一種快速免疫層析法檢測塞卡病毒Zika virus的檢測條的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種快速免疫層析檢測塞卡病毒Zika virus的檢測條或檢測盒，所述免疫檢測條共分6個(gè)區(qū)：第一區(qū)為加樣墊；第二區(qū)為固相化塞卡抗原標(biāo)記物區(qū)或抗塞卡病毒抗原的特異抗體標(biāo)記物；第三區(qū)為檢測區(qū)T為包被抗體噴涂區(qū)，T區(qū)與第二區(qū)相匹配；第四區(qū)為對照區(qū)，固相化非特異抗體；第五區(qū)為吸水器；第六區(qū)為硝基纖維層析膜。本發(fā)明所述的檢測條或檢測盒，只需少量待測樣品，不需借助任何設(shè)備，十分鐘即可得到檢測結(jié)果，簡便快速，且可上藥房購買，病人可自身檢測。
【專利說明】
一種快速免疫層析法檢測塞卡病毒Zika Vi rus的檢測條
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及免疫檢測領(lǐng)域，尤其涉及一種快速免疫層析法檢測塞卡病毒的檢測條或檢測盒。
【背景技術(shù)】
[0002]2015年5月起，塞卡病毒(Zika virus)疫情在巴西，南美和拉丁美洲大肆流行，并有向全世界擴(kuò)散趨勢，迄今巴西已有150多萬人感染。感染癥狀溫和如發(fā)燒、皮疹、關(guān)節(jié)痛或結(jié)膜炎等癥狀，并且會引起小頭畸形嬰兒和大腦損傷，也會引起成人神經(jīng)損傷，甚至死亡。
[0003]塞卡病毒(Zika virus)通過蚊蟲叮咬傳播，亦可通過胎盤傳播，目前市場上對于塞卡病毒沒有特異性的治療方法，對于該病毒的檢測，大多采用PCR的方法，但是此法需要特有的PCR儀，還需要專業(yè)技術(shù)人員精細(xì)的操作，并且價(jià)格昂貴，檢測耗時(shí)較長。因此，一旦病情爆發(fā)或流行，能否快速簡便的檢測該病毒成為能否有效控制疫情發(fā)展的關(guān)鍵因素。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種快速免疫層析法檢測塞卡病毒的檢測條或檢測盒。
[0005]為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案:
[0006]本發(fā)明提供了一種快速免疫層析檢測塞卡病毒Zikavirus的檢測條或檢測盒，所述免疫檢測條共分6個(gè)區(qū):第一區(qū)為加樣墊;第二區(qū)為固相化塞卡抗原標(biāo)記物區(qū)或抗塞卡病毒抗原的特異抗體標(biāo)記物;第三區(qū)為檢測區(qū)T為包被抗體噴涂區(qū)，檢測區(qū)T與第二區(qū)相匹配；第四區(qū)為對照區(qū)，固相化非特異抗體;第五區(qū)為吸水器;第六區(qū)為硝基纖維層析膜；
[0007]加滴待測樣品后，借助或不借助緩沖液使待測液體沿層析膜上行，在T區(qū)形成免疫復(fù)合物，其強(qiáng)度與待測物含量成正比。如T區(qū)出現(xiàn)色帶為塞卡病毒感染陽性結(jié)果。如T區(qū)沒有色帶出現(xiàn)，則為待測對象沒有被塞卡病毒感染。
[0008]優(yōu)選的，在檢測條檢測區(qū)T區(qū)噴涂抗人體免疫球蛋白IgG或IgM，第二區(qū)標(biāo)記物為塞卡病毒提取物或塞卡病毒基因蛋白，在檢測結(jié)果時(shí)，如病毒感染檢測區(qū)T區(qū)出現(xiàn)“抗人體免疫球蛋白IgG或IgM—病毒抗體一病毒標(biāo)記物”免疫復(fù)合物沉淀線，待測樣品含人體經(jīng)塞卡病毒感染因而產(chǎn)生的抗體。
[0009]優(yōu)選的，在檢測條檢測區(qū)T區(qū)噴涂包被特異性動物抗塞卡病毒抗體，第二區(qū)標(biāo)記物為與T區(qū)包被抗體相配對的另一特異性動物抗塞卡病毒抗體，在檢測結(jié)果時(shí)，如病毒感染，檢測區(qū)T區(qū)出現(xiàn)“包被病毒抗體一待測病毒抗原一標(biāo)記病毒抗體”免疫復(fù)合物沉淀線，待測樣品含塞卡病毒抗原。
[0010]優(yōu)選的，所述的檢測條可置于一個(gè)檢測盒中。
[0011]優(yōu)選的，待測樣品為離體的血樣，血清，血漿，尿液、鼻液或手指血。
[0012]優(yōu)選的，待測樣品加入第一區(qū)后，可用緩沖液將待測樣品展開上行或者不用緩沖液，用樣品直接展開。
[0013]本發(fā)明的有益效果:本發(fā)明所述的檢測條或檢測盒，能夠快速特異的檢測塞卡病毒，在使用過程中只需少量待測樣品，十分鐘即可獲得檢測結(jié)果，不需要借助任何設(shè)備，且可上藥房購買，病人可自身檢測。
【具體實(shí)施方式】
[0014]本發(fā)明提供了一種快速免疫層析檢測塞卡病毒Zikavirus的檢測條，所述免疫檢測條共分6個(gè)區(qū):第一區(qū)為加樣墊;第二區(qū)為固相化塞卡抗原標(biāo)記物區(qū)或抗塞卡病毒抗原的特異抗體標(biāo)記物;第三區(qū)為檢測區(qū)T為包被抗體噴涂區(qū)，檢測區(qū)T與第二區(qū)相匹配;第四區(qū)為對照區(qū)，固相化非特異抗體;第五區(qū)為吸水器;第六區(qū)為硝基纖維層析膜。
[0015]本發(fā)明所述的快速免疫層析檢測塞卡病毒Zikavirus抗體的檢測條的檢測病毒抗體的反應(yīng)原理和過程:滴加待測樣品于加樣墊，液體依層析原理上升，如樣品中存在病毒抗體，行至第二區(qū)，與標(biāo)記抗體形成“抗體-標(biāo)記抗原”復(fù)合物。所述的復(fù)合物持續(xù)上升至檢測區(qū)T，在檢測區(qū)T處形成“固相抗體-抗病毒抗體-標(biāo)記抗原”復(fù)合物，顯色帶現(xiàn)于檢測區(qū)T，其結(jié)果為病毒抗體檢測呈陽性，如檢測區(qū)T無色帶顯現(xiàn)，其結(jié)果為病毒感染呈陰性結(jié)果。
[0016]本發(fā)明所述的快速免疫層析檢測塞卡病毒Zikavirus抗原的檢測條的檢測病毒抗原的反應(yīng)原理和過程:滴加待測樣品于加樣墊;液體依層析展開原理上行。如樣品中存在抗原，形成“抗原-標(biāo)記抗抗”復(fù)合物，該復(fù)合物持續(xù)上升至檢測區(qū)T，在檢測區(qū)T處形成“固相抗體-抗原-標(biāo)記抗體”復(fù)合物。如為金標(biāo)測試條，顯色帶顯現(xiàn)于檢測區(qū)T，其結(jié)果為病毒呈抗原檢測陽性。如檢測區(qū)T無色帶顯現(xiàn)，其結(jié)果為病毒呈抗原檢測陰性。
[0017]本發(fā)明所述的快速免疫層析檢測塞卡病毒Zikavirus抗體的檢測條的具體結(jié)構(gòu)優(yōu)選的如圖1所示，從檢測條的底端依次排列第一區(qū)、第二區(qū)、第六區(qū)、第三區(qū)、第四區(qū)、第五區(qū)。其中第一區(qū)位于檢測條的底端，為加樣墊，使用過程中將待測樣品加滴于第一區(qū)的樣品墊上;第二區(qū)緊挨著第一區(qū)，為標(biāo)記病毒抗原固相小片，第二區(qū)的固相小片上的標(biāo)記物為塞卡病毒提取物或塞卡病毒基因蛋白；第六區(qū)位于第二區(qū)和第三區(qū)中間，為硝基纖維層析膜區(qū)，在其上固定有硝酸纖維素層析膜第三區(qū)位于第六區(qū)和第四區(qū)中間，為檢測區(qū)T，包被抗體噴涂區(qū)帶，其中優(yōu)選的包括Tl檢測線和T2檢測線，所述的Tl檢測線上固定的為動物抗人免疫球蛋白IgG，T2檢測線上固定的為動物抗人免疫球蛋白IgM;第四區(qū)位于第三區(qū)和第五區(qū)中間，為對照區(qū)，在對照區(qū)固相化非特異抗體;第5區(qū)為吸水區(qū)，第5區(qū)上固定有紙纖維片，用來吸收水分。
[0018]本發(fā)明中所述的抗人體免疫球蛋白IgG、IgM和塞卡病毒提取物或塞卡病毒基因蛋白優(yōu)選的來自美國JAJ internat1nal，Inc.San Di ego，制作方法參考中國專利ZL00118669.8，ZL98122892.5，ZL03142460.0，其中所述的塞卡病毒提取物或塞卡病毒基因蛋白優(yōu)選的材料來自美國JAJ internat1nal, Inc.San Diego。
[0019]本發(fā)明所述的快速免疫層析檢測塞卡病毒Zikavirus抗原的檢測條的具體結(jié)構(gòu)優(yōu)選的如圖2所示，從檢測條的底端依次排列第一區(qū)、第二區(qū)、第六區(qū)、第三區(qū)、第四區(qū)、第五區(qū)。其中第一區(qū)位于檢測條的底端，為加樣墊，使用過程中將待測樣品加滴于第一區(qū)的樣品墊上;第二區(qū)緊挨著第一區(qū)，為固相標(biāo)記抗體，優(yōu)選的為金標(biāo)單克隆抗體;第六區(qū)位于第二區(qū)和第三區(qū)中間，為硝基纖維層析膜區(qū)，第三區(qū)位于第六區(qū)和第四區(qū)中間，為檢測區(qū)T:包被抗體噴涂區(qū)帶，檢測區(qū)T包被抗體與第二區(qū)標(biāo)記抗體相匹配.第四區(qū)位于第三區(qū)和第五區(qū)中間，為對照區(qū)，在對照區(qū)固相化非特異抗體;第5區(qū)為吸水區(qū)，第5區(qū)上固定有紙纖維片，用來吸收水分。
[0020]下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明提供的快速免疫層析檢測塞卡病毒Zikavirus的檢測條進(jìn)行詳細(xì)的說明，但是不能把它們理解為對本發(fā)明保護(hù)范圍的限定。
[0021]實(shí)施例1
[0022]快速免疫層析檢測塞卡病毒Zikavirus抗體的檢測條或檢測盒，所述免疫檢測條共分6個(gè)區(qū):其中第一區(qū)位于檢測條的一端，為加樣墊，使用過程中將待測樣品加滴于第一區(qū)的樣品墊上;第二區(qū)緊挨著第一區(qū)，為標(biāo)記病毒抗原固相小片，第三區(qū)的固相小片上的標(biāo)記物為標(biāo)記抗原為基因蛋白編號1248;第六區(qū)位于第二區(qū)和第三區(qū)中間，為硝基纖維層析膜區(qū)，在其上固定有硝酸纖維素層析膜;第三區(qū)位于第六區(qū)和第四區(qū)中間，為檢測區(qū)T，包被抗體噴涂區(qū)帶，其中優(yōu)選的包括Tl檢測線和T2檢測線，所述的Tl檢測線上固定的為動物抗人免疫球蛋白IgG，T2檢測線上固定的為動物抗人免疫球蛋白IgM; Tl區(qū)噴涂抗人免疫球蛋白IgG編號701-2毫克/毫升，T2區(qū)噴涂抗人免疫球蛋白IgM編號704-2毫克/毫升，第四區(qū)位于第三區(qū)和第五區(qū)中間，為對照區(qū)，在對照區(qū)固相化非特異抗體;第五區(qū)為吸水區(qū)，第五區(qū)上固定有紙纖維片，用來吸收水分。
[0023]按說明書附圖圖1裝配層析條，置予檢測盒內(nèi)，檢測時(shí)，滴加1-2滴展開液，于10分鐘觀察檢測結(jié)果，結(jié)果如說明書附圖圖3所示，其中圖3A是T區(qū)同時(shí)噴涂IgG和IgM的陽性結(jié)果示意圖，圖3B為T區(qū)噴涂IgG的陽性結(jié)果示意圖，圖3C為噴涂IgM的陽性結(jié)果示意圖，圖3D為陰性結(jié)果示意圖。
[0024]實(shí)施例2
[0025]快速免疫層析檢測塞卡病毒Zikavirus抗原的檢測條，所述免疫檢測條共分6個(gè)區(qū):其中第一區(qū)位于檢測條的一端，為加樣墊，使用過程中將待測樣品加滴于第一區(qū)的樣品墊上;第二區(qū)緊挨著第一區(qū)，為標(biāo)記病毒抗體固相小片，第三區(qū)的固相小片上的標(biāo)記物為包被抗體:T區(qū)噴涂塞卡病毒單克隆抗體編號084-2毫克/毫升;第六區(qū)位于第二區(qū)和第三區(qū)中間，為硝基纖維層析膜區(qū)，在其上固定有硝酸纖維素層析膜;第三區(qū)位于第六區(qū)和第四區(qū)中間，為檢測區(qū)T，標(biāo)記抗體為金標(biāo)另一相配對的單克隆抗體編號024-2毫克/毫升，第四區(qū)位于第三區(qū)和第五區(qū)中間，為對照區(qū)，在對照區(qū)固相化非特異抗體;第五區(qū)為吸水區(qū)，第五區(qū)上固定有紙纖維片，用來吸收水分。
[0026]按說明書附圖圖2裝配層析條，置予檢測盒內(nèi)，檢測時(shí)，滴入I滴手指血血樣于第一區(qū)加樣孔內(nèi)，然后立即滴加I滴展開液，于10分鐘觀察檢測結(jié)果，結(jié)果如說明書附圖圖4所示，其中圖4A為陽性結(jié)果示意圖，圖4B為陰性結(jié)果示意圖。
[0027]由以上實(shí)施例可知，本發(fā)明所述的檢測條或檢測盒，能夠快速特異的檢測塞卡病毒，在使用過程中只需少量待測樣品，十分鐘即可獲得檢測結(jié)果，不需借助任何設(shè)備，且可上藥房購買，病人可自身檢測。
[0028]以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤飾，這些改進(jìn)和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種快速免疫層析檢測塞卡病毒Zika virus的檢測條，其特征在于，免疫檢測條共分6個(gè)區(qū):第一區(qū)為加樣墊;第二區(qū)為固相化塞卡抗原標(biāo)記物區(qū)或抗塞卡病毒抗原的特異抗體標(biāo)記物;第三區(qū)為檢測區(qū)T包被抗體噴涂區(qū)，檢測區(qū)T與第二區(qū)相匹配;第四區(qū)為對照區(qū)，所述對照區(qū)設(shè)置有固相化非特異抗體;第五區(qū)為吸水器;第六區(qū)為硝基纖維層析膜；2.依據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測條，其特征在于，在檢測條檢測區(qū)T區(qū)噴涂抗人體免疫球蛋白IgG或IgM，第二區(qū)標(biāo)記物為塞卡病毒提取物或塞卡病毒基因蛋白，在檢測結(jié)果時(shí)，如病毒感染，檢測區(qū)T區(qū)出現(xiàn)“抗人體免疫球蛋白IgG或IgM—病毒抗體一病毒標(biāo)記物”免疫復(fù)合物沉淀線，待測樣品含人體經(jīng)塞卡病毒感染因而產(chǎn)生的抗體。3.依據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測條，其特征在于，在檢測條檢測區(qū)T區(qū)噴涂包被特異性動物抗塞卡病毒抗體，第二區(qū)標(biāo)記物為與T區(qū)包被抗體相配對的另一特異性動物抗塞卡病毒抗體，在檢測結(jié)果時(shí)，如病毒感染，檢測區(qū)T區(qū)出現(xiàn)“包被病毒抗體一待測病毒抗原一標(biāo)記病毒抗體”免疫復(fù)合物沉淀線，待測樣品含塞卡病毒抗原。4.依據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測條，其特征在于，所述的檢測條置于一個(gè)檢測盒中。5.依據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測條，其特征在于所述的待測樣品為離體的血液，尿液、鼻液或手指血。6.依據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測條，其特征在于，待測樣品加入第一區(qū)后，用緩沖液將待測樣品展開上行或者不用緩沖液，用樣品直接展開。
【文檔編號】G01N33/558GK105954512SQ201610384076
【公開日】2016年9月21日
【申請日】2016年6月1日
【發(fā)明人】詹姆斯·儆翊·盧, 惟釗·盧, 胡成龍
【申請人】盧氏實(shí)驗(yàn)室公司, 南京路始生物科技有限公司