抗病毒口服液的質(zhì)量檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種抗病毒口服液的質(zhì)量檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 抗病毒口服液收載于《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)第二冊(cè)》 WS3-(X-39)-92(z)，（中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會(huì)編，1992年出版），目前載入2015年 版《中國藥典》。產(chǎn)品為復(fù)方制劑，它是由板藍(lán)根129g、石膏57g、蘆根61g、地黃32g、郁金25g、 知母25g、石菖蒲25g、廣藿香29g、連翹46g的水提取物加藥用輔料和水制成1000ml的抗病毒 口服液。具有清熱祛濕，涼血解毒之功效，臨床上用于風(fēng)熱感冒、溫病發(fā)熱引起的上呼吸道 感染、流感及流行性腮腺炎等病毒感染性疾患，療效顯著。
[0003] 復(fù)方中成藥由多味藥材提取而成，有效成分復(fù)雜，建立較為全面的產(chǎn)品質(zhì)量評(píng)價(jià) 方法，提高質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，是保證產(chǎn)品療效的主要方法之一。有效成分的含量與藥材的產(chǎn)地、采 集時(shí)間、保存質(zhì)量，藥材的提取方法和工藝控制條件等多種因素有關(guān)，如板藍(lán)根是該藥物處 方中的君藥，其藥材質(zhì)量與活性成分含量有密切關(guān)系，板藍(lán)根有南板藍(lán)根和北板藍(lán)根，其所 含的有效成分又不同。北板藍(lán)根來源于十字花科植物菘蘭，含抗病毒的特征性成分(R，S)_ 告依春(又稱表告依春）。南板藍(lán)根來源于爵床科植物馬藍(lán)，不含(R，S)_告依春，其抗病毒的 藥理活性遠(yuǎn)低于北板藍(lán)根。連翹根據(jù)其采收期不同，可分為青翹和老翹兩種，但均為連翹。 果實(shí)初熟尚帶綠色時(shí)采收，用沸水煮片刻或蒸熟后曬干，習(xí)稱"青翹"；果實(shí)熟透時(shí)采收曬 干，習(xí)稱"老翹"。近年來的研究表明，青翹中總黃酮、連翹酯苷類成分、連翹苷含量都高于老 翹。石膏知母相須為用，取知母清熱去火，生津潤燥之功。芒果苷為知母主要成分之一，具有 抗病毒活性。目前抗病毒口服液生產(chǎn)企業(yè)眾多，導(dǎo)致產(chǎn)品質(zhì)量魚龍混雜，甚至有的企業(yè)產(chǎn)品 不按標(biāo)準(zhǔn)要求投料，則產(chǎn)品的質(zhì)量就更無法保證在臨床治療效果。
[0004] 中國專利CN201010183008公開了一種抗病毒口服液的質(zhì)量檢測(cè)方法，其通過HPLC 一次性對(duì)抗病毒口服液中的（R，S)_告依春、連翹苷、連翹酯苷A、連翹酯素四個(gè)成分進(jìn)行了 含量測(cè)定。但是在實(shí)際應(yīng)用中連翹酯苷A的分離度不佳，方法重現(xiàn)性差異較大，不便于推廣 應(yīng)用;并且其所選擇的活性成分僅來自于復(fù)方中的板藍(lán)根和連翹，對(duì)復(fù)方的活性表征不具 有代表性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種抗病毒口服液的質(zhì)量檢測(cè)方法，其通過HPLC方法對(duì) 所述口服液中（R，S)_告依春、芒果苷、連翹酯苷I、連翹酯苷H、連翹酯苷A、松脂酚-4-0-葡萄 糖苷和連翹苷七個(gè)活性成分進(jìn)行含量測(cè)定。
[0006] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述HPLC方法中，流動(dòng)相為三相，分別為含0.1 %磷 酸的水(v/ν)、甲醇和乙腈。
[0007] 在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，在每毫升的抗病毒口服液中（R，S)_告依春不低于 l〇yg，芒果苷不低于l〇yg，連翹酯苷I不低于l〇〇yg，連翹酯苷Η不低于12〇yg，連翹酯苷A不低 于lOOyg，松脂酸-4-0-葡萄糖苷不低于3〇yg，連翹苷不低于5〇yg。
[0008] 在本發(fā)明具體的實(shí)施方案中，所述HPLC的具體條件為：以十八烷基硅烷鍵合硅膠 為填充劑;洗脫是以含0.1%磷酸的水(v/ν)、甲醇和乙腈組成的流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，檢測(cè) 波長為254nm，流速為lml/min，柱溫30°C ;具體洗脫程序如下表所示：
[0009]
[0010] 在本發(fā)明中，所述抗病毒口服液的質(zhì)量檢測(cè)方法還包括對(duì)照品溶液制備、供試品 溶液的制備和根據(jù)峰面積計(jì)算成分含量等步驟;具體如下：
[0011] 對(duì)照品溶液制備:取(R，S)-告依春，芒果苷，連翹酯苷A、H、I，松脂酚-4-0-葡萄糖 苷，連翹苷對(duì)照品適量，精密稱定，分別置l〇ml量瓶，加70%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻， 得到(R，S)_告依春，芒果苷，連翹酯苷I、H、A，松脂酚-4-0-葡萄糖苷，連翹苷濃度為2.31mg/ ml，0· 30mg/ml，7· llmg/ml，8·05mg/ml，7· 50mg/ml，2·01mg/ml，2·88mg/ml的對(duì)照品儲(chǔ)備液。
[0012] 精密量取(R，S)_告依春，芒果苷，連翹酯苷I、H、A，松脂酚-4-0-葡萄糖苷，連翹苷 對(duì)照品溶液2ml，6ml，4ml，3ml，4ml，6ml，2ml置20ml量瓶，加70 %甲醇稀釋至刻度，搖勻，得 混合對(duì)照品母液。
[0013] 供試品溶液的制備:精密量取本品25ml，用飽和正丁醇萃取4次，每次25ml，合并正 丁醇層，蒸干，殘?jiān)?0%甲醇溶解，置10ml量瓶中，用70%甲醇定容至刻度，搖勻，即得。
【附圖說明】
[0014] 圖1:本發(fā)明實(shí)施例2的高效液相圖譜，峰1為(R，S)_告依春，峰2為芒果苷，峰3為連 翹酯苷I，峰4為連翹酯苷Η，峰5為連翹酯苷A，峰6為松脂酚-4-0-葡萄糖苷，峰7為連翹苷；
[0015] 圖2:0.1 %磷酸水和乙腈二相流動(dòng)相系統(tǒng)獲得的高效液相圖譜，峰1為(R，S)_告依 春，峰2為芒果苷。
【具體實(shí)施方式】
[0016] 下面將進(jìn)一步的舉例如圖1-2來詳細(xì)說明本發(fā)明。需要指出的是，以下說明僅僅是 對(duì)本發(fā)明要求保護(hù)的技術(shù)方案的舉例說明，并非對(duì)這些技術(shù)方案的任何限制。本發(fā)明的保 護(hù)范圍以所附權(quán)利要求書記載的內(nèi)容為準(zhǔn)。
[0017]實(shí)施例!抗病毒口服液的制備
[0018]處方:板藍(lán)根129g、石膏57g、蘆根61g、地黃32g、郁金25g、知母25g、石菖蒲25g、廣 藿香29g、連翹46g。
[0019] 制法：以上九味藥材，加水提取二次，第一次加8倍量水，煎煮3小時(shí)，同時(shí)收集揮發(fā) 油及揮發(fā)油乳濁液，加入羥丙基-β_環(huán)糊精包合;第二次加6倍量水，煎煮1小時(shí)20分鐘，合并 煎煮液，濃縮至相對(duì)密度1.08 (60 °C )，加85 %以上的乙醇使含醇量達(dá)70 %，靜置24小時(shí)，濾 過，收集濾液，將濾液減壓回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度1.10(60°C)，濾過，加入揮發(fā)油包合物 及蜂蜜、蔗糖，等，補(bǔ)加純化水至l〇〇〇ml，混勻，濾過至澄清，灌封，滅菌，即得。
[0020] 藥材來源：
[0021 ]板藍(lán)根:為十字花科植物菘藍(lán)的干燥根，黑龍江產(chǎn)。
[0022]連翹:為木犀科植物連翹的干燥果實(shí)，秋季果實(shí)初熟尚帶綠色時(shí)采收，習(xí)稱青翹， 山
[0023] 西產(chǎn)。
[0024] 石膏:為硫酸鹽類礦物硬石膏族石膏。
[0025] 蘆根:為禾本科植物蘆葦?shù)母稍锔o，河北產(chǎn)。
[0026] 地黃:為生地黃，玄參科植物地黃的干燥塊根，河南產(chǎn)。
[0027]郁金:為姜科植物姜黃的干燥塊根，習(xí)稱"黃絲郁金"，四川產(chǎn)。
[0028]知母:百合科植物知母的干燥根莖，河北產(chǎn)。
[0029]石菖蒲:為天南星科植物石菖蒲的干燥根莖，浙江產(chǎn)。
[0030]廣藿香:為唇形科植物廣藿香的干燥地上部分，廣州產(chǎn)。
[0031] 實(shí)施例2抗病毒口服液的質(zhì)量檢測(cè)
[0032] 1)對(duì)照品溶液制備:取(R，S)-告依春，芒果苷，連翹酯苷A、H、I，松脂酚-4-0-葡萄 糖苷，連翹苷對(duì)照品適量，精密稱定，分別置l〇ml量瓶，加70%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖 勻，得到（R，S)_告依春，芒果苷，連翹酯苷I、H、A，松脂酚-4-0-葡萄糖苷，連翹苷濃度為 2 · 3 lmg/ml，0 · 30mg/ml，7 · 1 lmg/ml，8 · 05mg/ml，7 · 50mg/ml，2 · 0 lmg/ml，2 · 88mg/ml 的對(duì)照品 儲(chǔ)備液。
[0033] 精密量取(R，S)_告依