一種胺苯吡唑酮殘留量的gc-ei-ms測定方法
【技術(shù)領域】
[0001] 本發(fā)明設及一種胺苯化挫酬殘留量的GC-EI-MS測定方法，更具體地說是采用氣相 色譜-電子轟擊離子源-質(zhì)譜(GC-EI-MS)定性定量測定糧谷、豬肉、牛肉、羊肉、雞肉等動物 肌肉及制品等復雜基質(zhì)的動植物源性食品中殘留的胺苯化挫酬含量的方法，屬于農(nóng)藥殘留 量的測定技術(shù)領域。
【背景技術(shù)】
[0002] 胺苯化挫酬(Fe噸yrazamine)是日本住友化學株式會社研究開發(fā)的基于化晚的雜 環(huán)類殺真菌劑，通過抑制麥角醬醇生物合成途徑的作用機制的病原體，顯示出對菌絲生長 和抱子萌發(fā)和花粉管生長的抑制作用。CAS號為:473798-59-3，分子式為Ci7也1化化S，分子量 為331.43,胺苯化挫酬的化學結(jié)構(gòu)式如下：
[0003] 胺苯化菌酬是住友化學獨立開發(fā)的新殺菌劑，具有新穎化學結(jié)構(gòu)，能迅速滲入作 物體內(nèi)，對感染的真菌能快速發(fā)揮藥效，主要用于控制葡萄、石果、蔬菜作物中的灰霉病、菌 核病和鏈核盤菌。另外，胺苯化菌酬對哺乳類動物高度安全，在環(huán)境中能迅速降解，可在多 種作物采收前應用。胺苯化菌酬最初在韓國推出，在胺苯化菌酬原藥獲得第一個全球登記 后，住友化學又在韓國推出其含胺苯化菌酬原藥的殺菌劑新品，并WBotrycide商標名進行 銷售，該產(chǎn)品為30%的懸浮劑型，用于水果和蔬菜作物。2009年，住友化學于申請歐盟登記 用于溫室栽培的西紅柿、茄子、辣椒和葫蘆等蔬菜作物，還有葡萄的田間應用，但當時僅在 波蘭獲得為期S年的臨時登記，商品名為Prolec化。2012年6月，歐盟食品與動物健康常務 委員會已投票通過了其登記申請，胺苯化菌酬已經(jīng)獲得歐盟批準登記，將于2013年1月舊 起正式列入歐盟農(nóng)藥1107/2009法規(guī)下的已登記有效成分名單，有效期為十年。胺苯化菌酬 在歐盟取得登記后，將用于葡萄和一些溫室作物，如番茄、茄子、辣椒和葫蘆等。胺苯化菌酬 對葡萄抱菌具有優(yōu)異防控能力，住友化學將進一步于2012/13年度向意大利和智利市場推 廣該產(chǎn)品，其全球商品名為Prolectus?，F(xiàn)已在美國和很多亞洲國家進行了登記，具有很廣 闊的應用前景。
[0004] 隨著胺苯化挫酬的登記、推廣和使用，作為我國主要出口市場的歐盟、美國、加拿 大等國家制定了其在蔬菜、水果、糧谷和畜產(chǎn)品等食品農(nóng)產(chǎn)品中的最大允許殘留量(M化）， 歐盟制定殺菌劑胺苯化菌酬在多種作物上的最大殘留限量標準。該標準已于2012年5月7日 生效。胺苯化菌酬在馬鈴馨、辣椒、茄子中的最大殘留限量為3mg/kg;在葫蘆、黃瓜、小黃瓜、 綠皮南瓜中的最大殘留限量為〇.7mg/kg;在相橘、葡萄抽、巧樣等水果及各種干果中的殘留 限量最為嚴格，為O.Olmg/kg。美國規(guī)定胺苯化挫酬在杏仁中的最大殘留限量為0.02mg/kg; 在杏仁外殼中的最大殘留限量為1.5mg/kg;在開屯、果中的最大殘留限量為0.02mg/kg;在窩 宦頭中的最大殘留限量為1.5mg/kg;在窩宦葉中的最大殘留限量為2mg/kg;在曼越替亞組 13-07A中的最大殘留限量為5mg/kg;在灌木漿果類亞組13-07B中的最大殘留限量為5mg/ kg;在小型蔓生水果13-07F亞組中（除雜猴桃外）的最大殘留限量為3mg/kg;在葡萄汁中的 最大殘留限量為4mg/kg;在矮生漿果類亞組13-07G中的最大殘留限量為3mg/kg;在人參中 的最大殘留限量為〇.7mg/kg。加拿大規(guī)定胺苯化挫酬在葡萄汁、生菜、窩宦、人參根、杏仁堅 果、開屯、果中的M 化分別為4. Omg/kg、2. Omg/kg、1.5mg/kg、0.7mg/kg和0.02mg/kg;歐盟、日 本等國家規(guī)定沒有制定相應農(nóng)藥的殘留限量標準時，出口至其國家的食品農(nóng)產(chǎn)品包括畜禽 肉等動物源性食品中殘留限量均實行O.Olmg/L的"一律標準"。
[0005] 現(xiàn)階段，對胺苯化挫酬殘留量測定方法的研究較少，報道的檢測方法主要為蔬菜 和水果中胺苯化挫酬殘留檢測方法，運些檢測方法均采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)測 定蔬菜和水果中胺苯化挫酬殘留量的檢測方法，使用LC-MS/MS巧憶食品農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留 具有快速、簡便、靈敏度高等優(yōu)點，但由于其價格較昂貴，很多檢測機構(gòu)、企業(yè)或科研院所未 配置該儀器或配置臺數(shù)較少，由于不同的化合物采用LC-MS/MS檢測時，需使用不同的流動 相或色譜柱，運樣需要不斷更換色譜柱、流動相并耗費比較長的時間對系統(tǒng)進行平衡，運一 定程度上制約了 LC-MS/MS的應用。配備電子轟擊電離源的氣相色譜質(zhì)譜(GC-EI-MS)分析食 品農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留具有很大優(yōu)勢，由于電子轟擊電離源質(zhì)譜為通用性檢測器，可實現(xiàn)幾 百種農(nóng)藥的多殘留分析，可同時定性和定量，價格適中，因此現(xiàn)各種檢測機構(gòu)和企業(yè)均配備 氣相色譜-電子轟擊離子源-質(zhì)譜儀(GC-EI-MS)對食品農(nóng)產(chǎn)品中的農(nóng)藥殘留進行檢測，但迄 今為止未見食品農(nóng)產(chǎn)品中胺苯化挫酬殘留量的GC-EI-MS檢測方法的報道，胺苯化挫酬屬電 負性化合物，由于糧谷、動物源性食品等食品農(nóng)產(chǎn)品基質(zhì)比較復雜，須建立凈化效果良好的 樣品前處理方法和儀器分析條件才能滿足檢測要求，因此，建立氣相色譜-電子轟擊離子 源-質(zhì)譜(GC-EI-MS)定性和定量分析糧谷和動物源性食品中胺苯化挫酬殘留量的檢測方法 具有重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種胺苯化挫酬殘留量的GC-EI-MS測定方法，主要用于測定 糧谷、動物源性食品等復雜基質(zhì)食品農(nóng)產(chǎn)品中胺苯化挫酬殘留量。
[0007] 為實現(xiàn)W上目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：一種胺苯化挫酬殘留量的GC-EI-MS測定方法，包括如下步驟：
[000引（1)提取 稱取混勻樣品于具塞離屯、管中，加入適量水復蘇后，定量加入乙臘或含1%乙酸的乙臘 溶液均質(zhì)或振蕩超聲提取，然后加入氯化鋼或乙酸鋼中的一種和無水硫酸儀，劇烈滿旋 Imin后離屯、。
[0009] (2)凈化 移取一定體積樣品提取液，濃縮至ImL左右，經(jīng)Cis/PSA固相萃取柱凈化，乙臘洗脫，收 集洗脫液，濃縮至干后，用體積比為1/1的丙酬/正己燒混合溶劑溶解定容，過膜后，待氣相 色譜-電子轟擊離子源-質(zhì)譜(GC-EI-MS)檢測。
[0010] (3)標準工作溶液的配制 將不含胺苯化挫酬的同種類基質(zhì)空白樣品按上述步驟（1)、（2)處理時，得樣品提取凈 化殘渣，加入適量溶劑和標準溶液，滿旋混勻，配制成至少3個濃度的胺苯化挫酬系列標準 工作液。
[0011] (4)氣相色譜-電子轟擊離子源-質(zhì)譜法(GC-EI-MS)測定 將步驟(3)中的各濃度梯度的標準工作液進行GC-EI-MS測定，W標準工作液的色譜峰 面積對其相應濃度進行回歸分析，得到標準工作曲線;在相同條件下將步驟(2)中凈化后的 樣品液注入GC-EI-MS進行測定，測得樣品液中胺苯化挫酬的色譜峰面積，代入標準工作曲 線，得到樣品液中胺苯化挫酬含量，然后根據(jù)樣品液所代表試樣的質(zhì)量計算得到樣品中胺 苯化挫酬殘留量。若上機溶液中胺苯化挫酬殘留量超過線性范圍上限，需用定容溶劑將上 機溶液濃度稀釋至線性范圍之內(nèi)。
[0012] 步驟（1)中樣品若為糧谷及動物肝臟等含水量較少的樣品，提取前須加適量水充 分浸潤。
[0013] 步驟(1)中采用乙臘提取時加入氯化鋼鹽析，采用含1%乙酸的乙臘溶液提取時加 入乙酸鋼鹽析。
[0014] 步驟(2)中進行Cis/PSA固相萃取凈化，乙臘洗脫時，洗脫體積為6~8血。
[0015] 步驟(4)中氣相色譜條件為:色譜柱:HP-5MS毛細管色譜柱，柱長30m，內(nèi)徑0.25mm， 膜厚0.25皿;進樣口溫度250°C ;載氣：He，不分流模式進樣，進樣量：1化;恒流模式，流速 1.OmL/min;升溫程序:初溫60°C保持2min，W每分鐘20°C的速度升至200°C，然后W每分鐘2 °C的速度升至220°C，再W每分鐘20°C的速度升至280°C，保持IOmin;傳輸線溫度:280°C。
[0016] 步驟(4)中質(zhì)譜條件為:離子源溫度150°C;四極桿溫度150°C;電離模式：電子轟擊 電離，即EI模式，能量70eV;掃描方式：選擇離子監(jiān)測（SIM)模式，監(jiān)測的離子為：230.1、 331.1、256.1、231.1。
[0017] 步驟(4)中測定樣液和基質(zhì)標準工作溶液時，若樣液中農(nóng)藥色譜峰保留時間與標 準溶液中相應農(nóng)藥保留時間相一致，并且在扣除背景后的樣品質(zhì)譜圖中，所選擇的離子均 出現(xiàn)，而且離子豐度比與標準溶液的離子豐度比相一致，則可判斷樣液中存在運種農(nóng)藥;若 上述兩個條件不能同時滿足，則判斷不含該種農(nóng)藥。
[0018] 本發(fā)明的有益效果在于：
[0019] 本發(fā)明利用分散固相萃取技術(shù)，建立了簡便、快速并能有效避免樣品中基質(zhì)干擾 的樣品前處理方法，將此前處理方法結(jié)合GC-EI-MS應用于糧谷、動物源性食品中胺苯化挫 酬定性確證和定量檢測，平均回收率為90.5%~94.7%，平均相對標準偏差(RSD)為5.9% ~8.9%，檢出限低于2.1化g/kg，具有操作簡便、快速、準確、靈敏度高及重復性好的優(yōu)點。 能滿足美國、歐盟、日本等國家對相應產(chǎn)品安全檢測的技術(shù)要求，為保障我國人民食品安全 及對外出口貿(mào)易健康發(fā)展提供有力的技術(shù)支撐。
【附圖說明】
[0020] 圖1為添加在空白豬肉基質(zhì)中的胺苯化挫酬的GC-EI-MS選擇離子色譜圖。
[0021] 圖2為不含胺苯化挫酬的豬肉空白樣品的GC-EI-MS選擇離子色譜圖。
[0022] 圖3為W不含胺苯化挫酬的豬肉空白樣品為基質(zhì)配制的胺苯化挫酬標準工作曲 線。
【具體實施方式】
[0023] 現(xiàn)W W下實施實例來說明本發(fā)明，但并不是限制本發(fā)明的范圍。
[0024] 實施例中使用的儀器與試劑
[0025] TlSBasic均質(zhì)器（IKA，Germany) ;CR21G虹離屯、機（日立Japan) ;MS3基本型旋滿混 合器（IKA，Germany);TurboVapLV型樣品自動濃縮儀（Caliper，USA);7890N氣相色譜-5977C質(zhì)譜儀(Agilent,USA) ;Cis/PSA固相萃取柱(6mL，500mg/500mg)購于天津博納艾杰爾 科技有限公司。
[0026] 試劑
[0027]乙臘、丙酬、正己燒（HPLC級，Merke，Germany);乙酸（HPLC級，CNW，Germany);無水 硫酸儀、氯化鋼和乙酸鋼為分析純，均購自國藥集團化學試劑有限公司。
[002引標準物質(zhì):純度98.0%，購自日本和光純農(nóng)工業(yè)株式會社。
[0029] 實施例1:小麥中胺苯化挫酬殘留量的檢測
[0030] (1)樣品前處理
[0031] 提取 稱取經(jīng)充分混勻的5g小麥樣品（研磨成面粉)于50mL離屯、管中，加入20mL水復蘇30min 后，準確加入20mL含1 %乙酸的乙臘溶液，振蕩提取20min，超聲提取5min，加入3g無水硫酸 儀和2g乙酸鋼，滿旋Imin后，7000;r/min離屯、5min。離屯、后，取SmL乙臘提取液于40°C旋蒸或 氮氣吹至近干，加入ImL乙臘滿旋后，待凈化。
[0032] 凈化 用5mL乙臘預洗Cis/PSA固相萃取柱，當液面到達吸附劑的頂部時，將上述提取溶液轉(zhuǎn)