提取、檢測煙草特有亞硝胺的方法、試劑盒及用圖
【專利摘要】本發(fā)明屬于檢測分析領域，涉及提取、檢測煙草特有亞硝胺的方法、試劑盒及用途，具體涉及一種提取煙草特有亞硝胺的方法，包括如下步驟：向含煙草特有亞硝胺的樣品中加入抗壞血酸和提取溶劑進行浸提，分離得到提取液；所述提取溶劑選自水、緩沖鹽水溶液和甲醇中的一種或多種。本發(fā)明還涉及檢測煙草特有亞硝胺的方法以及試劑盒。本發(fā)明提取方法能有效提取出煙草特有亞硝胺。本發(fā)明檢測方法能提高檢測的靈敏度、降低檢出限。本發(fā)明試劑盒可用于提取和/或檢測煙草特有亞硝胺。
【專利說明】
提取、檢測煙草特有亞硝胺的方法、試劑盒及用途
技術領域
[0001] 本發(fā)明屬于檢測分析領域，具體設及一種提取煙草特有亞硝胺的方法，還設及檢 測煙草特有亞硝胺的方法、試劑盒及用途。
【背景技術】
[0002] 煙草特有亞硝胺(TSNAs)是煙草中N-亞硝胺含量最豐富的一類亞硝胺物質，存在 于煙草、煙草制品和卷煙煙氣中。檢測卷煙煙氣中TSNAs的釋放量對正確評價吸煙對健康的 危害具有重要意義。國際癌癥研究署（IARC)對加拿大政府名單中有害成分的毒性評價結果 表明，4-(N-甲基-N-亞硝胺)-1-(3-化晚基)-下酬和N-亞硝基去甲基煙堿純化學成分為可 疑的人體致癌成分。為了減少煙草特有亞硝胺對吸煙者和被動吸煙者健康可能造成的危 害，控制TSNAs在煙草及煙草制品中的含量，已成為一項重要的課題。目前，研究較為深入的 煙草特有亞硝胺包括N-亞硝基去甲基煙堿(NNN)、N-亞硝基假木賊堿(NAB)、N-亞硝基新煙 草堿(NAT)和4-(N-甲基-N-亞硝胺)-1-(3-化晚基)-下酬(NNK)，它們的化學結構式如下：
[00C
[0004] 現(xiàn)有主流煙氣中煙草特有亞硝胺的檢測方法主要包括國家標準GB/T 23228-2008 規(guī)定的氣相色譜-熱能檢測器法(GC-TEA)和液相色譜串聯(lián)S重四級桿質譜法化化C-MS/ MS)。其中，氣相色譜-熱能檢測器法(GC-TEA)的檢測步驟主要包括:捕集二十支卷煙的主流 煙氣總粒相物，由二氯甲燒萃取S次，過活化的堿性氧化侶柱、濃縮，進行GC-TEA檢測。該方 法較成熟，但存在前處理純化步驟多、分析時間長、溶劑耗費大、環(huán)境受污染、檢測器專屬性 強及樣品通量低的缺點。液相色譜串聯(lián)S重四級桿質譜法化PLC-MS/MS)，通常W乙酸錠溶 液為萃取劑，振蕩30min后，由HPLC-MS/MS聯(lián)用儀分析檢測樣品中的TSNAs。雖然該方法縮短 了分析時間，提高了效率，但實際上樣品中的TSNAs含量較低，雜質干擾嚴重，特別是目前國 內大力發(fā)展的低焦油烤煙型卷煙的主流煙氣中TSNAs含量更低，使得HPLC-MS/MS方法的定 量限往往不能滿足檢測要求。
[0005] 抗壞血酸又名維生素 C，是含有6個碳原子的酸性多徑基化合物，化學結構式為：
[0006]
[0007]目前，尚需一種能提高靈敏度和降低檢出限的提取或檢測煙草特有亞硝胺的方 法。
【發(fā)明內容】
[000引本發(fā)明人獲得了一種有效提取樣品中煙草特有亞硝胺的方法。在此基礎上，本發(fā) 明人還獲得了一種能提高靈敏度、降低檢出限的檢測煙草特有亞硝胺的方法；同時，還得到 一種試劑盒，該試劑盒能用于提取和/或檢測煙草特有亞硝胺。
[0009] 本發(fā)明第一方面設及一種提取煙草特有亞硝胺的方法，包括如下步驟：向含煙草 特有亞硝胺的樣品中加入抗壞血酸和提取溶劑進行浸提，分離得到提取液;所述提取溶劑 選自水、緩沖鹽水溶液和甲醇中的一種或多種;優(yōu)選地，提取溶劑為緩沖鹽水溶液。
[0010] 本發(fā)明第一方面的任一實施方式中，向樣品中同時加入提取溶劑和抗壞血酸。
[0011] 本發(fā)明第一方面的任一實施方式中，所述抗壞血酸和樣品的重量比為(0.4-10): 1;優(yōu)選為（0.4-3) :1、（0.5-4) :1、（1-8): 1、（2-9):1、（2-7): 1、（2-5):1 或者（2-4):1;更優(yōu)選 為 0.4:1、0.5:1、3:1、2:1、4:1 或者5:1。
[0012] 本發(fā)明第一方面的任一實施方式中，所述提取方法包括如下A至H中的任意一項或 者多項：
[0013] A.所述樣品選自煙草、煙草制品和卷煙煙氣粒相物中的一種或多種;優(yōu)選地，所述 樣品為卷煙煙氣粒相物，更優(yōu)選為卷煙主流煙氣粒相物；
[0014] B.所述煙草特有亞硝胺選自NNN、NAB、NAT和NNK中的一種或多種；
[0015] C.所述緩沖鹽水溶液的pH值為6.5-7.5，優(yōu)選為7;
[0016] D .所述緩沖鹽水溶液為乙酸錠水溶液；優(yōu)選地，乙酸錠水溶液的濃度為0.05- Imo 1/L，更優(yōu)選為0.08-0.5mo 1/L，進一步優(yōu)選為0.1 mo 1/L;
[0017] E.所述提取溶劑的添加量為0.04-3mL/(mg樣品），優(yōu)選為0. l-2mL/(mg樣品），更優(yōu) 選為0.3mL/(mg樣品）；
[0018] F.所述浸提在超聲條件下進行;優(yōu)選地，超聲時間為20-60分鐘，更優(yōu)選為30分鐘；
[0019] G.所述分離的方式為過濾處理，優(yōu)選采用0.22皿的濾膜過濾；
[0020] H.還包括，在分離前進行靜置的步驟;優(yōu)選地，靜置3-10分鐘，更優(yōu)選靜置5分鐘。
[0021] 本發(fā)明第二方面設及一種檢測煙草特有亞硝胺的方法，包括按照本發(fā)明第一方面 任一所述方法提取得到提取液的步驟;優(yōu)選地，還包括用液相色譜串聯(lián)質譜檢測提取液的 步驟。
[0022] 不拘于理論的限制，抗壞血酸能提高煙草特有亞硝胺的離子化效率，抑制煙草特 有亞硝胺的氧化分解，從而提高了煙草特有亞硝胺的靈敏度，降低了檢出限。并且，抗壞血 酸有助于從樣品中更加有效地提取出煙草特有亞硝胺。
[0023] 本發(fā)明第二方面的任一實施方式中，所述檢測為定量檢測，優(yōu)選W內標法定量檢 巧U;更優(yōu)選地，內標物為煙草特有亞硝胺的気代物;進一步優(yōu)選地，所述煙草特有亞硝胺的 気代物含4個気原子。
[0024] 本發(fā)明第二方面的任一實施方式中，液相色譜操作條件選自如下a至e中的任意一 項或者多項：
[0025] a.液相色譜柱為C18液相色譜柱;優(yōu)選為菲羅口 C18液相色譜柱；
[0026] b.液相色譜柱的規(guī)格為IOOmm X 2. Imm i . d.，1.7皿粒徑；
[0027] 。.色譜柱溫度為20-70°(：，優(yōu)選為30-60°(：，更優(yōu)選為40°(：;
[002引 d.進樣量3-1化L，優(yōu)選為4-祉L，更優(yōu)選為化L
[0029] e.流動相包括流動相A和流動相B;優(yōu)選地，流動相A為甲醇，流動相B為0.2% (V/V) 乙酸水溶液;更優(yōu)選地，流動相的洗脫程序如下表：
[0030]
[0031] 本發(fā)明第二方面的任一實施方式中，質譜操作條件或檢測參數(shù)選自如下（1)至 (13)中的任意一項或者多項：
[0032] (1)離子源為電噴霧電離源；
[0033] (2)掃描方式為正離子掃描；
[0034] (3)電噴霧電壓為4500-6000V，優(yōu)選為5500V;
[0035] (4)離子源溫度為550-700°C，優(yōu)選為650°C ;
[0036] (5)輔助氣壓力為50psi-60psi，優(yōu)選為50psi或60psi ;
[0037] (6)NAB 的定性離子對為 192.1/133.1;
[0038] (7)NAB 的定量離子對為 192.1/162.2;
[0039] (S)NAT 的定性離子對為 190.2/106.1;
[0040] (9)NAT 的定量離子對為 190.2/160.2;
[0041 ] (10)NNK 的定性離子對為 208.2/148.1;
[0042] (11 )NNK 的定量離子對為 208.2/122.2;
[0043] (12) N順的定性離子對為178.2/120.1;
[0044] (13) N順的定量離子對為178.2/148.2。
[0045] 本發(fā)明的一個實施方案中，質譜檢測參數(shù)還包括如下任意一項或者多項：
[0046] (1 )NAB-d4 的定性離子對為196.2/137.2;
[0047] (2)NAB-d4 的定量離子對為 196.2/166.2;
[004引（3)NAT-d4 的定性離子對為 194.1/110.1;
[0049] (4) NAT-d4 的定量離子對為 194.1/164.2;
[0化0] (5作服-(14的定性離子對為212.2/110.1;
[0化1] (6)NNK-d4 的定量離子對為 212.2/126.1;
[0化2] (7作順-(14的定性離子對為182.1/124.1;
[0化3] (8作順-(14的定量離子對為182.1/152.2。
[0054] 本發(fā)明第=方面設及一種試劑盒，包含乙酸錠水溶液和抗壞血酸;優(yōu)選地，乙酸錠 水溶液的濃度為 0.05-lmol/L，更優(yōu)選為 0.05-0.6mol/L、0.08-0.5mol/L、0.07-0.7mol/L、 0.08-0.8mol/L、0.09-0.9mol/L 或者 0.1-lmol/L，進一步優(yōu)選為 0. lmol/L、0.2mol/L、 0.3mol/L、0.4mo 1/L或者0.7mol/l;優(yōu)選地，還包含甲醇和0.2% (v/v)乙酸水溶液;優(yōu)選地， 還包含C18液相色譜柱。
[0055] 本發(fā)明第四方面設及本發(fā)明第=方面所述的試劑盒在提取和/或檢測樣品中煙草 特有亞硝胺中的用途；
[0056] 優(yōu)選地，所述樣品選自煙草、煙草制品和卷煙煙氣粒相物中的一種或多種;更優(yōu)選 地，所述樣品為卷煙煙氣粒相物，進一步優(yōu)選為卷煙主流煙氣粒相物；
[0化7] 優(yōu)選地，所述煙草特有亞硝胺選自NNN、NAB、NAT和NNK中的一種或多種。
[0058] 本發(fā)明第五方面設及抗壞血酸在提取和/或檢測煙草特有亞硝胺，或者在提高煙 草特有亞硝胺的檢出限和/或靈敏度中的用途；
[0059] 優(yōu)選地，所述煙草特有亞硝胺選自NNN、NAB、NAT和NNK中的一種或多種；
[0060] 優(yōu)選地，含有煙草特有亞硝胺的樣品選自煙草、煙草制品和卷煙煙氣粒相物;更優(yōu) 選地，所述樣品為卷煙煙氣粒相物，進一步優(yōu)選為卷煙主流煙氣粒相物或卷煙主流煙氣總 粒相物。
[0061] 本發(fā)明中如無特別說明，"煙草特有亞硝胺"是指存在于煙草中的，含有-N-N = O功 能基團的亞硝胺類物質。
[0062] 本發(fā)明中如無特別說明，"主流煙氣"是指從煙支吸端形成的煙氣。
[0063] 本發(fā)明中如無特別說明，"主流煙氣粒相物"是指從煙支吸端形成的煙氣被吸煙機 上劍橋濾片或玻璃纖維濾片所捕集的物質。
[0064] 本發(fā)明取得的有益效果：
[0065] 1、本發(fā)明提取煙草特有亞硝胺的方法，能有效提取出樣品中的煙草特有亞硝胺物 質。
[0066] 2、本發(fā)明檢測煙草特有亞硝胺的方法，能提高靈敏度、降低檢出限。
[0067] 3、本發(fā)明中，抗壞血酸提高了煙草特有亞硝胺檢測的靈敏度，降低了檢出限。
[0068] 4、本發(fā)明中，抗壞血酸提高了煙草特有亞硝胺的離子化效率，并抑制了煙草特有 亞硝胺的氧化分解。
【附圖說明】
[0069] 為了使本發(fā)明的內容更容易被清楚的理解，下面根據(jù)本發(fā)明的具體實施例并結合 附圖，對本發(fā)明作進一步詳細的說明，其中
[0070] 圖IA實施例1的樣品溶液色譜圖中NAB-d4內標物的色譜峰；
[0071] 圖IB實施例1的樣品溶液色譜圖中NAT-d4內標物的色譜峰；
[0072 ]圖1C實施例1的樣品溶液色譜圖中NNK-d4內標物的色譜峰；
[0073 ]圖ID實施例1的樣品溶液色譜圖中NNN-d4內標物的色譜峰；
[0074]圖2A實施例1的樣品溶液色譜圖中NAB的色譜峰；
[00巧]圖2B實施例1的樣品溶液色譜圖中NAT的色譜峰；
[0076] 圖2C實施例1的樣品溶液色譜圖中NNK的色譜峰；
[0077] 圖2D實施例1的樣品溶液色譜圖中的色譜峰；
[007引圖3A對比例的樣品溶液色譜圖中NAB-d4內標物的色譜峰；
[0079] 圖3B對比例的樣品溶液色譜圖中NAT-d4內標物的色譜峰；
[0080] 圖3C對比例的樣品溶液色譜圖中NNK-d4內標物的色譜峰；
[0081 ]圖3D對比例的樣品溶液色譜圖中NNN-d4內標物的色譜峰；
[0082] 圖4A對比例的樣品溶液色譜圖中NAB的色譜峰；
[0083] 圖4B對比例的樣品溶液色譜圖中NAT的色譜峰；
[0084] 圖4C對比例的樣品溶液色譜圖中NNK的色譜峰；
[0085] 圖4D對比例的樣品溶液色譜圖中N順的色譜峰。
【具體實施方式】
[0086] 實施例1
[0087] 1.試劑
[008引 （1)混合內標溶液:稱取NAB-d4、NAT-d4、NNK-d4和NNN-d4(百靈威科技有限公司） 各10.0 mg，分別置于4個IOmL棟色容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，配制成濃度為1. Omg/mL的 內標儲備液。將4種內標儲備液用甲醇同倍數(shù)稀釋，將稀釋后的4種內標儲備液混合，得到 NAB-d4、NAT-d4、NNK-d4和NNN-d4濃度均為1. Oiig/mL的混合內標溶液。
[0089] (2)提取溶劑:稱取3.85g乙酸錠置于500血容量瓶中（精確至0.1 mg)，加入5.0血混 合內標溶液，用水稀釋至刻度，配制成含10.0 ng/mL內標的0.1mol/L乙酸錠水溶液。
[0090] (3)混合標準溶液:稱取NAB、NAT、NNK和順N (百靈威科技有限公司）各10.0 mg，分別 置于4個10血棟色容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，配制成濃度為1.Omg/血的標準儲備液。將4 種標準儲備液分別用甲醇進行稀釋，將稀釋后的4種標準儲備液混合，配制得到NAB、NAT、 NNK和NN腳農度分別為0. ^ig/mL、1. Oiig/mL、1. Oiig/mL和1. Oiig/mL的混合標準溶液。
[0091] (4)標準工作溶液:移取0.1 mL、0.2mL、0.5mL、1. OmL、2. OmL和5. OmL混合標準溶液 置于不同的IOOmL容量瓶中，再分別加入1.OmL混合內標溶液和Ig抗壞血酸（百靈威科技有 限公司），用O.lmol/L乙酸錠水溶液定容至刻度，即配制成如表1所示的6級標準工作溶液， 其內標濃度均為10.Ong/mL。如樣品濃度超出標準工作溶液覆蓋范圍，可適當擴展標準工作 溶液覆蓋范圍。該TSNAs標準工作溶液應在使用前配制。
[0092] 表1系列標準工作溶液 ^nnnol
[0094] 2.提取
[OOM]按照國家標準GB/T 19609的方法，用直徑為44mm的玻璃纖維濾片捕集5支卷煙的 主流煙氣總粒相物，每個樣品應平行測定2次，所捕集的5支卷煙主流煙氣總粒相物約為 SOmg。將濾片置于50mL錐形瓶中，準確加入15 . OmL提取溶劑和O . 15g抗壞血酸，超聲萃取 SOmin后，靜置5min。取ImL液體過0.22皿濾膜，得到樣品溶液，移至色譜分析瓶中待分析。
[0096] 3.檢測
[0097] 用高效液相色譜-串聯(lián)質譜儀(美國AB公司，型號為Qtrap 5500)分別對標準工作 溶液和樣品溶液進行檢測分析。得到的樣品溶液色譜圖中，內標物的色譜峰如圖1A-1D所 示，四種TSNAs物質的色譜峰如圖2A-2D所示。
[009引色譜操作條件：色譜柱采用菲羅口 C18液相色譜柱，規(guī)格為IOOmm X 2.1mm i.d.， 1.7曲I粒徑;色譜柱溫度為40°C ;進樣量為扣L流動相:流動相A為甲醇，流動相B為0.2% (體 積比）的乙酸溶液;流動相的梯度洗脫程序見表2。
[0099] 表2快速型高效液相色譜梯度洗脫程序
[0100]
[0101] 質譜操作條件:離子源：電噴霧電離源化SI);掃描方式:正離子掃描;檢測方式:多 反應監(jiān)測(MRM);電噴霧電壓：5500V;離子源溫度:650°C ;輔助氣Gas 1壓力：6化Si ;輔助氣 Gas2壓力：SOpsi。
[0102] 各分析物的定量離子對、定性離子對及碰撞能量(CE)見表3。
[0103] 表3質譜檢測參數(shù)表
[0104]
[0105] 4.計算
[0106] (1)根據(jù)上面3.中標準工作溶液的檢測結果，得到NAB、NAT、NNK和N順的標準曲線 方程，見表4。其中，橫坐標表示TSNAs濃度與內標物濃度比值，縱坐標表示TSNAs峰面積與內 標物峰面積比值。
[0107] 表4四種TSNAs的標準曲線方程和定量檢出限 [010 引
[0109] (2)檢巧嗎到的樣品溶液中NAB、NAT、NNK和NNN的峰面積如表5所示。
[0110] 表5四種TSNAs的峰面積檢測結果 「01111
LO112」（3)化惦巧化浴汲的四種TSMsi^其內稱物的峰曲積粒測結呆，結合上曲（1)中四 種TSNAs的標準曲線方程，計算得到樣品溶液中四種TSNAs的濃度。再根據(jù)下式計算得到每 支卷煙豐流煙氣中TSNAs的傳輸量，結果見表6。
[0113]
[0114] 式中；
[0115] m-每支卷煙主流煙氣中TSNAs的傳輸量，單位為納克每支(ng/cig);
[0116] A-樣品溶液中TSNAs的濃度，單位為納克每毫升(ng/mU ;
[0117] V-樣品溶液體積，單位為毫升(mU ;
[011引n-煙支數(shù)量，單位為支(Cig)。
[0119] 表6每支卷煙主流煙氣中TSNAs的傳輸量
[0120] LUIZI」 刈化例
[0122] 在配制標準工作溶液和提取得到樣品溶液的步驟中不加入抗壞血酸。其它操作參 照實施例1進行。
[0123] 得到的樣品溶液色譜圖中，內標物的色譜峰如圖3A-3D所示，四種TSNAs物質的色 譜峰如圖4A-4D所示。四種TSNAs物質的峰面積見表5。計算得到的每支卷煙主流煙氣中 TSNAs的傳輸量見表6。
[0124] 由表5可知，與對比例不加抗壞血酸相比，本發(fā)明加入抗壞血酸之后，NAT、NNK、NNN 物質檢測的峰面積大大增加，而且對于對比例無法檢測到峰面積的NAB物質，本發(fā)明也檢測 到 了較大的峰面積，因此，本發(fā)明方法提高了四種TSNAs檢測的靈敏度，降低了檢出限。
[0125] 由表6可知，與對比例相比，本發(fā)明可定量檢測出對比例無法定量的卷煙主流煙氣 中NAB傳輸量，本發(fā)明方法提高了 TSNAs檢測的靈敏度，降低了檢出限。并且，本發(fā)明和對比 例所檢測到卷煙主流煙氣中其它幾種TSNAs物質的傳輸量結果相近。
[0126] 顯然，上述實施例僅僅是為清楚地說明所作的舉例，而并非對實施方式的限定。對 于所屬領域的普通技術人員來說，在上述說明的基礎上還可W做出其它不同形式的變化或 變動。運里無需也無法對所有的實施方式予W窮舉。而由此所引伸出的顯而易見的變化或 變動仍處于本發(fā)明創(chuàng)造的保護范圍之中。
【主權項】
1. 一種提取煙草特有亞硝胺的方法，包括如下步驟： 向含煙草特有亞硝胺的樣品中加入抗壞血酸和提取溶劑進行浸提，分離得到提取液； 所述提取溶劑選自水、緩沖鹽水溶液和甲醇中的一種或多種； 優(yōu)選地，抗壞血酸和提取溶劑同時加入； 優(yōu)選地，提取溶劑為緩沖鹽水溶液。2. 根據(jù)權利要求1所述的提取方法，其中，所述抗壞血酸和樣品的重量比為(0.4-10): 1;優(yōu)選為(1-8):1;更優(yōu)選為3:1。3. 根據(jù)權利要求1所述的提取方法，其特征在于如下A至Η中的任意一項或者多項： Α.所述樣品選自煙草、煙草制品和卷煙煙氣粒相物中的一種或多種;優(yōu)選地，所述樣品 為卷煙煙氣粒相物，更優(yōu)選為卷煙主流煙氣粒相物； Β.所述煙草特有亞硝胺選自NNN、NAB、NAT和ΝΝΚ中的一種或多種； C. 所述緩沖鹽水溶液的pH值為6.5-7.5，優(yōu)選為7; D. 所述緩沖鹽水溶液為乙酸銨水溶液;優(yōu)選地，乙酸銨水溶液的濃度為0.05-lmol/L， 更優(yōu)選為〇. 08-0.5mol/L，進一步優(yōu)選為0. lmol/L; E. 所述提取溶劑的添加量為0.04-3mL/(mg樣品），優(yōu)選為0. l-2mL/(mg樣品），更優(yōu)選為 0.3mL/(mg樣品）； F. 所述浸提在超聲條件下進行;優(yōu)選地，超聲時間為20-60分鐘，更優(yōu)選為30分鐘； G. 所述分離的方式為過濾處理，優(yōu)選采用0.22μπι的濾膜過濾； Η.還包括，在分離前進行靜置的步驟;優(yōu)選地，靜置3-10分鐘，更優(yōu)選靜置5分鐘。4. 一種檢測煙草特有亞硝胺的方法，包括按照權利要求1至3中任一項所述方法提取得 到提取液的步驟;優(yōu)選地，還包括用液相色譜串聯(lián)質譜檢測提取液的步驟。5. 根據(jù)權利要求4所述的檢測方法，其中，所述檢測為定量檢測，優(yōu)選以內標法定量檢 測;更優(yōu)選地，內標物為煙草特有亞硝胺的氘代物;進一步優(yōu)選地，所述煙草特有亞硝胺的 氖代物含4個氖原子。6. 根據(jù)權利要求4或5所述的檢測方法，其中，液相色譜操作條件選自如下a至e中的任 意一項或者多項： a. 液相色譜柱為C18液相色譜柱;優(yōu)選為菲羅門C18液相色譜柱； b. 液相色譜柱的規(guī)格為100_X2.1mm i.d.，1·7μηι粒徑； c. 色譜柱溫度為20-70 °C，優(yōu)選為30-60 °C，更優(yōu)選為40 °C ; d. 進樣量為3-10yL，優(yōu)選為4-8yL，更優(yōu)選為5yL; e. 流動相包括流動相A和流動相B;優(yōu)選地，流動相A為甲醇，流動相B為0.2% (V/V)乙酸 水溶液;更優(yōu)選地，流動相的洗脫程序如下表：7. 根據(jù)權利要求4或5所述的方法，質譜操作條件或檢測參數(shù)選自如下（1)至（13)中的 任意一項或者多項： (1) 離子源為電噴霧電離源； (2) 掃描方式為正離子掃描； (3) 電噴霧電壓為4500-6000V，優(yōu)選為5500V; (4) 離子源溫度為550-700°C，優(yōu)選為650°C ; (5) 輔助氣壓力為50-60psi，優(yōu)選為50psi或60psi ; (6) NAB的定性離子對為192 · 1/133 · 1; (7) NAB的定量離子對為192.1/162.2; (8) NAT的定性離子對為190 · 2/106 · 1; (9) NAT的定量離子對為190 · 2/160 · 2; (10) NNK的定性離子對為208.2/148.1; (11 )NNK的定量離子對為208.2/122.2; (12) NNN的定性離子對為178.2/120.1; (13) NNN的定量離子對為178.2/148.2。8. -種試劑盒，包含乙酸銨水溶液和抗壞血酸;優(yōu)選地，乙酸銨水溶液的濃度為0.05-1111〇1/1，更優(yōu)選為0.08-0.51]1〇1/1，進一步優(yōu)選為0.11]1〇1/1 ;優(yōu)選地，還包含甲醇和0.2%(>/ V)乙酸水溶液;優(yōu)選地，還包含C18液相色譜柱。9. 權利要求8所述試劑盒在提取和/或檢測樣品中的煙草特有亞硝胺中的用途； 優(yōu)選地，所述樣品選自煙草、煙草制品和卷煙煙氣粒相物中的一種或多種;更優(yōu)選地， 所述樣品為卷煙煙氣粒相物，進一步優(yōu)選為卷煙主流煙氣粒相物； 優(yōu)選地，所述煙草特有亞硝胺選自NNN、NAB、NAT和NNK中的一種或多種。10. 抗壞血酸在提取和/或檢測煙草特有亞硝胺，或者在提高煙草特有亞硝胺的檢出限 和/或靈敏度中的用途;優(yōu)選地，所述煙草特有亞硝胺選自NNN、NAB、NAT和NNK中的一種或多 種。
【文檔編號】G01N30/06GK105954444SQ201610581289
【公開日】2016年9月21日
【申請日】2016年7月22日
【發(fā)明人】鄧其馨, 黃延俊, 黃朝章, 張建平, 黃華發(fā), 葉仲力, 劉澤春, 許寒春, 謝衛(wèi)
【申請人】福建中煙工業(yè)有限責任公司