Hplc測(cè)定清喉利咽顆粒中柚皮苷含量的方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種HPLC測(cè)定清喉利咽顆粒中柚皮苷含量的方法，旨在提供一種操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可作為清喉利咽顆粒的質(zhì)量控制方法；該方法包括下述步驟：制備供試品溶液；制備陰性對(duì)照溶液；制備對(duì)照品；專屬性試驗(yàn)，分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液和對(duì)照品溶液各2μl注入液相色譜儀檢測(cè)，所述的色譜條件如下：色譜柱：Phenomenex C18；流動(dòng)相：甲醇－0.5％磷酸；流速0.8mL/min；波長(zhǎng)：280nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量2μl；屬于化學(xué)檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。
【專利說明】
HPLC測(cè)定清喉利咽顆粒中柚皮苷含量的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明提供一種柚皮苷的鑒別方法，具體地說，是一種HPLC測(cè)定清喉利咽顆粒中 柚皮苷含量的方法;屬于化學(xué)檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 清喉利咽顆粒是由黃芩、西青果、桔梗、竹茹、枳殼、胖大海、橘紅等13種中藥組成。 功效清熱利咽，寬胸潤(rùn)喉。用于外感風(fēng)熱所致的咽喉發(fā)干、聲音嘶啞；急慢性咽炎、扁桃體炎 見上述證候者，常用有保護(hù)聲帶作用。其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載于:《中國(guó)藥典》2005年版一部，只有 黃芩苷的含量測(cè)定指標(biāo)，不利于控制該藥品的質(zhì)量。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 針對(duì)上述不足，本發(fā)明的目的是提供一種操作方便，設(shè)備簡(jiǎn)單，檢測(cè)結(jié)果重現(xiàn)好的 清喉利咽顆粒中柚皮苷的鑒別方法。
[0004] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供的技術(shù)方案如下：
[0005] -種HPLC測(cè)定清喉利咽顆粒中柚皮苷含量的方法，依次包括下述步驟：
[0006] 1)制備供試品溶液
[0007] 取本品粉末2g，加熱水20ml溶解，離心，取上清液;通過已處理好的大孔吸附樹脂 柱，先用水洗，棄去水洗液，再用70 %乙醇5ml洗脫，收集洗脫液，蒸干用10ml甲醇溶解，用 0.22μπι微孔濾膜用0.22μπι微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得供試品；
[0008] 2)制備陰性對(duì)照溶液
[0009] 取按處方制法制得同時(shí)缺枳殼清喉利咽顆粒陰性對(duì)照lg，研細(xì)，加甲醇5mL，超聲 30mi η，用0.22μπι微孔濾膜用0.22μπι微孔濾膜濾過，補(bǔ)足5ml，取續(xù)濾液作為陰性對(duì)照溶液； [0010] 3)制備對(duì)照品
[0011] 取柚皮苷對(duì)照品5g，超聲30mi η溶解，用0.22μπι微孔濾膜濾過，補(bǔ)足10ml制得作為 對(duì)照品儲(chǔ)備液;吸取對(duì)照品儲(chǔ)備液l〇ml置20ml瓶中加甲醇稀釋至刻度，作為對(duì)照品溶液；
[0012] 4)專屬性試驗(yàn)
[0013] 分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液和對(duì)照品溶液各2μ1注入液 相色譜儀，檢測(cè)。
[0014] 所述的色譜條件如下：
[0015] 色譜柱：Phenomenex C18，100mmX4.6mm，2·6μηι;
[0016] 流動(dòng)相：甲醇一0.5%磷酸；
[0017] 流速 0.8mL/min;
[0018] 波長(zhǎng)：280nm;
[0019] 柱溫：3(TC;
[0020] 進(jìn)樣量 2μ1。
[0021] 進(jìn)一步的，上述的HPLC測(cè)定清喉利咽顆粒中柚皮苷含量的方法，所述的甲醇一 0.5 %磷酸體積比為40:60。
[0022]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提供的技術(shù)方案采用大孔樹脂吸附法對(duì)清喉利咽顆粒進(jìn) 行提取分離，在通過高效液相色譜進(jìn)行含量檢測(cè)，該方法簡(jiǎn)便、重現(xiàn)性好，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可 以用于清喉利咽顆粒中柚皮苷的含量測(cè)定，為清喉利咽顆粒的質(zhì)量控制提供一定的理論依 據(jù)。
【具體實(shí)施方式】
[0023]下面結(jié)合【具體實(shí)施方式】，對(duì)本發(fā)明的權(quán)利要求做進(jìn)一步的詳細(xì)說明，但不構(gòu)成對(duì) 本發(fā)明的任何限制，任何在本發(fā)明權(quán)利要求保護(hù)范圍所做的有限次的修改，仍在本發(fā)明的 權(quán)利要求保護(hù)范圍之內(nèi)。
[0024]本發(fā)明所涉及的到百分含量濃度，除特殊說明外，溶質(zhì)為液體的均為體積濃度，溶 質(zhì)為固定的均為質(zhì)量濃度。
[0025] 實(shí)施例1
[0026]本發(fā)明提供的一種HPLC測(cè)定清喉利咽顆粒中柚皮苷含量的方法，該方法具體如 下：
[0027] 1)制備供試品溶液
[0028] 取本品粉末2g，加熱水20ml溶解，離心，取上清液;通過已處理好的AB-8型大孔吸 附樹脂柱，先用水洗，棄去水洗液，再用70%乙醇5m 1洗脫，收集洗脫液，蒸干用10ml甲醇溶 解，用0.22μπι微孔濾膜用0.22μπι微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得供試品；
[0029] 2)制備陰性對(duì)照溶液
[0030] 取按處方制法制得同時(shí)缺枳殼清喉利咽顆粒陰性對(duì)照lg，研細(xì)，加甲醇5mL，超聲 30mi η，用0.22μπι微孔濾膜用0.22μπι微孔濾膜濾過，補(bǔ)足5ml，取續(xù)濾液作為陰性對(duì)照溶液； [0031] 3)制備對(duì)照品
[0032] 取柚皮苷對(duì)照品5g，超聲30mi η溶解，用0.22μπι微孔濾膜濾過，補(bǔ)足10ml制得作為 對(duì)照品儲(chǔ)備液;吸取對(duì)照品儲(chǔ)備液l〇ml置20ml瓶中加甲醇稀釋至刻度，作為對(duì)照品溶液； [0033] 4)專屬性試驗(yàn)
[0034] 分別精密吸取供試品溶液、陰性對(duì)照溶液和對(duì)照品溶液各2μ1注入液相色譜儀檢 測(cè)，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，有相同保留時(shí)間的色譜峰，陰性對(duì)照試 驗(yàn)無干擾。
[0035]所述的色譜條件如下：
[0036] 色譜柱：Phenomenex C18，100mmX4.6mm，2·6μηι;
[0037] 流動(dòng)相：甲醇一0.5%磷酸；
[0038] 流速 0.8mL/min;
[0039] 波長(zhǎng)：280nm;
[0040] 柱溫：30°C;
[0041 ]進(jìn)樣量 2μ1。
[0042]為了檢測(cè)該方法的精密度，取同一份對(duì)照品溶液，按同一色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次， 測(cè)定峰面積積分值，柚皮苷RSD為0.18 % (η = 6)結(jié)果表明，儀器精密度良好。
[0043]線性關(guān)系考察
[0044] 按上述的色譜條件分別精密吸取上述對(duì)照品溶液0.2、1、2、3、5μ1注入色譜儀，測(cè) 定，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)(Υ)，對(duì)照品進(jìn)樣量(ng)為橫坐標(biāo)(X)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線;柚皮苷的 回歸方程為:￥ = 45.9乂+5.67& = 0.9997);結(jié)果表明；柚皮苷在25~625即范圍內(nèi)，進(jìn)樣量與 峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系，進(jìn)樣量與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。
[0045] 穩(wěn)定性試驗(yàn)
[0046] 取同一份樣品溶液，分別在0,2,4,8，12,2處，按上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，分別測(cè)定 峰面積積分值，柚皮苷RSD為0.98 % (η = 6)結(jié)果表明，在24小時(shí)內(nèi)待測(cè)物穩(wěn)定。
[0047]樣品含量測(cè)定
[0048] 按上述含量測(cè)定方法，測(cè)定了本品3批樣品中的柚皮苷含量，結(jié)果見表1。
[0049] 表1、樣品測(cè)定結(jié)果(η = 3)
[0051]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于方法簡(jiǎn)單準(zhǔn)確，對(duì)提高產(chǎn)品質(zhì)量和臨床用藥 的有效性與安全性均具有重要意義。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種HPLC測(cè)定清喉利咽顆粒中柚皮苷含量的方法，其特征在于，依次包括下述步驟： 1) 制備供試品溶液 取本品粉末2g，加熱水20ml溶解，離心，取上清液;通過已處理好的大孔吸附樹脂柱，先 用水洗，棄去水洗液，再用70%乙醇5ml洗脫，收集洗脫液，蒸干用10ml甲醇溶解，用0.22μπι 微孔濾膜用0.22μπι微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得供試品； 2) 制備陰性對(duì)照溶液 取按處方制法制得同時(shí)缺枳殼清喉利咽顆粒陰性對(duì)照lg，研細(xì)，加甲醇5mL，超聲 30min，用0 · 22μπι微孔濾膜用0 · 22μπι微孔濾膜濾過，補(bǔ)足5ml，取續(xù)濾液作為陰性對(duì)照溶液； 3) 制備對(duì)照品 取柚皮苷對(duì)照品5g，超聲30min溶解，用0.22μπι微孔濾膜濾過，補(bǔ)足10ml制得作為對(duì)照 品儲(chǔ)備液;吸取對(duì)照品儲(chǔ)備液l〇ml置20ml瓶中加甲醇稀釋至刻度，作為對(duì)照品溶液； 4) 專屬性試驗(yàn) 分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液各2μ1注入液相色譜儀，檢測(cè)。 所述的色譜條件如下： 色譜柱：Phenomenex C18,100mmX4.6mm，2·6μηι; 流動(dòng)相：甲醇一0.5%磷酸； 流速 〇.8mL/min; 波長(zhǎng):280nm; 柱溫：30°C; 進(jìn)樣量2μ1。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的HPLC測(cè)定清喉利咽顆粒中柚皮苷含量的方法，其特征在于，所 述的甲醇一〇. 5 %磷酸體積比為40:60。
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK105866279SQ201610248797
【公開日】2016年8月17日
【申請(qǐng)日】2016年4月20日
【發(fā)明人】陳學(xué)松, 林冬杰, 李亞, 梁慧敏, 李澄
【申請(qǐng)人】廣西壯族自治區(qū)梧州食品藥品檢驗(yàn)所