一種紫外檢測(cè)玉竹提取物總皂苷的含量測(cè)定方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種紫外檢測(cè)玉竹提取物總皂苷的含量測(cè)定方法，以玉竹提取物為原料，選用菝葜皂苷元為對(duì)照品，高氯酸或濃硫酸為顯色劑，檢測(cè)波長(zhǎng)310nm,測(cè)定玉竹提取物中總皂苷的含量。該方法彌補(bǔ)了采用薯蕷皂苷元作為對(duì)照品，紫外定量分析玉竹總皂苷的不足，增加了玉竹總皂苷紫外定量分析對(duì)照品品種，為不同來源，含有菝葜類皂苷元成分玉竹皂苷提供一種紫外定量分析方法。
【專利說明】
一種紫外檢測(cè)玉竹提取物總皂苷的含量測(cè)定方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001 ]本發(fā)明涉及一種紫外檢測(cè)玉竹提取物總皂苷的含量測(cè)定方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 玉竹為白合科黃精屬藥食兩用植物，在我國(guó)有兒千年的用藥歷史。在黑龍江、吉 林、陜西、山西、河北、寧夏、湖北、湖南、四川、浙江、安徽、江西、廣東等省被廣泛種植。玉竹 具有降血糖、降血脂、抗腫瘤、抗病毒，延緩衰老等作用，藥理活性顯著。除作藥用外玉竹還 被作為食品、飲料、保健品、化妝品與美容，其綜合利用經(jīng)濟(jì)價(jià)值也逐漸引起人們的重視。對(duì) 玉竹化學(xué)成分及抗氧化活性研究較少，從而限制了人們對(duì)該資源的開發(fā)利用，造成了資源 的大量浪費(fèi)。因此開展其化學(xué)成分和生物活性的研究，對(duì)有效開發(fā)利用該資源十分重要。
[0003] 百合科黃精屬植物在我國(guó)有31種，是傳統(tǒng)的中藥材，具有極大的開發(fā)利用價(jià)值。大 力開展人工栽培，實(shí)現(xiàn)其資源的可持續(xù)利用，加強(qiáng)對(duì)其屬內(nèi)各種植物的化學(xué)成分及藥理作 用的研究，創(chuàng)造更大的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益，是科研人員迫切需要解決的問題。
[0004]玉竹中含有多種類型的化學(xué)成分，如留體皂苷、黃酮、生物堿、留醇、多糖、鞣質(zhì)、粘 液質(zhì)、強(qiáng)心苷等。玉竹根中的皂苷主要為留體皂苷，其生理活性顯著，有廣泛的開發(fā)利用前 景，多位學(xué)者對(duì)其進(jìn)行了研究。林厚文等從玉竹的乙醇提取物中分離到4個(gè)留體皂苷類化合 物，其中有1個(gè)為首次分離得到的25R構(gòu)型單體化合物，其余3個(gè)均是25R/S差向異構(gòu)體。秦海 林等利用色譜法分離得到一個(gè)呋留烷醇苷。邱學(xué)艷從玉竹中分離得到兩種降血糖皂苷。張 沐新對(duì)玉竹根莖采用HPLC方法分離得到14種留體皂苷，其中2個(gè)新化合物，3個(gè)為首次從黃 精屬植物中得到，7個(gè)為首次從玉竹中得到。
[0005] 皂苷類化合物為白合科黃精屬植物中的主要成分，黃精皂苷主要包括薯預(yù)皂苷 元、毛地黃糖苷及菠莫皂苷元等。王彩霞等從黃精中分離得到2種鳥蘇酸型三菇皂苷分別為 積雪草苷及羥基積雪草苷。唐翩翩等從黃精的乙醇提取物的正丁醇萃取相中分離到3個(gè)甾 體皂苷，并對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行了鑒定，3個(gè)留體皂苷的皂苷元均為薯預(yù)皂苷元。
[0006] 留體皂苷具有螺留烷類化合物結(jié)構(gòu)母核的一類皂苷，主要分布薯蕷科、百合科、玄 參科、菝契科、龍舌蘭科等單子葉植物中。不同科目中主要含有皂苷種類不同，紫外檢測(cè)是 皂苷定量與定性分析一種手段，目前文獻(xiàn)顯示，玉竹總皂苷類型主要以薯蕷皂苷元類型皂 苷為主，因此，用紫外檢測(cè)常采用甲醇-硫酸法或高氯酸法在408nm具有最大吸收，來源于毫 州北京同仁堂藥品玉竹飲片，提取后皂苷元后采用高氯酸或硫酸顯色，最大吸收波長(zhǎng)在 310nm，與薯蕷皂苷元產(chǎn)生很大的偏差，說明該種玉竹飲片含有皂苷不是薯蕷科皂苷為主， 薯蕷皂苷元與菝葜皂苷元結(jié)構(gòu)上相差一個(gè)雙鍵，采用菝葜皂苷元對(duì)照品，高氯酸或硫酸為 顯色劑，與樣品提取物一致，由此可推測(cè)，不同產(chǎn)地玉竹含有皂苷類型有所不同。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 針對(duì)目前玉竹提取物總皂苷在紫外檢測(cè)定量分析的過程中，采用薯蕷皂苷元為對(duì) 照品，高氯酸或濃硫酸為顯色劑，檢測(cè)波長(zhǎng)為410nm的不足，開發(fā)菝葜皂苷元為對(duì)照品，高氯 酸或濃硫酸為顯色劑，檢測(cè)波長(zhǎng)為310nm進(jìn)行檢測(cè)，計(jì)算玉竹提取物中皂苷含量。
[0008] 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置 精密稱取菝葜對(duì)照品12. Omg，置于50ml容量瓶中，加入甲醇溶液，超聲使之溶解，并用 甲醇溶液定容至刻度，制得菝葜對(duì)照品溶液(〇. 24mg/ ml)。精密吸取菝葜對(duì)照品溶液0.5、 1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 ml分別置于10ml容量瓶中，水浴揮干甲醇后，加入3ml高氯酸，65°C 水浴保溫30min，冷水浴保溫4min。以無水甲醇為空白對(duì)照，按照紫外分光光度法于310nm波 長(zhǎng)處測(cè)定不同濃度菝葜對(duì)照品溶液的吸光度，結(jié)果見表1。
[0009] 表1線性關(guān)系考察 Tab.1 Linear relationship expedition
以吸光度A為縱坐標(biāo)，菝葜對(duì)照品溶液的濃度C為橫坐標(biāo)，進(jìn)行直線回歸，制備標(biāo)準(zhǔn)曲 線，回歸方程為A=0.0127C-0.0427，R=0.9999，結(jié)果表明菝葜皂苷元在24.0~144.Oyg/ ml 濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。
[0010]玉竹提取物的制備 取玉竹適量，粉碎成粗粉，用石油醚加熱回流進(jìn)行脫脂、脫色素、干燥后，稱取2.0g，放 入燒瓶中，加入60%乙醇40ml，加熱回流提取，提取后冷卻到室溫，減壓過濾，濾液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)， 回收乙醇，濾液濃縮至干，將濃縮提取液溶于適量蒸餾水溶解，加入無水乙醇醇沉脫糖后， 過濾，濾液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，回收乙醇，并在旋轉(zhuǎn)至干的濾液中加入適量蒸餾水使其溶解，轉(zhuǎn) 移到分液漏斗中，加入正丁醇萃取兩次(每次20ml)，合并正丁醇萃取液，將萃取液旋蒸濃縮 至干，殘?jiān)脽o水甲醇溶解，過濾，濾液轉(zhuǎn)移到25mL容量瓶中，加無水甲醇至刻度。取其溶 液V置于10mL具塞試管中，水浴揮干無水甲醇，加入高氯酸5.0mL，置于65°C水浴保溫 15min，冷卻4min，以相應(yīng)試劑為空白，在310nm波長(zhǎng)處測(cè)吸光度，將結(jié)果帶入回歸方程， 計(jì)算玉竹總皂苷提取率。
[0011] 總皂苷含量(％)=(cX 5 X 25)/(mX VX 1000 X 1000) X 100% 式中： C為測(cè)定樣液的質(zhì)量濃度/(yg/mL) ;V為取待測(cè)溶液揮干時(shí)的體積(ml) ;m玉竹提取物 質(zhì)量。
[0012] 本發(fā)明取得技術(shù)進(jìn)步： 1.本發(fā)明玉竹總皂苷提取物紫外檢測(cè)方法采用對(duì)照品菝葜皂苷元，增加了目前僅僅采 用對(duì)照品薯蕷皂苷元的局限。
【具體實(shí)施方式】 [0013] 實(shí)施例1: 取玉竹適量，粉碎成粗粉，用石油醚加熱回流進(jìn)行脫脂、脫色素、干燥后，稱取2.0g，放 入燒瓶中，加入60%乙醇40ml，加熱回流進(jìn)行提取，提取后冷卻到室溫，減壓過濾，濾液旋轉(zhuǎn) 蒸發(fā)，回收乙醇，真空干燥后得到提取物為1.2 g.將提取物溶于適量蒸餾水溶解，加入正丁 醇萃取兩次(每次20ml)，合并正丁醇萃取液，將萃取液旋蒸濃縮至干，殘?jiān)?0mL無水甲 醇溶解，過濾，濾液轉(zhuǎn)移到25mL容量瓶中。取其溶液0.02mL置于10mL具塞試管中，水浴 揮干無水甲醇，加入高氯酸5.0mL，置于65°C水浴保溫15min，冷卻4min，以相應(yīng)試劑為空 白，在310nm波長(zhǎng)處測(cè)吸光度，將結(jié)果帶入回歸方程，計(jì)算出玉竹提取物中皂苷的含量為 4.19%〇
[0014] 實(shí)施例2: 取玉竹適量，粉碎成粗粉，用石油醚加熱回流進(jìn)行脫脂、脫色素、干燥后，稱取4.0g，放 入燒瓶中，加入60%乙醇80ml，加熱回流進(jìn)行提取，提取后冷卻到室溫，減壓過濾，濾液旋轉(zhuǎn) 蒸發(fā)，回收乙醇，真空干燥后得到提取物為2.55g.將提取物溶于適量蒸餾水溶解，加入正丁 醇萃取三次(每次20ml)，合并正丁醇萃取液，將萃取液旋蒸濃縮至干，殘?jiān)?0mL無水甲 醇溶解，過濾，濾液轉(zhuǎn)移到25mL容量瓶中。取其溶液0.02mL置于10mL具塞試管中，水浴 揮干無水甲醇，加入高氯酸5.0mL，置于65°C水浴保溫15min，冷卻4min，以相應(yīng)試劑為空 白，在310nm波長(zhǎng)處測(cè)吸光度，將結(jié)果帶入回歸方程，計(jì)算出玉竹提取物中皂苷的含量為 3.81%〇
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種紫外檢測(cè)玉竹提取物總皂苷的含量測(cè)定方法，其特征在于：以玉竹飲片提取物 為原料，選用菝葜皂苷元為對(duì)照品，高氯酸或濃硫酸為顯色劑，檢測(cè)波長(zhǎng)310nm，測(cè)定玉竹提 取物中總皂苷的含量。2. 根據(jù)權(quán)利書要求1所述的一種紫外檢測(cè)玉竹提取物總皂苷的含量測(cè)定方法，其特征 在于:玉竹提取物主要含有菝葜皂苷元類皂苷成分。
【文檔編號(hào)】G01N21/33GK105866052SQ201610193572
【公開日】2016年8月17日
【申請(qǐng)日】2016年3月31日
【發(fā)明人】于麗穎, 寧波, 王曉林
【申請(qǐng)人】吉林化工學(xué)院