一種硅噻菌胺殘留量的gc-ms/ms測(cè)定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種娃嚷菌胺殘留量的GC-MS/MS測(cè)定方法，更具體地說是采用氣相色 譜串聯(lián)質(zhì)譜(GC-MS/MS)定性定量測(cè)定糧谷、豬肉、牛肉、羊肉、雞肉等動(dòng)物肌肉及制品等復(fù) 雜基質(zhì)的動(dòng)植物源性食品中殘留的娃嚷菌胺含量的方法，屬于農(nóng)藥殘留量的測(cè)定技術(shù)領(lǐng) 域。
【背景技術(shù)】
[0002] 娃嚷菌胺(通用名：Silthiof am,試驗(yàn)代號(hào):Mon65500，商品名稱:Latitude，其他名 稱：Silthio地am),是由孟山都公司開發(fā)的酷胺類殺菌劑。主要用作種子處理，防治谷物上 的全蝕病?；瘜W(xué)名稱:N-締丙基-4,5-二甲基-2-(立甲基娃基)嚷吩-3-甲酯胺，英文名稱:N-al lyl-4,5-dimethy 1-2-( trimethylsiIyl )thiophene-3-carboxamide ,CAS登錄號(hào)： 175217-20-6，化學(xué)結(jié)構(gòu)式為：
外觀為白色晶狀粉末;烙點(diǎn)：86.1~88.3°C ;沸點(diǎn)>280°C ;蒸汽壓8.1 X 10ImPa(20°C) 分配系數(shù)：Kowlo評(píng)=3.72 (20 °C ); Henry常數(shù)5.4 X 10-1 化 m3mol-l;溶解度：水39.9mg/L (20°C)，正己燒15.5g/L(20°C)，對(duì)二甲苯、1，2-二氯乙燒、甲醇、丙酬、乙酸乙醋均>250g/L (20°C);穩(wěn)定性 iDl'SOeicKp冊(cè)），448d(pH7)，314d(pH9)(25°C)。
[0003] 娃嚷菌胺是由孟山都公司1993-94年發(fā)現(xiàn)、并于1998年在英國(guó)布賴頓植保會(huì)議上 介紹的新穎殺菌劑，可能是ATP抑制劑，抑制能量(ATP)從線粒體向細(xì)胞溶質(zhì)的傳遞。具有良 好的保護(hù)活性，殘效期長(zhǎng)。持效期長(zhǎng)，用作種子處理劑。1994年，娃嚷菌胺在歐盟進(jìn)入田間試 驗(yàn)階段，1999年在愛爾蘭首先獲準(zhǔn)登記，繼而在歐盟其他國(guó)家、中國(guó)、南非等取得進(jìn)一步的 登記。2004年1月1日，娃嚷菌胺列入歐盟農(nóng)藥登記指令(91/414)附錄1，其登記資料因此獲 得了運(yùn)一天起算的10年期的保護(hù)權(quán)。娃嚷菌胺的主要適用作物有:大麥、黑小麥和小麥等。 其主要市場(chǎng)包括:比利時(shí)、智利、中國(guó)、捷克共和國(guó)、丹麥、法國(guó)、德國(guó)、愛爾蘭、波蘭、南非、瑞 典和英國(guó)等，具有很廣闊的應(yīng)用前景。
[0004] 隨著娃嚷菌胺的登記、推廣和使用，作為我國(guó)主要出口市場(chǎng)的歐盟等國(guó)家制定了 其在蔬菜、水果、糧谷和畜產(chǎn)品等食品農(nóng)產(chǎn)品中的最大允許殘留量(M化），M化允許值很嚴(yán) 格，M化范圍為:0.01~0.05mg/kg，歐盟、日本等國(guó)家規(guī)定若田間使用農(nóng)藥沒有在該國(guó)家登 記，沒有制定相應(yīng)的殘留限量標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，出口至其國(guó)家的食品農(nóng)產(chǎn)品包括畜禽肉等動(dòng)物源性 食品中殘留限量均實(shí)行0.0 lmg/L的"一律標(biāo)準(zhǔn)"。
[0005] 現(xiàn)階段，對(duì)娃嚷菌胺殘留量測(cè)定方法的研究較少，報(bào)道的檢測(cè)方法主要為蔬菜和 水果中娃嚷菌胺殘留檢測(cè)方法，運(yùn)些檢測(cè)方法均采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜化C-MS/MS)測(cè)定蔬 菜和水果中娃嚷菌胺殘留量的檢測(cè)方法，使用LC-MS/MS巧憶食品農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留具有快 速、簡(jiǎn)便、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，但由于其價(jià)格較昂貴，很多檢測(cè)機(jī)構(gòu)、企業(yè)或科研院所未配置該 儀器或配置臺(tái)數(shù)較少，由于不同的化合物采用LC-MS/MS檢測(cè)時(shí)，需使用不同的流動(dòng)相或色 譜柱，運(yùn)樣需要不斷更換色譜柱、流動(dòng)相并耗費(fèi)比較長(zhǎng)的時(shí)間對(duì)系統(tǒng)進(jìn)行平衡，運(yùn)一定程度 上制約了 LC-MS/MS的應(yīng)用。使用氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(GC-MS/MS)分析食品農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留 具有快速、簡(jiǎn)便、靈敏度高、選擇性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，可實(shí)現(xiàn)幾百種農(nóng)藥的多殘留分析，但迄今為止 未見食品農(nóng)產(chǎn)品中娃嚷菌胺殘留量的GC-MS/MS檢測(cè)方法的報(bào)道，由于糧谷、動(dòng)物源性食品 等食品農(nóng)產(chǎn)品基質(zhì)比較復(fù)雜，須建立凈化效果良好的樣品前處理方法和儀器分析條件才能 滿足檢測(cè)要求，因此，建立氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(GC-MS/MS)定性和定量分析糧谷和動(dòng)物源性 食品中娃嚷菌胺殘留量的檢測(cè)方法具有重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種娃嚷菌胺殘留量的GC-MS/MS測(cè)定方法，主要用于測(cè)定糧 谷、動(dòng)物源性食品等復(fù)雜基質(zhì)食品農(nóng)產(chǎn)品中娃嚷菌胺殘留量。
[0007] 為實(shí)現(xiàn)W上目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：一種娃嚷菌胺殘留量的GC-MS/MS 測(cè)定方法，包括如下步驟：
[000引（1)提取 稱取混勻樣品于具塞離屯、管中，加入適量水復(fù)蘇后，定量加入乙臘或含1%乙酸的乙臘 溶液均質(zhì)或振蕩超聲提取，然后加入氯化鋼或乙酸鋼中的一種和無水硫酸儀，劇烈滿旋 Imin后離屯、。
[0009] (2)凈化 移取一定體積樣品提取液，濃縮至ImL左右，經(jīng)Cis/PSA固相萃取柱凈化，乙臘洗脫，收 集洗脫液，取部分洗脫液濃縮至干后，用體積比為1/1的丙酬/正己燒混合溶劑溶解定容，過 膜后，待氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(GC-MS/MS)檢測(cè)。
[0010] (3)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制 將不含娃嚷菌胺的同種類基質(zhì)空白樣品按上述步驟（1)、（2)處理時(shí)，得樣品提取凈化 殘?jiān)?，加入適量溶劑和標(biāo)準(zhǔn)溶液，滿旋混勻，配制成至少3個(gè)濃度的娃嚷菌胺系列標(biāo)準(zhǔn)工作 液。
[0011] (4)氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法(GC-MS/MS)測(cè)定 將步驟(3)中的各濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)行GC-MS/MS測(cè)定，W標(biāo)準(zhǔn)工作液的色譜峰 面積對(duì)其相應(yīng)濃度進(jìn)行回歸分析，得到標(biāo)準(zhǔn)工作曲線;在相同條件下將步驟(2)中凈化后的 樣品液注入GC-MS/MS進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得樣品液中娃嚷菌胺的色譜峰面積，代入標(biāo)準(zhǔn)工作曲線， 得到樣品液中娃嚷菌胺含量，然后根據(jù)樣品液所代表試樣的質(zhì)量計(jì)算得到樣品中娃嚷菌胺 殘留量。若上機(jī)溶液中娃嚷菌胺殘留量超過線性范圍上限，需用定容溶劑將上機(jī)溶液濃度 稀釋至線性范圍之內(nèi)。
[0012] 步驟(1)中樣品若為含水量較少的樣品，提取前須加適量水充分浸潤(rùn)。
[0013] 步驟(1)中采用乙臘提取時(shí)加入氯化鋼鹽析，采用含1%乙酸的乙臘溶液提取時(shí)加 入乙酸鋼鹽析。
[0014] 步驟(2)中進(jìn)行Cis/PSA固相萃取凈化，乙臘洗脫時(shí)，洗脫體積為6~8血。
[0015] 步驟(4)中氣相色譜條件為:色譜柱:HP-5MS毛細(xì)管色譜柱，柱長(zhǎng)30m，內(nèi)徑0.25mm， 膜厚0.25皿;進(jìn)樣口溫度250°C ;載氣：He，不分流模式進(jìn)樣，進(jìn)樣量：1化;恒流模式，流速 1.2mL/min;升溫程序:初溫60°C保持2min，W每分鐘20°C的速度升至200°C，然后W每分鐘2 °C的速度升至220°C，再W每分鐘20°C的速度升至280°C，保持IOmin;傳輸線溫度:290°C。
[0016] 步驟(4)中質(zhì)譜條件為：電離模式：電子轟擊電離化I，70eV);離子源溫度280°C;碰 撞氣:氣氣;多反應(yīng)監(jiān)測(cè)掃描方式MRM，監(jiān)測(cè)參數(shù)為：
[0017] 步驟(4)中測(cè)定樣液和基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液時(shí)，若樣液中農(nóng)藥色譜峰保留時(shí)間與標(biāo) 準(zhǔn)溶液中相應(yīng)農(nóng)藥保留時(shí)間相一致，并且在扣除背景后的樣品質(zhì)譜圖中，所選擇的離子均 出現(xiàn)，而且離子豐度比與標(biāo)準(zhǔn)溶液的離子豐度比相一致，則可判斷樣液中存在運(yùn)種農(nóng)藥;若 上述兩個(gè)條件不能同時(shí)滿足，則判斷不含該種農(nóng)藥。
[0018] 本發(fā)明的有益效果在于：
[0019] 本發(fā)明利用分散固相萃取技術(shù)，建立了簡(jiǎn)便、快速并能有效避免樣品中基質(zhì)干擾 的樣品前處理方法，將此前處理方法結(jié)合GC-MS/MS應(yīng)用于糧谷、動(dòng)物源性食品中娃嚷菌胺 定性確證和定量檢測(cè)，平均回收率為87.4%~91.9%，平均相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為4.8%~ 6.9%，檢出限低于0.06化g/kg，具有操作簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確、靈敏度高及重復(fù)性好的優(yōu)點(diǎn)。能 滿足美國(guó)、歐盟、日本等國(guó)家對(duì)相應(yīng)產(chǎn)品安全檢測(cè)的技術(shù)要求，為保障我國(guó)人民食品安全及 對(duì)外出口貿(mào)易健康發(fā)展提供有力的技術(shù)支撐。
【附圖說明】
[0020] 圖1為添加在空白豬肉基質(zhì)中的娃嚷菌胺標(biāo)液的GC-MS/MS選擇離子色譜圖。
[0021] 圖2為不含娃嚷菌胺的豬肉空白樣品的GC-MS/MS選擇離子色譜圖。
[0022] 圖3為W不含娃嚷菌胺的豬肉空白樣品為基質(zhì)配制的娃嚷菌胺標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。
【具體實(shí)施方式】
[0023] 現(xiàn)W W下實(shí)施實(shí)例來說明本發(fā)明，但并不是限制本發(fā)明的范圍。
[0024] 實(shí)施例中使用的儀器與試劑
[0025] TlSBasic均質(zhì)器（IKA，Germany) ;CR21G虹離屯、機(jī)（日立Japan) ;MS3基本型旋滿混 合器（IKA，Germany);TurboVapLV型樣品自動(dòng)濃縮儀（Caliper，USA);7890N氣相色譜-5977C質(zhì)譜儀(Agilent,USA) ;Cis/PSA固相萃取柱(6mL，500mg/500mg)購于天津博納艾杰爾 科技有限公司。
[0026] 試劑
[0027]乙臘、丙酬、正己燒（HPLC級(jí)，Merke，Germany);乙酸（HPLC級(jí)，CNW，Germany);無水 硫酸儀、氯化鋼和乙酸鋼為分析純，均購自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。
[00巧]標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：純度99.5%，購自德國(guó)化.E虹enstorfer公司。
[0029] 實(shí)施例1:小麥中娃嚷菌胺殘留量的檢測(cè)
[0030] (1)樣品前處理
[0031] 提取 稱取經(jīng)充分混勻的5g小麥樣品（研磨成面粉)于50mL離屯、管中，加入20mL水復(fù)蘇30min 后，準(zhǔn)確加入20mL含1 %乙酸的乙臘溶液，振蕩提取20min，超聲提取5min，加入3g無水硫酸 儀和2g乙酸鋼，滿旋Imin后，7000;r/min離屯、5min。離屯、后，取SmL乙臘提取液于40°C旋蒸或 氮?dú)獯抵两?，加入ImL乙臘滿旋后，待凈化。
[0032] 凈化 用5mL乙臘預(yù)洗Cis/PSA固相萃取柱，當(dāng)液面到達(dá)吸附劑的頂部時(shí)，將上述提取溶液轉(zhuǎn) 入柱中，用2mL乙臘洗涂試管，并將洗涂液移入SPE柱中，待溶液達(dá)到吸附劑頂部時(shí)，加入4mL 乙臘至柱子上進(jìn)行洗脫，洗脫液全部接收到定量試管中，用乙臘定容至lOmL，取ImL凈化液 用氮?dú)獯蹈珊?，用體積比為1/1的丙酬/正己燒混合溶劑定容至ImL,過0.22皿濾膜后，待GC-MS/MS測(cè)定。
[0033] (2)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制 準(zhǔn)確稱取25 ± 0.1 mg標(biāo)準(zhǔn)品于25mL容量瓶中，用乙臘溶解，定容得1000.0 j