柱切換-離子色譜法測定洛鉑中痕量乳酸離子的系統(tǒng)及方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種柱切換?離子色譜法測定洛鉑中痕量乳酸離子的系統(tǒng)及方法，屬于藥品檢測技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明采用低配的ICS?1500離子色譜儀與淋洗液發(fā)生器配合使用，選用IonPac NG1色譜柱為預(yù)處理柱、AS19陰離子分析柱時，淋洗液濃度僅需做一階變化即可完成目標乳酸離子與其它離子的完全分離。同時，該法淋洗液濃度比較低，節(jié)能環(huán)保。本發(fā)明建立的系統(tǒng)與方法還具有所需樣品量少，通用性好，操作簡單，易于自動化，方法簡單，儀器配置要求低等優(yōu)點。
【專利說明】
柱切換-離子色譜法測定洛鉑中痕量乳酸離子的系統(tǒng)及方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于藥品檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及柱切換-離子色譜法測定洛鉑中痕量乳 酸離子的系統(tǒng)及方法。 技術(shù)背景
[0002] 洛鉑化學(xué)名為1，2-二氨甲基-環(huán)丁烷-乳酸合鉑，是一種鉑（n)鉻合物的非對映異 構(gòu)混合物，也是一種新型的抗腫瘤藥物，主要用于治療乳腺癌、小細胞肺癌及慢性粒細胞白 血病。洛鉑中1，2-二氨甲基-環(huán)丁烷為穩(wěn)定配基，乳酸為離去基團，其抗腫瘤活性源DNA-藥 物加合物的形成，主要是GG和AG的鏈內(nèi)交聯(lián)。洛鉬能影響C-my c基因的表達，而C-my c的表達 與腫瘤的發(fā)生、凋亡和細胞增殖有關(guān)。同時，它能克服一些臨床前腫瘤模型對順鉑的抗性。
[0003] 工業(yè)上，洛鉑合成主要以1，2-二氰基環(huán)丁烷為原料，通過還原、縮合、環(huán)合3步反 應(yīng)得到。由于在環(huán)合反應(yīng)中，乳酸作為原料與縮合產(chǎn)物結(jié)合生成洛鉑，因此可以通過檢測 乳酸含量來確定環(huán)合反應(yīng)的轉(zhuǎn)化率。
[0004] 目前乳酸的測定方法主要有滴定法、旋光法、UV酶法分析、酶電極法和離子色譜 法。旋光法測定時間長，手段繁瑣;UV酶法僅限于純度高的L乳酸測定，且測定成本相對較 高;酶電極法雖然專一性高、成本低、分析快，但多用于醫(yī)學(xué)血乳酸的測定。這些方法對樣品 的需要量相對較大，無法應(yīng)用于樣品量少的場合，而且這些方法不適用于痕量分析 [7]。
[0005] 對于單純離子色譜系統(tǒng)，若將洛鉑直接進樣，可發(fā)現(xiàn)有很大基質(zhì)干擾，形成一個幾 分鐘的包峰，嚴重影響乳酸離子的測量準確度。為提高準確度，采用標準加入法，結(jié)果得到 一定程度的改善，但并不能完全消除基質(zhì)影響，同時由于標準加入法對于樣品兩次稱量的 精度要求非常高，人為因素影響加大，此外，離子色譜柱、抑制器均受到基質(zhì)污染，使用壽命 大大縮短。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述問題，利用閥切換系統(tǒng)，應(yīng)用反相色譜在線消 除復(fù)雜基質(zhì)的干擾，對消除基質(zhì)后樣品進行收集，再采用離子色譜法進行在線分離檢測，建 立了一種可在線直接分析復(fù)雜洛鉑樣品中痕量乳酸離子的色譜閥切換系統(tǒng)，及應(yīng)用該系統(tǒng) 直接測定洛鉑中痕量乳酸離子的方法。樣品需要量小，可直接在線凈化樣品，消除復(fù)雜基質(zhì) 干擾，有效解決了測定藥物洛鉑中乳酸離子遇到的基質(zhì)干擾問題，同時減少離子色譜柱和 抑制器的污染影響，延長使用壽命。
[0007] 本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的： 一種柱切換-離子色譜法測定洛鉑中痕量乳酸離子的系統(tǒng)，所述的系統(tǒng)包括兩個梯度 栗、進樣器、十通閥、定量環(huán)、預(yù)處理柱、輸液栗、六通閥、收集環(huán)、保護柱、分析柱、抑制器和 電導(dǎo)檢測器;所述的進樣器和十通閥連接，兩個梯度栗與十通閥連接，預(yù)處理柱兩端分別連 接十通閥和六通閥，輸液栗與六通閥連接，六通閥連接保護柱后，依次連接分析柱、抑制器 和電導(dǎo)檢測器。
[0008] 上述柱切換-離子色譜法測定洛鉑中痕量乳酸離子的系統(tǒng)，優(yōu)選的，預(yù)處理柱為 IonPac NG1色譜柱;保護柱為IonPac AG19;分析柱為IonPac AS19。
[0009] 本發(fā)明還提供了一種柱切換-離子色譜法測定洛鉑中痕量乳酸離子的方法，所述 的方法包括基線的采集、干擾基質(zhì)的消除與乳酸離子的收集、乳酸離子的色譜分離分析和 預(yù)處理柱的再生，具體步驟如下： 1) 基線的采集:將離子色譜柱切換系統(tǒng)中的各部件連接好，構(gòu)成柱切換-離子色譜系 統(tǒng)，然后通過兩個梯度栗將去離子水不斷輸入到預(yù)處理柱，通過輸液栗將淋洗液不斷輸入 至保護柱及分析柱，待其全部達到平衡狀態(tài)，開始記錄基線信號； 2) 干擾基質(zhì)的消除與乳酸離子的收集:待測樣品通過進樣器注入十通閥，定量環(huán)控制 樣品容量，樣品裝載完畢后，十通閥和六通閥同時切換到相反位置，兩個梯度栗輸送去離子 水將定量環(huán)中的樣品帶入預(yù)處理柱中，弱極性或非極性雜質(zhì)保留在預(yù)處理柱上，乳酸離子 進入收集環(huán)； 3) 乳酸離子的色譜分離分析:進樣3分鐘后，預(yù)處理柱上的乳酸離子完全洗脫，將十通 閥和六通閥一起切換回初始位置，輸液栗輸送淋洗液至收集環(huán)，將收集環(huán)中的目標陽離子 依次輸送至保護柱、分析柱、抑制器和電導(dǎo)檢測器； 4) 預(yù)處理柱的再生:通過兩個梯度栗輸送質(zhì)量分數(shù)50%乙腈水溶液洗脫預(yù)處理柱上吸 附的雜質(zhì)至廢液，再用去離水平衡預(yù)處理柱，用于下一次進樣； 5) 重復(fù)步驟1)~4)，測定乳酸離子標準溶液及洛鉑樣品，繪制乳酸離子標準曲線，然后 由標準曲線計算洛鉑樣品中乳酸離子的含量。
[0010] 步驟2)中，所述的定量環(huán)控制樣品容量優(yōu)選100yL。
[0011]步驟2)中，所述的收集環(huán)9待測樣品進樣量優(yōu)選2 ml; 步驟3 )中，所述的淋洗液為K0H-水溶液。
[0012] 步驟3)中，所述的淋洗液中K0H濃度為：0~18 min，4 mmol/L;18~30 min，K0H 濃度由4 mmol/L梯度增加到30 mmol/L;30~35 min，4 mmol/L〇
[0013]步驟5)中，所述的標準溶液的配制方法:稱取乳酸鈉標準品，配制成1000 mg/L的 乳酸離子標準儲備液，在4°C下保存，使用時將標準儲備液逐級稀釋至濃度0.01~50 mg/L 的乳酸離子標準溶液。
[0014] 上述測定方法中，兩個梯度栗的總流速為0.5 mL/min，輸液栗流速為1.0 mL/min。
[0015]所述的測定方法，本發(fā)明方法檢測靈敏度為0.0005 mg I/1;檢出限為0.0015mg L -1 〇
[0016] 本發(fā)明柱切換-離子色譜法測定洛鉑中痕量乳酸離子的系統(tǒng)及方法，其有益效果 如下： 1)所需樣品量少。本發(fā)明建立的在線處理技術(shù)通過色譜柱實現(xiàn)干擾雜質(zhì)的消除，進樣 量只需l〇〇yL即可完成對目標化合物的分析檢測，而一般的干擾雜質(zhì)消除過程為離線消除， 所需樣品量大，本發(fā)明所建立的方法特別適用于微量或貴重樣品的檢測。
[0017] 2)通用性好。本發(fā)明所建立的方法能通過色譜柱的更換，應(yīng)用于一系列的類似干 擾問題，通過在線處理技術(shù)，消除干擾物質(zhì)，擴展了離子色譜的應(yīng)用范圍。
[0018] 3)操作簡單，易于自動化。
[0019] 4)方法簡單，儀器配置要求低。離子色譜法分析有機酸時，主要采用AS11色譜柱， 淋洗液濃度采用多階變化，儀器配置要求高。
[0020] 5)本發(fā)明采用低配的ICS-1500離子色譜儀，該儀器與淋洗液發(fā)生器配合使用時， 淋洗液濃度僅能做一階變化，應(yīng)用范圍受到限制。選用IonPac NG1色譜柱為預(yù)處理柱，AS19 陰離子分析柱時，淋洗液濃度僅需做一階變化即可完成目標乳酸離子與其它離子的完全分 離。同時，該法淋洗液濃度比較低，節(jié)能環(huán)保。
【附圖說明】
[0021] 圖1為實施例1柱切換-離子色譜法測定洛鉑中痕量乳酸離子的系統(tǒng)流程示意圖； 圖中：1和2、梯度栗，3、進樣器，4、十通閥，5、定量環(huán)，6、預(yù)處理柱，7、輸液栗，8、六 通閥，9、收集環(huán)，10、保護住，11、分析柱，12、抑制器。13、電導(dǎo)檢測器； 圖2為實施例2去離子水、乳酸標準品與實際樣品洛鉑的色譜對比譜圖，其中峰1為乳酸 離子。
【具體實施方式】
[0022] 以下所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應(yīng)當指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人 員，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應(yīng)視為 本發(fā)明的保護范圍。
[0023] 實施例1 一種柱切換-離子色譜法測定洛鉑中痕量乳酸離子的系統(tǒng)(如圖1所示），包括兩個梯度 栗1、2,進樣器3,十通閥4,定量環(huán)5,預(yù)處理柱6,輸液栗7,六通閥8,收集環(huán)9,保護柱10,分析 柱11，抑制器12和電導(dǎo)檢測器13。所述的進樣器3和十通閥4連接，兩個梯度栗1、2與十通閥4 連接，預(yù)處理柱6兩端分別連接十通閥4和六通閥8,輸液栗7與六通閥8連接，六通閥8連接保 護柱10后，依次連接分析柱11、抑制器12和電導(dǎo)檢測器13; 其中，預(yù)處理柱6為IonPac NG1色譜柱;保護柱10為IonPac AG19;分析柱11為IonPac AS19;離子色譜儀為ICS-1500離子色譜儀。
[0024] 實施例2 測定洛鉑中痕量乳酸離子，具體步驟如下： 1)溶液配制： 標準溶液:稱取乳酸鈉標準品，配制成1000 mg/L的乳酸離子標準儲備液，在4°C下保 存，使用時將標準儲備液逐級稀釋至濃度0.01~50 mg/L的乳酸離子標準溶液，濃度依次 為；0.01，0.05,0.25，l，5,25,50mg/L。
[0025]樣品溶液:精密稱取洛鉑樣品25 mg置于5 mL量瓶中，用去離子水溶解并定容至刻 度。
[0026] 2)基線的采集:將離子色譜柱切換系統(tǒng)中的各部件連接好，構(gòu)成柱切換-離子色譜 系統(tǒng)，初始狀態(tài)時十通閥4處于Inject位，六通閥8處于Load位;然后通過梯度栗1和2將去離 子水按照總流速0.5 mL/min不斷輸入到預(yù)處理柱6，通過輸液栗7將K0H淋洗液以流速1.0 mL/min不斷輸入至保護柱10及分析柱11，待其全部達到平衡狀態(tài)，開始記錄基線信號； 3)干擾基質(zhì)的消除與乳酸離子的收集:待測樣品通過進樣器3注入十通閥4,定量環(huán)5控 制樣品容量，樣品裝載完畢后，十通閥4切換到Load位(0-1.0 min)，六通閥8切換到Inject 位(0-3.0 min)，梯度栗1和2輸送去離子水將定量環(huán)5中的樣品帶入預(yù)處理柱6中，弱極性或 非極性雜質(zhì)保留在預(yù)處理柱6上，乳酸離子進入收集環(huán)9; 4) 乳酸離子的色譜分離分析:進樣3min后，預(yù)處理柱6上的乳酸離子完全洗脫，將十通 閥4和六通閥8-起切換回初始位置，輸液栗7輸送淋洗液(K0H，0-18 min 4 mmol/L，18-30 min 4-30 mmol/L，3〇-35 min 4 mmol/L)至收集環(huán)9,將收集環(huán)9中的目標陽離子依次輸送 至保護柱10、分析柱11、抑制器12和電導(dǎo)檢測器13; 5) 預(yù)處理柱的再生:進樣3-8min后，通過梯度栗1和2輸送質(zhì)量分數(shù)50%乙腈水溶液洗脫 預(yù)處理柱6上吸附的雜質(zhì)至廢液，再用去離子水平衡預(yù)處理柱6，用于下一次進樣； 6) 重復(fù)步驟2)~4)，測定乳酸離子標準溶液及洛鉑樣品，繪制乳酸離子標準曲線，然后 由標準曲線計算洛鉑樣品中乳酸離子的含量。（如圖2所示） 實施例2應(yīng)用柱切換-離子色譜法測定洛鉑中痕量乳酸離子方法性能參數(shù)見表1，檢測 結(jié)果分析見表2。
對比例1:離子色譜法測定洛鉑中痕量乳酸離子，參數(shù)見表3。
[0028]表 3
由實施例和對比例結(jié)果分析可知，本方法與現(xiàn)有技術(shù)中離子色譜法測定洛鉑中痕量乳 酸離子方法相比，檢出限低，線性范圍更寬。
【主權(quán)項】
1. 一種柱切換-離子色譜法測定洛鉑中痕量乳酸離子的系統(tǒng)，其特征在于:所述的系統(tǒng) 包括兩個梯度栗、進樣器、十通閥、定量環(huán)、預(yù)處理柱、輸液栗、六通閥、收集環(huán)、保護柱、分析 柱、抑制器和電導(dǎo)檢測器;所述的進樣器和十通閥連接，兩個梯度栗與十通閥連接，預(yù)處理 柱兩端分別連接十通閥和六通閥，輸液栗與六通閥連接，六通閥連接保護柱后，依次連接分 析柱、抑制器和電導(dǎo)檢測器。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的系統(tǒng)，其特征在于:預(yù)處理柱為IonPac NGl色譜柱;保護柱為 IonPac AG19;分析柱為IonPac AS19。3. -種柱切換-離子色譜法測定洛鉑中痕量乳酸離子的方法，所述的方法包括基線的 采集、干擾基質(zhì)的消除與乳酸離子的收集、乳酸離子的色譜分離分析和預(yù)處理柱的再生，具 體步驟如下： 1) 基線的采集：將離子色譜柱切換系統(tǒng)中的各部件連接好，構(gòu)成柱切換-離子色譜系 統(tǒng)，然后通過兩個梯度栗將去離子水不斷輸入到預(yù)處理柱，通過輸液栗將淋洗液不斷輸入 至保護柱及分析柱，待其全部達到平衡狀態(tài)，開始記錄基線信號； 2) 干擾基質(zhì)的消除與乳酸離子的收集:待測樣品通過進樣器注入十通閥，定量環(huán)控制 樣品容量，樣品裝載完畢后，十通閥和六通閥同時切換到相反位置，兩個梯度栗輸送去離子 水將定量環(huán)中的樣品帶入預(yù)處理柱中，弱極性或非極性雜質(zhì)保留在預(yù)處理柱上，乳酸離子 進入收集環(huán)； 3) 乳酸離子的色譜分離分析:進樣3分鐘后，預(yù)處理柱上的乳酸離子完全洗脫，將十通 閥和六通閥一起切換回初始位置，輸液栗輸送淋洗液至收集環(huán)，將收集環(huán)中的目標陽離子 依次輸送至保護柱、分析柱、抑制器和電導(dǎo)檢測器； 4) 預(yù)處理柱的再生:通過兩個梯度栗輸送質(zhì)量分數(shù)50%乙腈水溶液洗脫預(yù)處理柱上吸 附的雜質(zhì)至廢液，再用去離水平衡預(yù)處理柱，用于下一次進樣； 5) 重復(fù)步驟1)~4)，測定乳酸離子標準溶液及洛鉑樣品，繪制乳酸離子標準曲線，然后 由標準曲線計算洛鉑樣品中乳酸離子的含量。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于：步驟2)中，所述的定量環(huán)控制樣品容量為 IOOyL05. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于：步驟2)中，所述的收集環(huán)待測樣品進樣量 為 2ml。6. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于:步驟3)中，所述的淋洗液為KOH-水溶液。7. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于:步驟3)中，所述的淋洗液中KOH濃度為:0~ 18 min, 4 mmol/L;18~30 min, 4~30 mmol/L;30~35 min， 4 mmol/L〇8. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于:步驟5)中，所述的標準溶液的配制方法:稱 取乳酸鈉標準品，配制成1000 mg/L的乳酸離子標準儲備液，在4tC下保存，使用時將標準儲 備液逐級稀釋至濃度0.01~50 mg/L的乳酸離子標準溶液。9. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于:兩個梯度栗的總流速為0.5 mL/min，輸液 栗流速為1.0 mL/min。10. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于:檢測靈敏度為0.0005 mg I/1;檢出限為 0.0015mg L^10
【文檔編號】G01N30/02GK105929033SQ201610222810
【公開日】2016年9月7日
【申請日】2016年4月12日
【發(fā)明人】趙振東, 謝艷麗, 朱建忠, 馮玉紅, 章程輝
【申請人】海南大學(xué)