法，只需通過正常蒸發(fā)過程即可實(shí)現(xiàn)低成本檢測。該方法有利于實(shí)現(xiàn)大批量低成本的快速篩查，為牛奶和奶粉制品中三聚氰胺的檢測提供了一種新技術(shù)手段。
【IPC分類】G01N21/65
【公開號】CN105628669
【申請?zhí)枴緾N201410591241
【發(fā)明人】陳達(dá), 閆孟雨
【申請人】河北伊諾光學(xué)科技有限公司
【公開日】2016年6月1日
【申請日】2014年10月28日