金天格膠囊指紋圖譜的建立方法及其指紋圖譜的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種金天格膠囊指紋圖譜的建立方法及其指紋圖譜，是以人工虎骨對(duì)照藥材為參照，采用高效液相色譜法測(cè)定其指紋圖譜。本發(fā)明所提供的方法建立的金天格膠囊HPLC指紋圖譜與對(duì)照?qǐng)D譜的相似度均大于0.90，能有效的表征其質(zhì)量，有利于全面監(jiān)控產(chǎn)品的質(zhì)量；本發(fā)明建立了金天格膠囊HPLC特征圖譜共有模式，標(biāo)定了12個(gè)共有峰，建立的指紋圖譜技術(shù)含量高，避免了金天格膠囊質(zhì)量控制的單一性和片面性，減少了人為處理產(chǎn)品質(zhì)量達(dá)標(biāo)的可能性。
【專利說(shuō)明】
金天格膠囊指紋圖譜的建立方法及其指紋圖譜
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于中藥檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及金天格膠囊指紋圖譜的建立方法及其指 紋圖譜。
【背景技術(shù)】
[0002] 金天格膠囊是一種健骨藥物，由人工虎骨粉和適量輔料制成的制劑，人工虎骨粉 具有健骨作用，用于腰背疼痛，腰膝酸軟，下肢瘦弱，步履艱難等癥狀的改善。
[0003] 虎骨作為一種名貴中藥材并經(jīng)過(guò)千百年的臨床實(shí)踐，它的藥用價(jià)值得到了充分的 證明，虎骨具有顯著的抗炎、追風(fēng)、鎮(zhèn)痛、健骨等功效，主要用于治療骨質(zhì)疏松、風(fēng)濕W及骨 傷等。在1993年，為遵守國(guó)際公約，我國(guó)明令禁止虎骨貿(mào)易和藥用后，含有虎骨成分的很多 著名中成藥就悄然消失了。為使具有悠久歷史的W虎骨為原料的傳統(tǒng)中藥制品不在市場(chǎng)上 消亡，2003年由中國(guó)藥品生物制品檢定所、金花企業(yè)(集團(tuán)）股份有限公司等聯(lián)合研制出了 與天然虎骨所含成分基本相同的人工虎骨粉配方。經(jīng)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，用該配方制成的人工虎 骨指紋圖譜與天然虎骨幾乎相同，13項(xiàng)實(shí)驗(yàn)及30多個(gè)藥理、藥效及安全性指標(biāo)與天然虎骨 粉無(wú)明顯差異。
[0004] 目前，對(duì)一種健骨藥物的的鑒定，往往是選取一種健骨藥物的一兩種中藥成分進(jìn) 行鑒定，比如申請(qǐng)?zhí)枮?01510419150.0、名稱為"一種健骨藥物的質(zhì)量檢測(cè)方法"，公開(kāi)了一 種健骨藥物的總氨基酸、巧的檢測(cè)方法。
[0005] 中藥指紋圖譜是指某種中藥材或者中成藥中所共有的、具有特征性的某類或數(shù)類 成分的色譜或者光譜的圖譜。在現(xiàn)階段，中藥的有效成分絕大多數(shù)沒(méi)有明確的情況下，中藥 指紋圖譜對(duì)于控制中藥材或者中成藥的質(zhì)量顯得格外重要。因此，對(duì)健骨藥物金天格膠囊 建立中藥指紋圖譜，進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè)具有重大意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的在于提供一種金天格膠囊指紋圖譜的建立方法及其指紋圖譜，該方 法可W保證金天格膠囊的質(zhì)量穩(wěn)定性、一致性和可控性，從而確保金天格膠囊的安全性和 有效性。
[0007] 本發(fā)明是通過(guò)W下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)：
[000引本發(fā)明公開(kāi)的一種金天格膠囊的指紋圖譜的建立方法，包括W下步驟：
[0009] 1)供試品溶液的制備
[0010] 精密稱取金天格膠囊內(nèi)容物0.25g，加水溶解，沸水浴加熱處理5~20min后，冷卻、 離屯、，取上清并用微孔濾膜過(guò)濾后，制得供試品溶液；
[ocm] 2)參比對(duì)照溶液的制備
[0012] 精密稱取人工虎骨對(duì)照藥材0.25g，加水溶解，沸水浴加熱處理5~20min后，冷卻、 離屯、，取上清并用微孔濾膜過(guò)濾后，制得參比對(duì)照溶液；
[0013] 3)測(cè)定
[0014] 分別精密吸取供試品溶液和參比對(duì)照溶液各5~20μ1，注入液相色譜儀，依照高效 液相色譜法進(jìn)行測(cè)定，記錄65分鐘內(nèi)的色譜圖，用指紋圖譜軟件進(jìn)行處理，得到金天格膠囊 的指紋圖譜。
[0015] 所述高效液相色譜條件為：
[0016] 填充劑:十八烷基硅烷鍵合硅膠，250 X 4.6mm，5μπι;
[0017] 流動(dòng)相A:甲醇與0.02氣醋酸水溶液按體積比2:98配成的混合液;流動(dòng)相Β:甲 醇與0.02 % Ξ氣醋酸水溶液按體積比30:70配成的混合液；
[001引檢測(cè)波長(zhǎng)：220~380nm;
[0019] 柱溫:28 ~40°C;
[0020] 梯度洗脫，流速0.2~0.5mL/min。
[0021 ]梯度洗脫過(guò)程中，流動(dòng)相A和流動(dòng)相B的變化比例為：
[0022] 0 ~20min，流動(dòng)相 A:100%;
[0023] 20 ~30min，流動(dòng)相 A:100%~50%、流動(dòng)相B:0~50%;
[0024] 30~45min，流動(dòng)相A:50%~0、流動(dòng)相B:50%~100% ;
[00巧]45~60min，流動(dòng)相A:0~100%、流動(dòng)相B:100~0%;
[00%] 60 ~65min，流動(dòng)相 A:100%。
[0027] 所述十八烷基硅烷鍵合硅膠的孔徑為300A。
[002引檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm;柱溫為30°C ;梯度洗脫，流速為0.3mL/min。
[0029] 步驟1)加入5~20mL水溶解金天格膠囊內(nèi)容物;步驟2)中加入5~20mL水溶解人工 虎骨對(duì)照藥材。
[0030] 所述離屯、是在2000~3500;r/min下，處理2~lOmin。
[0031] 本發(fā)明還公開(kāi)了采用上述的方法建立的金天格膠囊指紋圖譜，所述指紋圖譜中有 12個(gè)共有峰。
[0032] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有W下有益的技術(shù)效果：
[0033] 本發(fā)明公開(kāi)的金天格膠囊指紋圖譜的建立方法，W人工虎骨對(duì)照藥材為參照，采 用高效液相色譜法測(cè)定其指紋圖譜。本發(fā)明所提供的方法建立的金天格膠囊指紋圖譜與對(duì) 照?qǐng)D譜的相似度均大于0.90,能有效的表征其質(zhì)量，有利于全面監(jiān)控產(chǎn)品的質(zhì)量，避免了金 天格膠囊質(zhì)量控制的單一性和片面性，減少了人為處理產(chǎn)品質(zhì)量達(dá)標(biāo)的可能性，有效保證 了金天格膠囊的質(zhì)量穩(wěn)定性、一致性和可控性，從而確保金天格膠囊的安全性和有效性。
[0034] 本發(fā)明建立了金天格膠囊HPLC特征圖譜共有模式，標(biāo)定了 12個(gè)共有峰，建立的指 紋圖譜技術(shù)含量高，多膚指紋圖譜的峰多，峰形好，易于鑒別。
【附圖說(shuō)明】
[0035] 圖1為8批次金天格膠囊的多膚指紋圖譜疊加色譜圖；
[0036] 圖2為人工虎骨對(duì)照藥材的多膚指紋圖譜色譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0037] 下面結(jié)合具體的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明，所述是對(duì)本發(fā)明的解釋而 不是限定。
[003引實(shí)施例1
[0039] -種金天格膠囊的指紋圖譜的建立方法，包括W下步驟：
[0040] (1)供試品溶液的制備:取金天格膠囊內(nèi)容物約〇.25g，加水10ml溶解，沸水浴加熱 10分鐘，冷卻后離屯、(3000轉(zhuǎn)/min)5分鐘，取上清液用微孔濾膜濾過(guò)，作為供試品溶液；
[0041] (2)參比對(duì)照溶液的制備：取人工虎骨對(duì)照藥材，同供試品方法制成對(duì)照藥材溶 液；
[0042] (3)測(cè)定法:分別精密吸取參比對(duì)照溶液和供試品溶液各10μ1，注入液相色譜儀， 測(cè)定，記錄65分鐘內(nèi)的色譜圖，用指紋圖譜軟件進(jìn)行處理，即得一種健骨藥物的指紋圖譜。
[0043] (4)所述高效液相色譜測(cè)定的色譜條件為：W十八烷基硅烷鍵合硅膠（孔徑為 300Α; 250 X 4.6mm、5皿)為填充劑，甲醇-0.02 % S氣醋酸(2:98)為A相，甲醇-0.02 %立氣 醋酸(30:70)為財(cái)目，梯度洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm;柱溫30°C ;流速0.3ml/min。
[0044] 實(shí)施例2
[0045] -種金天格膠囊的指紋圖譜的建立方法，包括W下步驟：
[0046] (1)供試品溶液的制備:取金天格膠囊內(nèi)容物約〇.25g，加水5ml溶解，沸水浴加熱5 分鐘，冷卻后離屯、(2000轉(zhuǎn)/min)10分鐘，取上清液用微孔濾膜濾過(guò)，作為供試品溶液；
[0047] (2)參比對(duì)照溶液的制備:取人工虎骨對(duì)照藥材0.25g，同供試品方法制成對(duì)照藥 材溶液；
[004引（3)測(cè)定法:分別精密吸取參比對(duì)照溶液和供試品溶液各扣1，注入液相色譜儀，測(cè) 定，記錄65分鐘內(nèi)的色譜圖，用指紋圖譜軟件進(jìn)行處理，即得一種健骨藥物的指紋圖譜。 [0049] (4)所述高效液相色譜測(cè)定的色譜條件為：W十八烷基硅烷鍵合硅膠（孔徑為 300A;250 X 4.6mm、5皿)為填充劑，甲醇-0.02 % S氣醋酸(2:98)為A相，甲醇-0.02 %立氣 醋酸(30:70)為B相，梯度洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm;柱溫28°C ;流速0.2ml/min。
[00加]實(shí)施例3
[0051] -種金天格膠囊的指紋圖譜的建立方法，包括W下步驟：
[0052] (1)供試品溶液的制備:取金天格膠囊內(nèi)容物約〇.25g，加水20ml溶解，沸水浴加熱 20分鐘，冷卻后離屯、(3500轉(zhuǎn)/min)2分鐘，取上清液用微孔濾膜濾過(guò)，作為供試品溶液；
[0053] (2)參比對(duì)照溶液的制備:取人工虎骨對(duì)照藥材0.25g，同供試品方法制成對(duì)照藥 材溶液；
[0054] (3)測(cè)定法:分別精密吸取參比對(duì)照溶液和供試品溶液各20μ1，注入液相色譜儀， 測(cè)定，記錄65分鐘內(nèi)的色譜圖，用指紋圖譜軟件進(jìn)行處理，即得一種健骨藥物的指紋圖譜。
[0055] (4)所述高效液相色譜測(cè)定的色譜條件為：W十八烷基硅烷鍵合硅膠（孔徑為 300Λ ;250 X 4.6mm、5μπι)為填充劑，甲醇-0.02 % Ξ氣醋酸（2:98)為A相，甲醇-0.02 % Ξ氣 醋酸(30:70)為B相，梯度洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)為380nm;柱溫40°C ;流速0.5ml/min。
[0056] 參見(jiàn)圖1，為本發(fā)明方法建立的8批次金天格膠囊的指紋圖譜，所述圖譜中有12個(gè) 共有峰。圖2為人工虎骨對(duì)照藥材的指紋圖譜。
[0057] 通過(guò)8批次金天格膠囊HPLC圖譜的比較，進(jìn)行相似度評(píng)價(jià)，采用國(guó)家藥典委員會(huì) "中藥色譜指紋相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)"對(duì)8個(gè)批次金天格膠囊進(jìn)行相似度計(jì)算，8個(gè)批次金天格膠 囊與人工虎骨對(duì)照藥材的指紋圖譜相似度均大于0.90。
[0058] 綜上所述，本發(fā)明具有W下優(yōu)點(diǎn)：
[0059] 1.本發(fā)明所提供的方法建立的健骨藥物HPIX指紋圖譜與對(duì)照藥材圖譜的相似度 均大于0.90，能有效的表征其質(zhì)量，有利于全面監(jiān)控產(chǎn)品的質(zhì)量。
[0060] 2.本發(fā)明建立了一種健骨藥物HPLC特征指紋圖譜共有模式，標(biāo)定了 12個(gè)共有峰， 建立的指紋圖譜技術(shù)含量高，避免了該制劑質(zhì)量控制的單一性和片面性，減少了人為處理 產(chǎn)品質(zhì)量達(dá)標(biāo)的可能性。
[0061 ] 3.本發(fā)明方法所得健骨藥物中多膚指紋圖譜的峰多，峰形好，易于鑒別。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種金天格膠囊的指紋圖譜的建立方法，其特征在于，包括以下步驟： 1) 供試品溶液的制備 精密稱取金天格膠囊內(nèi)容物〇.25g，加水溶解，沸水浴加熱處理5~20min后，冷卻、離 心，取上清并用微孔濾膜過(guò)濾后，制得供試品溶液； 2) 參比對(duì)照溶液的制備 精密稱取人工虎骨對(duì)照藥材〇.25g，加水溶解，沸水浴加熱處理5~20min后，冷卻、離 心，取上清并用微孔濾膜過(guò)濾后，制得參比對(duì)照溶液； 3) 測(cè)定 分別精密吸取供試品溶液和參比對(duì)照溶液各5~20μ1，注入液相色譜儀，依照高效液相 色譜法進(jìn)行測(cè)定，記錄65分鐘內(nèi)的色譜圖，用指紋圖譜軟件進(jìn)行處理，得到金天格膠囊的指 紋圖譜。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的金天格膠囊的指紋圖譜的建立方法，其特征在于，高效液相色 譜條件為： 填充劑:十八烷基硅烷鍵合硅膠，250 X 4 · 6mm，5μπι; 流動(dòng)相A:甲醇與0.02%三氟醋酸水溶液按體積比2:98配成的混合液;流動(dòng)相Β:甲醇與 0.02 %三氟醋酸水溶液按體積比30:70配成的混合液； 檢測(cè)波長(zhǎng):220~380nm; 柱溫:28~40 °C; 梯度洗脫，流速〇. 2~0.5mL/min。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的金天格膠囊的指紋圖譜的建立方法，其特征在于，梯度洗脫過(guò) 程中，流動(dòng)相A和流動(dòng)相B的變化比例為： 0~20min，流動(dòng)相A: 100% ; 20~30min，流動(dòng)相A: 100 %~50 %、流動(dòng)相B: 0~50 % ; 30~45min，流動(dòng)相A: 50 %~0、流動(dòng)相B: 50 %~100 % ; 45~60min，流動(dòng)相A:0~100%、流動(dòng)相B: 100~0% ; 60~65min，流動(dòng)相A: 100%。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的金天格膠囊的指紋圖譜的建立方法，其特征在于，所述十八烷 基硅烷鍵合硅膠的孔徑為300A。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的金天格膠囊的指紋圖譜的建立方法，其特征在于，檢測(cè)波長(zhǎng)為 280nm;柱溫為30 °C ;梯度洗脫，流速為0 · 3mL/min。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的金天格膠囊的指紋圖譜的建立方法，其特征在于，步驟1)加入 5~20mL水溶解金天格膠囊內(nèi)容物;步驟2)中加入5~20mL水溶解人工虎骨對(duì)照藥材。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的金天格膠囊的指紋圖譜的建立方法，其特征在于，所述離心是 在 2000 ~3500r/min 下，處理 2 ~lOmin。8. 采用權(quán)利要求1~7中任意一項(xiàng)所述的方法建立的金天格膠囊指紋圖譜，其特征在 于，所述指紋圖譜中有12個(gè)共有峰。
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK105823833SQ201610069433
【公開(kāi)日】2016年8月3日
【申請(qǐng)日】2016年2月1日
【發(fā)明人】陶玉
【申請(qǐng)人】金花企業(yè)(集團(tuán))股份有限公司西安金花制藥廠