一種同時(shí)測(cè)定舒肝健胃丸中五種活性成分的方法
【專(zhuān)利摘要】一種同時(shí)測(cè)定舒肝健胃丸中五種活性成分的方法，包括以下步驟：（1）對(duì)照品溶液制備：分別制得濃度為241 μg·mL?1- 的芍藥苷、1420 μg·mL?1的橙皮苷、208 μg·mL?1的柚皮苷、438 μg·mL?1的和厚樸酚和458 μg·mL?1的厚樸酚；將上述各溶液置于5 mL的容量瓶中，用甲醇定容，得混合對(duì)照品溶液；（2）供試品溶液制備；（3）色譜條件：采用TC?C18色譜柱；乙腈（A）?水（B）作為流動(dòng)相，梯度洗脫：0?15 min，22%?22%的乙腈；15?25 min，22%?72%的乙腈；25?35 min，72%?72%的乙腈；35?40 min，72%?90%的乙腈；40?50 min，90%?90%的乙腈；50?55 min，90%?22%的乙腈；檢測(cè)波長(zhǎng)：0?10min，230nm；10?20 min，280nm；20?55 min，294 nm；流速1.0 mL·min?1；檢測(cè)器：VWD檢測(cè)器；柱溫：25℃；進(jìn)樣量：10 μL；（4）測(cè)定。方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性和穩(wěn)定性好，可為全面評(píng)價(jià)和控制舒肝健胃丸質(zhì)量。
【專(zhuān)利說(shuō)明】
一種同時(shí)測(cè)定舒肝健胃丸中五種活性成分的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及中成藥檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種中成藥舒肝健胃丸的檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 舒肝健胃丸具有疏肝開(kāi)郁、導(dǎo)滯和中、和胃止痛功效，特別是用于肝胃不和引起的 胃脘脹痛、胸脅滿(mǎn)悶、嘔吐吞酸和腹脹便秘。
[0003] 舒肝健胃丸配方及制備方法：厚樸（姜制）300g、香附（醋制）400g、白芍（麩炒） 500g、柴胡(醋制）300g、青皮(醋炒)200g、香櫞300g、陳皮500g、檀香300g、豆蔻300g、枳殼 300g、雞內(nèi)金（炒）500g、檳榔500g、延胡索（醋炒）300g、五靈脂（醋制）300g、牽牛子（炒） 300g，按要求稱(chēng)取以上十五味藥，粉碎成細(xì)粉，過(guò)篩，混勻，用水泛丸，干燥;每500g干丸用 90g滑石粉、9g桃膠包衣，打光，即得。該品種收載于衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第五冊(cè) 182頁(yè)。原有的質(zhì)量控制方法很難對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行有效的質(zhì)量控制。因此，必需建立一種快速、準(zhǔn) 確、全面分離、檢測(cè)舒肝健胃丸中多種活性成分的方法，以便更好地對(duì)該產(chǎn)品進(jìn)行質(zhì)量監(jiān) 控。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種同時(shí)測(cè)定舒肝健胃丸中芍藥苷、橙皮苷、柚皮苷、和厚 樸酚、厚樸酚五種活性成分的方法，解決現(xiàn)有舒肝健胃丸質(zhì)量控制難，不能夠全面準(zhǔn)確控制 藥品質(zhì)量的難題。
[0005] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所述技術(shù)方案是這樣實(shí)現(xiàn)的，該方法具體包括以下步驟：
[0006] (1)對(duì)照品溶液的制備
[0007] 精密稱(chēng)取芍藥苷1.25mg、橙皮苷7.45mg、柚皮苷1.10mg、和厚樸酚2.21mg、厚樸酚 標(biāo)準(zhǔn)品2.32mg，分別溶解于5mL容量瓶中用甲醇定容至刻度線(xiàn)位置處，超聲處理lOmin后定 容至刻度線(xiàn)位置處，甲醇補(bǔ)足；制得濃度分別241yg ? mL-\l420yg ? mL-\208yg ? mL-\438y g ? ml/1和458yg ? ml/1的單個(gè)對(duì)照品溶液;再分別精密吸取五種單個(gè)對(duì)照品溶液，放置于 5mL的容量瓶中，用甲醇定容，即制得已知各濃度的混合對(duì)照品溶液；
[0008] (2)供試品溶液的制備
[0009] 取舒肝健胃丸若干，剝?nèi)ヌ且虏⒂貌Ａа欣徰屑?xì)，精密稱(chēng)取0.2000g，置于5mL容量 瓶中加入5mL甲醇，超聲溶解30min，高速離心20min，取上層清液作為供試品溶液，供測(cè)試使 用；
[0010] ⑶色譜條件
[0011] 采用TC-C18色譜柱(4?6mmX250mm，5Ml);乙腈⑷-水(B)作為流動(dòng)相，梯度洗脫:0-l5min，22%-22%乙腈(體積百分比） ；15-25min，22%-72%乙腈(體積百分比）；25-35min， 72%-72%乙腈（體積百分比）；35-401^11，72%-90%乙腈（體積百分比）；40-50111111，90%-90% 乙腈（體積百分比）；50-55min，90%_22% 乙腈；檢測(cè)波長(zhǎng)：0-10min，230nm; 10_20min， 280nm; 20-55min，294nm;流速 1. OmL ? min-1;檢測(cè)器:VWD檢測(cè)器;柱溫：25 °C ;進(jìn)樣量：10yL;
[0012] (4)測(cè)定：分別精密吸取制備好的對(duì)照品溶液和供試品溶液各10yl，注入液相色 譜，測(cè)定，記錄60min的色譜圖，即得。
【附圖說(shuō)明】
[0013] 圖1為本發(fā)明芍藥苷的高效液相色譜圖。
[0014] 圖2為本發(fā)明橙皮苷的高效液相色譜圖。
[0015] 圖3為本發(fā)明柚皮苷的高效液相色譜圖。
[0016] 圖4本發(fā)明和厚樸酚的高效液相色譜圖。
[0017] 圖5為本發(fā)明厚樸酚的高效液相色譜圖。
[0018] 圖6為本發(fā)明混合對(duì)照品溶液的高效液相色譜圖。
[0019] 圖7為本發(fā)明樣品的高效液相色譜圖。
[0020] 其中:A、芍藥苷;B、橙皮苷;C、柚皮苷;D、和厚樸酚;E、厚樸酚。
[0021 ]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和積極效果：
[0022] (1)本發(fā)明所述方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性和穩(wěn)定性好，可為全面評(píng)價(jià)和控制舒肝健 胃丸質(zhì)量提供理論基礎(chǔ)和科學(xué)依據(jù)。
[0023] (2)本發(fā)明方法采用高效液相色譜法，利用梯度洗脫方式，實(shí)現(xiàn)了同時(shí)測(cè)定舒肝健 胃丸中芍藥苷、橙皮苷、柚皮苷、和厚樸酚、厚樸酚5種有效成分的含量，色譜峰峰形好，分離 度較高，檢測(cè)靈敏度高，可全面、更有效地控制舒肝健胃丸的質(zhì)量。
【具體實(shí)施方式】
[0024]以下結(jié)合附圖和【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明作以進(jìn)一步的闡述，以便本領(lǐng)域的技術(shù)人 員更了解本發(fā)明，但并不以此限制本發(fā)明。
[0025]儀器與試藥
[0026]儀器:安捷倫1100高效液相色譜儀(美國(guó)安捷倫科技中國(guó)有限公司）;GWA-UN4超純 水器(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）;FA1104N萬(wàn)分之一分析天平(上海精密科學(xué)儀器有 限公司天平儀器廠(chǎng)制造）；SK5200H超聲波清洗器(200W59HZ上?？茖?dǎo)儀器有限公司）。
[0027] 試藥:芍藥苷對(duì)照品（批號(hào)：110736-201438;含量為96.4% ;來(lái)源：中國(guó)食品藥品檢 定研究院）；橙皮苷對(duì)照品（批號(hào)：110721 -201316;含量為95.3 % ;來(lái)源：中國(guó)食品藥品檢定 研究院）；柚皮苷對(duì)照品（批號(hào)：1110722-201312;含量為94.7 % ;來(lái)源：中國(guó)食品藥品檢定研 究院）；和厚樸酚對(duì)照品（批號(hào)：110730-201313;含量為99.1 % ;來(lái)源：中國(guó)食品藥品檢定研 究院）；厚樸酚對(duì)照品（批號(hào)：110729-201513;含量為98.8 % ;來(lái)源：中國(guó)食品藥品檢定研究 院）；舒肝健胃丸（山西旺龍神農(nóng)藥業(yè)有限公司；批號(hào)= 20131002,按照衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥 成方制劑中的處方工藝自制兩批，批號(hào)為20151011、20151221);甲醇（色譜純）；水(二次去 離子水）。
【具體實(shí)施方式】
[0028]
[0029] 實(shí)施例1
[0030] (1)對(duì)照品溶液的制備:精密稱(chēng)取芍藥苷1.25mg、橙皮苷7.45mg、柚皮苷1.10mg、和 厚樸酚2.21mg、厚樸酚標(biāo)準(zhǔn)品2.32mg，分別溶解于5mL容量瓶中用甲醇定容至刻度線(xiàn)位置 處，超聲處理lOmin后定容至刻度線(xiàn)位置處，甲醇補(bǔ)足;制得濃度分別241yg ? ? mL-\208yg ? mL-\438yg ? mL-1和458yg ? mL-1的單個(gè)對(duì)照品溶液;再分別精密吸取五種單個(gè) 對(duì)照品溶液，放置于5mL的容量瓶中，用甲醇定容，即制得已知各濃度的混合對(duì)照品溶液。 [0031 ] (2)供試品溶液的制備:取舒肝健胃丸若干，剝?nèi)ヌ且虏⒂貌Ａа欣徰屑?xì)，精密稱(chēng) 取0.2000g，置于5mL容量瓶中加入5mL甲醇，超聲溶解30min，高速離心20min，取上層清液作 為供試品溶液，供測(cè)試使用。
[0032] (3)色譜條件：采用TC-C18色譜柱（4.6111111\25〇111111，5圓） ；乙腈(4)-水(8)作為流動(dòng) 相，梯度洗脫:0-15min，22%-22 %乙腈(體積百分比）；15-25min，22 %-72 %乙腈(體積百分 比）；25-351^11，72%-72%乙腈(體積百分比）；35-40111111，72%-90%乙腈(體積百分比） ；40-50min，90%-90 %乙腈（體積百分比）；50-55min，90%-22%乙腈(體積百分比）；檢測(cè)波長(zhǎng)： 0-10min，230nm; 10-20min，280nm; 20-55min，294nm;流速 1 ? OmL ? min-1;檢測(cè)器:VWD檢測(cè)器； 柱溫：25°C;進(jìn)樣量：10yL。
[0033] (4)測(cè)定:分別精密吸取上述制備好的對(duì)照品溶液和供試品溶液各10yl，注入液相 色譜，測(cè)定，記錄60min的色譜圖，即得。
[0034] 在此色譜條件下芍藥苷、橙皮苷、柚皮苷、和厚樸酚、厚樸酚的出峰時(shí)間及具體出 峰情況見(jiàn)圖1至圖7。
[0035] 方法學(xué)考查
[0036] (1)線(xiàn)性關(guān)系:精密吸取制備好的五種單個(gè)對(duì)照品溶液，進(jìn)樣量分別為0.1、0.5、1、 2、2.5、5、7.5、8、9、10此，在步驟(3)所述的色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，以色譜峰面積為縱坐標(biāo)， 濃度為橫坐標(biāo)，作線(xiàn)性關(guān)系曲線(xiàn)，峰面積對(duì)濃度作線(xiàn)性方程。得線(xiàn)性方程結(jié)果見(jiàn)表1。
[0037]表1線(xiàn)性關(guān)系方程
[0039] (2)精密度實(shí)驗(yàn):精密吸取制備好的混合對(duì)照品溶液，在步驟(3)所述的色譜條件 下連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)得芍藥苷、柚皮苷、橙皮苷、和厚樸酚、厚樸酚的峰面積，計(jì)算得相對(duì)標(biāo)準(zhǔn) 偏差分別為1.71%、0.61%、0.32%、0.62%和0.71%(11 = 6)，結(jié)果表明儀器精密度良好，見(jiàn) 表2。
[0040] 表2精密度測(cè)試實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)
[0043] (3)重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn):取批號(hào)相同的舒肝健胃丸6份，按照步驟(2)所述供試品溶液的制 備方法制備供試品溶液，并在步驟(3)所述的色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，根據(jù)峰面積計(jì)算芍藥 苷、柚皮苷、橙皮苷、和厚樸酚、厚樸酚含量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為〇. 59 %、0.79%、1.17 %、 2.00 %和1.30 %，見(jiàn)表3，表明方法重復(fù)性良好。
[0044] 表3重復(fù)性實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)
[0046] (4)穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液，在步驟(3)所述的色譜條件下分別測(cè)定0、4、 8、12、16、2處的色譜圖，測(cè)定其穩(wěn)定性。根據(jù)芍藥苷、柚皮苷、橙皮苷、和厚樸酚、厚樸酚的峰 面積，計(jì)算得相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為1.54%，1.43 %，1.19%，1.18%和1.88%，見(jiàn)表3，由實(shí)驗(yàn) 數(shù)據(jù)說(shuō)明供試品溶液在24h內(nèi)基本穩(wěn)定。
[0047] 表4穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)
[0050] (5)回收率試驗(yàn):精密稱(chēng)取舒肝健胃丸6份分別置于容量瓶中，并根據(jù)五種活性成 分的含量，在每份樣品中均加入相當(dāng)?shù)纳炙庈铡㈣制ぼ?、橙皮苷、和厚樸酚、厚樸酚?duì)照品， 按照步驟(2)所述供試品溶液的制備方法以及步驟(3)所述的色譜條件進(jìn)行測(cè)定。各組分的 回收率見(jiàn)表5。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該方法回收率較好，準(zhǔn)確率較高。
[0051 ]表5各種成分的加標(biāo)回收率試驗(yàn)數(shù)據(jù)

[0054]樣品含量測(cè)定:按照步驟(2)所述供試品溶液的制備方法以及步驟(3)所述色譜條 件測(cè)定三批供試品溶液，結(jié)果見(jiàn)表6。
[0055]表6樣品含量測(cè)定結(jié)果
[0057]舒肝健胃丸中活性成分較多，而對(duì)于舒肝健胃丸中多個(gè)活性成分同時(shí)進(jìn)行含量測(cè) 定的方法尚未可見(jiàn)。根據(jù)操作性簡(jiǎn)便，重現(xiàn)性好的特點(diǎn)，為提高測(cè)定效率和節(jié)省溶劑，本實(shí) 驗(yàn)采用高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定。具有操作簡(jiǎn)便、精密度好、檢測(cè)靈敏度高的特點(diǎn)，可全面、 更有效地控制該藥的質(zhì)量。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種同時(shí)測(cè)定舒肝健胃丸中五種活性成分的方法，其特征在于，包括以下步驟： (1) 對(duì)照品洛液的制備 精密稱(chēng)取芍藥苷、橙皮苷、柚皮苷、和厚樸酚、厚樸酚標(biāo)準(zhǔn)品，分別溶解于容量瓶中，用 甲醇定容至刻度線(xiàn)位置處，制得濃度分別241 Hg .mL' 1420 Hg .mL' 208 Hg .mL' 438 yg · ml/1和458 yg · ml/1的單個(gè)對(duì)照品溶液;再分別精密吸取五種單個(gè)對(duì)照品溶液，放 置于5 mL的容量瓶中，用甲醇定容，即制得已知各濃度的混合對(duì)照品溶液； (2) 供試品溶液的制備 取舒肝健胃丸若干，剝?nèi)ヌ且虏⒂貌Ａа欣徰屑?xì)，精密稱(chēng)取0.2000 g，置于5 mL容量瓶 中加入5 mL甲醇，超聲溶解30 min，高速離心20 min，取上層清液作為供試品溶液，供測(cè)試 使用； (3) 色譜條件 采用1^-(：18色譜柱；乙腈-水作為流動(dòng)相，梯度洗脫:0-15 min，體積比為22%-22%的乙 腈；15-25 min，體積比為22%-72%的乙腈;25-35 min，體積比為72%-72%的乙腈;35-40 min， 體積比為72%-90%的乙腈;40-50 min，體積比為90%-90%的乙腈;50-55 min，體積比為90%-22%的乙腈；檢測(cè)波長(zhǎng)：O-IOmin，230nm; 10-20 min，280nm ;20-55 min，294 nm;流速1.0 mL · min-1;檢測(cè)器:VWD檢測(cè)器;柱溫:25°C ;進(jìn)樣量：10 yL; (4) 測(cè)定:分別精密吸取制備好的對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μ1，注入液相色譜，測(cè) 定，記錄60min的色譜圖，即得。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種同時(shí)測(cè)定舒肝健胃丸中五種活性成分的方法，其特征在 于，步驟(1)對(duì)照品溶液的制備具體操作步驟為:精密稱(chēng)取芍藥苷1.25mg、橙皮苷7.45mg、柚 皮苷I. IOmg、和厚樸酚2.21mg、厚樸酚標(biāo)準(zhǔn)品2.32mg，分別溶解于5 mL容量瓶中用甲醇定容 至刻度線(xiàn)位置處，超聲處理10 min后定容至刻度線(xiàn)位置處，甲醇補(bǔ)足;制得濃度分別241 μ g · mL-\ 1420 yg · mL-\ 208 yg · mL-\ 438 yg · mL-1 和458 yg · mL-1 的單個(gè)對(duì)照品溶 液。
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK105929083SQ201610556056
【公開(kāi)日】2016年9月7日
【申請(qǐng)日】2016年7月15日
【發(fā)明人】孫艷濤, 趙磊, 喬靜, 姜大雨, 王麗, 付瑤
【申請(qǐng)人】吉林師范大學(xué)