一種氟唑菌苯胺殘留量的gc-ms/ms快速測(cè)定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種氣挫菌苯胺殘留量的GC-MS/MS快速測(cè)定方法，更具體地說(shuō)是采用 氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(GC-MS/MS)定性定量測(cè)定豬肉、牛肉、羊肉、雞肉等動(dòng)物肌肉及制品等脂 肪含量高的動(dòng)物源性食品中殘留的氣挫菌苯胺含量的方法，屬于農(nóng)藥殘留量的測(cè)定技術(shù)領(lǐng) 域。
【背景技術(shù)】
[0002] 氣挫菌苯胺是由己斯夫公司開(kāi)發(fā)的班巧酸脫氨酶抑制劑類(lèi)殺菌劑，通用名： penflufen;試驗(yàn)代號(hào):BYF14182;化學(xué)名稱(chēng):N-[2-(l，3-二甲基下基)苯基]-5-氣-1,3-二甲 基-IH-化挫-4-甲酯胺；外觀:灰白色粉末狀固體;烙點(diǎn)：11 TC ;沸點(diǎn)：沸點(diǎn)前分解;分解溫 度:320°C ;蒸氣壓：1.2 X l〇-6pa(25°C);分配系數(shù):Kow Io評(píng)=3.3(20°C，PH=7);亨利常數(shù)： 1.05 X 1 〇-中曰? m12 ? mo 1 -1 (25°C)。溶解度:在水中的溶解度為10.9mg/L(20°C);在正己燒中 的溶解度為1.6g/L，甲苯中為62g/L，丙酬中為139g/L，甲醇中為126g/L，乙酸乙醋中為96g/ 1，二甲亞諷中為162邑/1(^上均為20°(：);〔45登錄號(hào)：494793-67-8。相對(duì)分子質(zhì)量317.41; 分子式C18H24FN3O,化學(xué)結(jié)構(gòu)式為：
氣挫菌苯胺是拜耳公司開(kāi)發(fā)的又一個(gè)化挫酷胺類(lèi)殺菌劑，于2006年申請(qǐng)專(zhuān)利，主 要用于種子處理，對(duì)多種植物病原真菌具有良好活性。該殺菌劑為班巧酸脫氨酶(SDH)抑制 劑，主要作用于呼吸鏈電子傳遞復(fù)合體n，阻斷能量代謝。經(jīng)過(guò)處理后的種子在萌發(fā)過(guò)程中 可W吸收氣挫菌苯胺，并通過(guò)木質(zhì)部傳導(dǎo)到植物體的其他部位，從而起到保護(hù)作物的作用。 氣挫菌苯胺是一個(gè)種子處理殺菌劑，用于馬鈴馨、玉米、水稻、棉花、小麥、大麥、首猜、蔬菜、 豆類(lèi)W及油菜等種子，可W防治種傳、±傳的擔(dān)子菌和子囊菌病害，主要有絲核菌 (化izoctonia spp.)和黑粉菌素化Stilago spp.)等引起的馬鈴馨黑捷病、小麥紋枯病、水 稻紋枯病、油菜菌核病、小麥散黑穗病、小麥腥黑穗病、玉米小斑病等病害?？膳c丙硫菌挫、 甲霜靈、嚷蟲(chóng)胺、朽菌醋等復(fù)配，不僅可W防治病蟲(chóng)害，還可W延緩抗性產(chǎn)生與發(fā)展。氣挫菌 苯胺于2011年在英國(guó)獲得首個(gè)全球登記，2012年又在美國(guó)和加拿大取得其登記批準(zhǔn)，在澳 大利亞及很多國(guó)家獲得登記，具有很廣闊的應(yīng)用前景。 2 隨著氣挫菌苯胺的登記、推廣和使用，作為我國(guó)主要出口市場(chǎng)的美國(guó)等國(guó)家制定 了其在蔬菜、水果、糧谷和畜產(chǎn)品等食品農(nóng)產(chǎn)品中的最大允許殘留量(M化），2012年5月14 日，美國(guó)新增對(duì)農(nóng)藥戊苯化菌胺(Penflufen)的殘留限量要求，殘留限量要求規(guī)定如下：
斷盟、H本導(dǎo)圖豕規(guī)足若田間便用農(nóng)約巧巧巧該圖豕登記，巧巧制足相應(yīng)的斌留限量 標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，出口至其國(guó)家的食品農(nóng)產(chǎn)品包括畜禽肉等動(dòng)物源性食品中殘留限量均實(shí)行 O. Olmg/L的"一律標(biāo)準(zhǔn)"。
[0005] 現(xiàn)階段，對(duì)氣挫菌苯胺殘留量測(cè)定方法的研究較少，報(bào)道的檢測(cè)方法主要為蔬菜 和水果中氣挫菌苯胺殘留檢測(cè)方法，運(yùn)些檢測(cè)方法均采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)測(cè) 定蔬菜和水果中氣挫菌苯胺殘留量的檢測(cè)方法，使用LC-MS/MS測(cè)定食品農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留 具有快速、簡(jiǎn)便、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，但由于其價(jià)格較昂貴，很多檢測(cè)機(jī)構(gòu)、企業(yè)或科研院所未 配置該儀器或配置臺(tái)數(shù)較少，由于不同的化合物采用LC-MS/MS檢測(cè)時(shí)，需使用不同的流動(dòng) 相或色譜柱，運(yùn)樣需要不斷更換色譜柱、流動(dòng)相并耗費(fèi)比較長(zhǎng)的時(shí)間對(duì)系統(tǒng)進(jìn)行平衡，運(yùn)一 定程度上制約了 LC-MS/MS的應(yīng)用。使用氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(GC-MS/MS)分析食品農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng) 藥殘留具有快速、簡(jiǎn)便、靈敏度高、選擇性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，可實(shí)現(xiàn)幾百種農(nóng)藥的多殘留分析，但迄 今為止未見(jiàn)食品農(nóng)產(chǎn)品中氣挫菌苯胺殘留量的GC-MS/MS檢測(cè)方法的報(bào)道，但迄今為止未見(jiàn) 食品農(nóng)產(chǎn)品中氣挫菌苯胺殘留量的GC-MS/MS檢測(cè)方法的報(bào)道。另外，眾所周知，如E化邸S前 處理技術(shù)已成為農(nóng)藥殘留分析中應(yīng)用最廣的樣品前處理方法，但如E化邸S方法主要適用于 低脂肪含量的高含水基質(zhì)，如大部分的水果蔬菜，在面對(duì)高脂肪含量基質(zhì)時(shí)能力有限，一般 需要增加正己燒除脂、冷凍樣品提取液去脂等步驟，但效果有限。近年來(lái)有些公司推出了增 強(qiáng)型脂質(zhì)去除專(zhuān)利產(chǎn)品-Enhanced Matrix Removal ,EMR-lipid，主要用于去除具有直鏈控 類(lèi)結(jié)構(gòu)的脂類(lèi)干擾物，包括游離脂肪酸、膽固醇、甘油=醋、憐脂等。該產(chǎn)品已被制成基質(zhì)固 相分散萃取劑，經(jīng)水活化后可直接通過(guò)分散固相萃取流程對(duì)提取液中的脂類(lèi)雜質(zhì)進(jìn)行去 除，本發(fā)明應(yīng)用該前處理方法凈化動(dòng)物源性食品時(shí)發(fā)現(xiàn)，該方法簡(jiǎn)單高效、對(duì)脂類(lèi)物質(zhì)去除 效果好，建立EMR基質(zhì)分散凈化、氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(GC-MS/MS)定性和定量分析動(dòng)物源性食 品中氣挫菌苯胺殘留量的檢測(cè)方法具有重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種氣挫菌苯胺殘留量的GC-MS/MS快速測(cè)定方法，主要用于 測(cè)定動(dòng)物源性食品等脂肪含量高的食品農(nóng)產(chǎn)品中氣挫菌苯胺殘留量。
[0007] 為實(shí)現(xiàn)W上目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:一種氣挫菌苯胺殘留量的GC-MS/ MS快速測(cè)定方法，包括如下步驟：
[000引（1)提取 稱(chēng)取混勻樣品于具塞離屯、管中，加入適量水復(fù)蘇后，定量加入乙臘溶液均質(zhì)提取，然后 加入氯化鋼和無(wú)水硫酸儀，劇烈滿(mǎn)旋Imin后離屯、。
[0009] 凈化 將增強(qiáng)型脂質(zhì)去除產(chǎn)品EMR用水活化，移取樣品提取液于活化好的EMR凈化管中，滿(mǎn)旋 Imin后，700化/min離屯、5min，轉(zhuǎn)移全部上清液至裝有無(wú)水硫酸儀和氯化鋼的離屯、管中進(jìn)行 鹽析，滿(mǎn)旋離屯、后，移取一定體積的上清液，濃縮至干后，用體積比為1/1的丙酬/正己燒混 合溶劑溶解定容，過(guò)膜后，待氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(GC-MS/MS)檢測(cè)。
[0010] (3)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制 將不含氣挫菌苯胺的同種類(lèi)基質(zhì)空白樣品按上述步驟（1)、（2)處理，得樣品提取凈化 殘?jiān)?，加入適量溶劑和標(biāo)準(zhǔn)溶液，滿(mǎn)旋混勻，配制成至少3個(gè)濃度的氣挫菌苯胺系列標(biāo)準(zhǔn)工 作液。
[0011] (4)測(cè)定和結(jié)果計(jì)算 將步驟(3)中的各濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)行GC-MS/MS測(cè)定，W標(biāo)準(zhǔn)工作液的色譜峰 面積對(duì)其相應(yīng)濃度進(jìn)行回歸分析，得到基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線(xiàn);在相同條件下將步驟(2)中凈化 后的樣品液注入GC-MS/MS進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得樣品液中氣挫菌苯胺的色譜峰面積，代入基質(zhì)標(biāo) 準(zhǔn)工作曲線(xiàn)，得到樣品液中氣挫菌苯胺含量，然后根據(jù)樣品液所代表試樣的質(zhì)量計(jì)算得到 樣品中氣挫菌苯胺殘留量;若上機(jī)溶液中氣挫菌苯胺殘留量超過(guò)線(xiàn)性范圍上限，需用定容 溶劑將上機(jī)溶液濃度稀釋至線(xiàn)性范圍之內(nèi)。
[0012] 步驟(1)中樣品若為動(dòng)物肝臟等含水量較少的樣品，提取前須加適量水充分浸潤(rùn)。
[0013] 步驟(4)中氣相色譜條件為:色譜柱:HP-5MS毛細(xì)管色譜柱，柱長(zhǎng)30m，內(nèi)徑0.25mm， 膜厚0.25皿;進(jìn)樣口溫度250°C ;載氣：He，不分流模式進(jìn)樣，進(jìn)樣量：1化;恒流模式，流速 1.2mL/min;升溫程序:初溫60°C保持2min，W每分鐘20°C的速度升至200°C，然后W每分鐘2 °C的速度升至220°C，再W每分鐘20°C的速度升至280°C，保持IOmin;傳輸線(xiàn)溫度:290°C。
[0014] 步驟(4)中質(zhì)譜條件為：電離模式：電子轟擊電離化I，70eV);離子源溫度280°C;碰 撞氣:氣氣;多反應(yīng)監(jiān)測(cè)掃描方式MRM，監(jiān)測(cè)參數(shù)為：
[0015] 步驟(4)中測(cè)定樣液和基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液時(shí)，若樣液中農(nóng)藥色譜峰保留時(shí)間與標(biāo) 準(zhǔn)溶液中相應(yīng)農(nóng)藥保留時(shí)間相一致，并且在扣除背景后的樣品質(zhì)譜圖中，所選擇的離子均 出現(xiàn)，而且離子豐度比與標(biāo)準(zhǔn)溶液的離子豐度比相一致，則可判斷樣液中存在運(yùn)種農(nóng)藥;若 上述兩個(gè)條件不能同時(shí)滿(mǎn)足，則判斷不含該種農(nóng)藥。
[0016] 本發(fā)明的有益效果在于：
[0017] 本發(fā)明利用分散固相萃取技術(shù)，建立了簡(jiǎn)便、快速并能有效避免樣品中基質(zhì)干擾 的樣品前處理方法，將此前處理方法結(jié)合GC-MS/MS應(yīng)用于糧谷、動(dòng)物源性食品中氣挫菌苯 胺定性確證和定量檢測(cè)，平均回收率為86.9%~88.1 %，平均相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為6.6% ~8.4%，檢出限低于0.01化g/kg，具有操作簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確、靈敏度高及重復(fù)性好的優(yōu)點(diǎn)。 能滿(mǎn)足美國(guó)、歐盟、日本等國(guó)家對(duì)相應(yīng)產(chǎn)品安全檢測(cè)的技術(shù)要求，為保障我國(guó)人民食品安全 及對(duì)外出口貿(mào)易健康發(fā)展提供有力的技術(shù)支撐。
【附圖說(shuō)明】
[001引圖巧添加在空白豬肉基質(zhì)中的氣挫菌苯胺標(biāo)液的GC-MS/MS選擇離子色譜圖。
[0019] 圖2為不含氣挫菌苯胺的豬肉空白樣品的GC-MS/MS選擇離子色譜圖。
[0020] 圖3為W不含氣挫菌苯胺的豬肉空白樣品為基質(zhì)配制的氣挫菌苯胺標(biāo)準(zhǔn)工作曲 線(xiàn)。
【具體實(shí)施方式】
[0021] 現(xiàn)W W下實(shí)施實(shí)例來(lái)說(shuō)明本發(fā)明，但并不是限制本發(fā)明的范圍。
[0022] 實(shí)施例中使用的儀器與試劑 T18 Basic均質(zhì)器（11(4,6