一種室溫磷光檢測苯甲酸的方法
【專利摘要】一種室溫磷光檢測苯甲酸的方法，本發(fā)明涉及檢測苯甲酸的方法。本發(fā)明要解決的現(xiàn)有的苯甲酸的檢測方法成本高、條件苛刻、樣品處理繁瑣、選擇性差、檢測線性范圍窄的技術(shù)問題。本方法是：以1?溴代芘作為磷光分子探針，在環(huán)糊精水溶液中，采用室溫磷光光譜法進行檢測。磷光光譜在最大磷光波長處的磷光光強比空白試樣顯著增強則可以對苯甲酸進行定性檢測，用標準曲線法對苯甲酸進行定量檢測，該檢測方法不受其它常見食品添加劑和常見酸的影響，檢出限低至0.68μmol/L，可用食品中苯甲酸的檢測，如飲料等。
【專利說明】
一種室溫磷光檢測苯甲酸的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及檢測苯甲酸的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 苯甲酸又叫安息香酸，常被用作食品防腐劑和添加劑，苯甲酸對真菌，酵母菌，霉 菌和細菌等抑制作用較強，苯甲酸本身具有一定的毒性，攝入過量會對人體健康造成危害， 因此開展對苯甲酸的檢測對于生物、化學(xué)、環(huán)境及食品安全等都有著特殊意義。目前苯甲酸 的測量方法有很多，如頂空液相微萃取，液膜電極法，高效液相色譜法，毛細管電泳法等等。 總的來看，雖然這些方法靈敏度高，但是他們需要昂貴的儀器、精準的實驗條件控制、復(fù)雜 的樣品處理，同時這些方法的單一選擇性差、檢測線性范圍窄的缺點。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明要解決的現(xiàn)有的苯甲酸的檢測方法成本高、條件苛刻、樣品處理繁瑣、選擇 性差、檢測線性范圍窄的技術(shù)問題，而提供一種室溫磷光檢測苯甲酸的方法。
[0004] 本發(fā)明的室溫磷光檢測苯甲酸的方法是：以1-溴代芘（Ι-BrPy)作為磷光分子探 針，在環(huán)糊精(CD)水溶液中，采用室溫磷光光譜法進行定性或定量檢測。
[0005] 定性檢測的方法具體按以下步驟進行:將待測試樣加入到環(huán)糊精(CD)水溶液中， 再加入1-溴代芘（Ι-BrPy)作為磷光分子探針，混合均勻后得到待檢溶液，在激發(fā)波長為 345nm的條件下檢測待檢溶液的室溫磷光光譜，如果在最大發(fā)射波長處的磷光強度比空白 試樣顯著增強，則可判定該待測試樣中含有苯甲酸。
[0006] 定量檢測的方法具體按以下步驟進行:將苯甲酸標準品加入到環(huán)糊精(CD)水溶液 中，配制一系列標準試樣，再加入1-溴代芘（Ι-BrPy)作為磷光分子探針，混合均勾后得到標 準試樣溶液，在激發(fā)波長為345nm的條件下測試標準試樣溶液的室溫磷光光譜，得到在最大 發(fā)射波長處的磷光強度，以苯甲酸濃度為橫作標，以最大發(fā)射波長處的磷光強度為縱作標， 作出標準曲線；用與標準品相同的方法檢測待測試樣的磷光強度，從標準曲線上查出待測 試樣中的苯甲酸的濃度。
[0007] 本發(fā)明以1-溴代芘（Ι-BrPy)為磷光分子探針，1-溴代芘的分子結(jié)構(gòu)式為：
在環(huán)糊精(CD)水溶液中，苯甲酸的結(jié)構(gòu)和CD的空腔匹配性比較好，通 ， 過苯甲酸在CD空腔內(nèi)進行空間調(diào)節(jié)作用和空間誘導(dǎo)作用，使1-溴代芘與苯甲酸、環(huán)糊精形 成穩(wěn)定的三元復(fù)合物，顯著地增強了 1-溴代芘（Ι-BrPy)的室溫磷光發(fā)射強度，即使在不除 氧的條件下也有相同的現(xiàn)象，同時也不需要刻意調(diào)節(jié)pH值?；谶@種結(jié)合導(dǎo)致的室溫磷光 變化，本發(fā)明采用室溫磷光光譜法建立了一種新的苯甲酸檢測方法，并可以利用標準工作 曲線法進行含量推算。
[0008] 用該方法可以從常見的食品添加劑和常見的酸中單一選擇性地定量或定性檢測 苯甲酸，不受其它常見食品添加劑和常見的酸的影響，例如草酸、檸檬酸、蛋氨酸、絲氨酸、 蘇氨酸、白氨酸、苯丙氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸、冰乙酸、磷酸、抗壞血酸、酒石酸、糖精、葡 萄糖和山梨酸等。該方法選擇性強、靈敏度高、檢出限低至于〇.68ymol/L，而且1-溴代芘具 有很好的光譜性能、高溶解度和低污染的特點，使本發(fā)明的方法具有取樣量少、成本低、操 作簡便、響應(yīng)時間迅速的優(yōu)點?？捎檬称分斜郊姿岬臋z測，如飲料等。
【附圖說明】
[0009] 圖1是實施例1試驗1中各種常見的食品添加劑及酸的室溫磷光光譜圖；
[0010] 圖2是實施例1試驗1中各種常見的食品添加劑及酸及光譜強度圖；
[0011] 圖3是實施例1試驗2中磷光強度隨pH值的變化關(guān)系曲線圖；
[0012] 圖4是實施例1試驗3中的磷光光譜圖；
[0013]圖5是實施例1試驗3中0~7.0X10-3mol/L范圍內(nèi)磷光強度隨苯甲酸濃度的變化關(guān) 系曲線圖；
[0014] 圖6是實施例1試驗3中0~7.0Xl(T4m〇l/L范圍內(nèi)磷光強度隨苯甲酸濃度的變化關(guān) 系曲線圖；
[0015] 圖7是實施例1試驗4中磷光光譜圖；
[0016] 圖8是實施例1試驗4中各食品添加劑和酸的光強圖；
[0017] 圖9是實施例2試驗1的磷光光譜強度與物質(zhì)種類的關(guān)系直方圖；
[0018] 圖10是實施例3試驗1的磷光光譜強度與物質(zhì)種類的關(guān)系直方圖。
【具體實施方式】
【具體實施方式】 [0019] 一：本實施方式的室溫磷光檢測苯甲酸的方法是：以1-溴代芘（1-BrPy)作為磷光分子探針，在環(huán)糊精(CD)水溶液中，采用室溫磷光光譜法進行定性或定量檢 測 。
【具體實施方式】 [0020] 二:本實施方式與一不同的是:定性檢測的方法具體 按以下步驟進行:將待測試樣加入到環(huán)糊精(CD)水溶液中，再加入1-溴代芘（Ι-BrPy)作為 磷光分子探針，混合均勻后得到待檢溶液，在激發(fā)波長為345nm的條件下檢測待檢溶液的室 溫磷光光譜，如果在最大發(fā)射波長處的磷光強度比空白試樣顯著增強，則可判定該待測試 樣中含有苯甲酸。
【具體實施方式】 [0021] 三:本實施方式與二不同是環(huán)糊精(CD)水溶液中，環(huán) 糊精為α、β、γ-環(huán)糊精。其它與二相同。
【具體實施方式】 [0022] 四：本實施方式與二或三不同是環(huán)糊精(CD)水溶液 中，環(huán)糊精的濃度為1. 〇 X 10-3mol/L~4.0 X 10-3mol/L。其它與二或三相同。
【具體實施方式】 [0023] 五:本實施方式與二至四之一不同是1-溴代芘的濃度 為1.0 X 10_8mol/L~1.0 X 10_6mol/L。其它與二至四之一相同。
【具體實施方式】 [0024] 六:本實施方式與二至五之一不同是最大發(fā)射波長為 612nm。其它與二至五之一相同。
【具體實施方式】 [0025] 七:本實施方式與二至六之一不同是顯著增強是指磷 光強度提高20%以上。其它與二至六之一相同。
【具體實施方式】 [0026] 八:本實施方式與一不同的是:定量檢測的方法具體 按以下步驟進行:將苯甲酸標準品加入到環(huán)糊精(CD)水溶液中，配制一系列標準試樣，再加 入1-溴代芘（Ι-BrPy)作為磷光分子探針，混合均勻后得到標準試樣溶液，在激發(fā)波長為 345nm的條件下測試標準試樣溶液的室溫磷光光譜，得到在最大發(fā)射波長處的磷光強度，以 苯甲酸濃度為橫作標，以最大發(fā)射波長處的磷光強度為縱作標，作出標準曲線；用與標準品 相同的方法檢測待測試樣的磷光強度，從標準曲線上查出待測試樣中的苯甲酸的濃度。
【具體實施方式】 [0027] 九:本實施方式與八不同是環(huán)糊精(CD)水溶液中，環(huán) 糊精的濃度為Ι.ΟΧΙθΛιοΙ/L~4.0Xl(T 3m〇l/L。其它與八相同。
【具體實施方式】 [0028] 十：本實施方式與八或九不同是1-溴代芘的濃度為 1.0 X 10-8mol/L~1.0 X 10-6mol/L。其它與八或九相同。
【具體實施方式】 [0029] 十一:本實施方式與八至十之一不同是最大發(fā)射波長 為612nm。其它與八至十之一相同。
[0030]用以下實施例驗證本發(fā)明的有益效果：
[0031]實施例1:本實施例的室溫磷光檢測苯甲酸的方法是：以1-溴代芘（Ι-BrPy)作為磷 光分子探針，在環(huán)糊精（CD)水溶液中，采用室溫磷光光譜法進行檢測；其中1-溴代芘（1-BrPy)的濃度為1 · 0 X 10-7mol/L，環(huán)糊精為γ -環(huán)糊精（γ -CD)，γ -CD的濃度為3 · 0 X 10- 3mol/L。進行下列試驗：
[0032]試驗1:本試驗驗證其它常見的食品添加劑及常見的酸對1-溴代芘磷光分子探針 溶液室溫下磷光光譜影響。具體試驗如下:將1-溴代芘加入到濃度為3.0X ΙθΛιοΙ/L的γ -⑶溶液中，其中1-溴代芘的濃度為1.0 X l(r7m〇l/L，再加入各種常見的食品添加劑(糖精和 葡萄糖)及常見的酸(草酸、檸檬酸、蛋氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、白氨酸、苯丙氨酸、半胱氨酸、 天冬氨酸、冰乙酸、磷酸、抗壞血酸、酒石酸），加入的食品添加劑及常見的酸的濃度為1-BrPy濃度的10 4倍，測定各溶液在激發(fā)波長為345nm最大發(fā)射波長612nm處的的磷光光譜圖 如圖1所示；圖2是各種常見的食品添加劑及酸在最大發(fā)射波長612nm處的光譜強度圖。圖1 中縱坐標表示磷光強度，橫坐標表示發(fā)射波長(λ^/nm);圖2中縱坐標表示Ι-BrPy溶液在最 大發(fā)射波長處(612nm)的室溫磷光強度，橫坐標表示常見酸的種類(1為不加酸、2為苯甲酸、 3為草酸、4為檸檬酸、5為蛋氨酸、6為絲氨酸、7為蘇氨酸、8為白氨酸、9為苯丙氨酸、10為半 胱氨酸、11為天冬氨酸、12為冰乙酸、13為磷酸、14為抗壞血酸、15為酒石酸、16為糖精、17為 葡萄糖）。從圖1中可以看出，僅苯甲酸導(dǎo)致溶液室溫磷光發(fā)生顯著增強，而其它常見的食品 添加劑對溶液室溫磷光光譜影響不明顯。這表明，磷光探針1-溴代芘可在常見的食品添加 劑及常見的酸中單一選擇性檢測苯甲酸。從圖2可以看出除苯甲酸之外的常見食品添加劑 及酸對溶液室溫磷光光譜影響不明顯。
[0033] 試驗2:本試驗驗證pH值對1-溴代芘磷光分子探針溶液室溫下磷光光譜影響。具體 試驗如下:將1-溴代芘加入到濃度為3.0X l(T3m〇l/L的γ -CD溶液中，其中1-溴代芘的濃度 為1.0 X 1 (T7mo 1 /L，做為溶液A;向溶液A中加入苯甲酸，其中苯甲酸的濃度為1.0 X 1 (T3mo 1 / L，做為溶液B;將溶液A與溶液B用濃HC1或NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值，測定溶液室溫磷光強度隨pH 值的變化，得到的磷光強度隨pH值的變化關(guān)系曲線如圖3所示，其中：縱坐標表示最大發(fā)射 波長處(612nm)的室溫磷光強度，橫坐標表不pH值，從圖3可以看出，pH對溶液體系的磷光強 度沒有影響。
[0034] 試驗3:本試驗驗證苯甲酸濃度對1-溴代芘磷光分子探針溶液室溫下磷光光譜影 響。具體試驗如下:將1-溴代芘加入到濃度為3.0 X 10_3mol/L的γ -⑶溶液中，其中1-溴代芘 的濃度為1. 〇 X 1 (T7mo 1/L，再加入苯甲酸，其中苯甲酸濃度為0-7.0 X ΙΟΛιο 1/L，測定其室 溫磷光光譜。得到的磷光光譜圖如圖4所示，磷光強度隨苯甲酸濃度的變化關(guān)系曲線如圖5 和圖6所示，從圖4可以看出，隨著苯甲酸的加入，探針分子在612nm處的室溫磷光強度逐漸 增強。從圖5可以看出，在苯甲酸濃度為0~7.0 X10_3mol/L的范圍內(nèi)，隨著苯甲酸的加入磷 光強度逐漸增強，最后趨于穩(wěn)定;從圖6可以看出，當苯甲酸濃度在0~7.0 XHTVol/L范圍 內(nèi)，溶液的室溫磷光強度與苯甲酸濃度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系(R2 = 〇.9917)，其線性回歸方 程為y = 15.09x+2.185;對空白樣進行20次平均測定，按3σ/Κ( 〇為空白標準偏差，K為回歸方 程斜率），計算檢出限為〇.68ymol/L，線性范圍為0~0.70X10_3mol/L。表明本磷光試劑可以 尚靈敏檢測苯甲酸。
[0035]試驗4:本試驗驗證苯甲酸與其它酸共存時，對1-溴代芘磷光分子探針溶液室溫下 磷光光譜影響，具體試驗如下:將1-溴代芘加入到濃度為3.0 X 10_3mol/L的γ -⑶溶液中，其 中1-溴代芘的濃度為1.0Xl(T7m〇l/L，再加入苯甲酸或苯甲酸與其它常見食品添加劑和酸 (草酸、梓檬酸、蛋氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、白氨酸、苯丙氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸、冰乙酸、磷 酸、抗壞血酸、酒石酸、糖精和葡萄糖），其中苯甲酸的濃度為1.0Xl(T 3m〇l/L，其它常見酸的 濃度為1.0 X10_3m〇l/L，測定各溶液的室溫磷光光譜圖，如圖7所示，圖7中縱坐標表示磷光 強度，橫坐標表示室溫磷光發(fā)射波長(A em/nm，激發(fā)波長為345nm)，各食品添加劑和酸在激發(fā) 波長為344nm、最大發(fā)射波長612nm處的光強如圖8所不，圖8的橫坐標中，1為苯甲酸，2為草 酸+苯甲酸，3為檸檬酸+苯甲酸，4為蛋氨酸+苯甲酸，5為絲氨酸+苯甲酸，6為蘇氨酸+苯甲 酸，7為白氨酸+苯甲酸，8為苯丙氨酸+苯甲酸，9為半胱氨酸+苯甲酸，10為天冬氨酸+苯甲 酸，11為冰乙酸+苯甲酸，12為磷酸+苯甲酸，13為抗壞血酸+苯甲酸，14為酒石酸+苯甲酸，15 為糖精+苯甲酸，16為葡萄糖+苯甲酸，從圖7和圖8可以看出，常見的食品添加劑如糖精和葡 萄糖、常見酸如草酸、檸檬酸、蛋氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、白氨酸、苯丙氨酸、半胱氨酸、天冬氨 酸、冰乙酸、磷酸、抗壞血酸、酒石酸均不明顯干擾苯甲酸復(fù)合物的室溫磷光發(fā)射，其室溫磷 光強度與溶液中僅存在苯甲酸時相似。由此表明，Ι-BrPy對苯甲酸的室溫磷光檢測不受其 它常見的食品添加劑和常見酸的影響。
[0036]試驗5:本試驗是磷光分子探針Ι-BrPy檢測實際樣品飲料中的苯甲酸的應(yīng)用，具體 如下：
[0037] 一、將苯甲酸加入到碳酸飲料、軟飲料中，苯甲酸的濃度為分別為0.0100,0.0150， 0.0200mM，做為測試樣品。
[0038] 二、將1-溴代芘加入到濃度為3.0X l(T3m〇l/L的γ -⑶溶液中，其中1-溴代芘的濃 度為1.0 X l(T7mol/L;向溶液中加入苯甲酸標準品，并在345nm激發(fā)下，檢測612nm處室溫磷 光發(fā)射強度，得到磷光發(fā)射強度隨苯甲酸濃度的標準曲線；
[0039]三、在345nm激發(fā)下，檢測612nm處步驟一中測試樣品的室溫磷光發(fā)射強度，然后從 標準曲線上查出測試樣品的濃度值。
[0040]計算測試樣品中的苯甲酸的回收率，測試及計算結(jié)果如表1所示，
[0041 ]表1回收率實驗結(jié)果
[0042]
[0043]樣品：1，2為碳酸飲料;3為軟飲料.。
[0044] 從表1可以看出，實驗結(jié)果，苯甲酸的回收率在95.0~103 %之間，結(jié)果表明，本方 法可應(yīng)用于實際樣品飲料中的苯甲酸檢測。
[0045] 實施例2:本實施例的室溫磷光檢測苯甲酸的方法是：以1-溴代芘（Ι-BrPy)作為磷 光分子探針，在環(huán)糊精(CD)水溶液中，采用室溫磷光光譜法進行檢測;其中1-溴代芘的濃度 為5.0 X 10_6mol/L，環(huán)糊精為γ -環(huán)糊精（γ -CD)，γ -CD的濃度為3.0 X 10_3mol/L。進行下列 試驗：
[0046] 試驗1:本試驗驗證其它常見的食品添加劑及常見的酸對1-溴代芘磷光分子探針 溶液室溫下磷光光譜影響。具體試驗如下:將1-溴代芘加入到濃度為3.0X ΙθΛιοΙ/L的γ -⑶溶液中，其中1-溴代芘的濃度為5.OX l(T6m〇l/L，再加入各種常見的食品添加劑(苯甲酸、 糖精和葡萄糖)及常見的酸(草酸、檸檬酸、蛋氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、白氨酸、苯丙氨酸、半胱 氨酸、天冬氨酸、冰乙酸、磷酸、抗壞血酸、酒石酸），加入的食品添加劑及常見的酸的濃度為 Ι-BrPy濃度的104倍，測定各溶液在激發(fā)波長為345nm最大發(fā)射波長612nm處的的磷光光譜 強度，得到的磷光光譜強度與物質(zhì)種類的關(guān)系的直方圖如圖9所示，從圖中可以看出，僅苯 甲酸導(dǎo)致溶液室溫磷光發(fā)生顯著增強，而其它常見的食品添加劑對溶液室溫磷光光譜影響 不明顯。這表明，磷光探針1-溴代芘可在常見的食品添加劑及常見的酸中單一選擇性檢測 苯甲酸。從圖中可以看出除苯甲酸之外的常見食品添加劑及酸對溶液室溫磷光光譜影響不 明顯。
[0047] 試驗2:本試驗驗證pH值對1-溴代芘磷光分子探針溶液室溫下磷光光譜影響。具體 試驗如下:將1-溴代芘加入到濃度為3.0X l(T3m〇l/L的γ -CD溶液中，其中1-溴代芘的濃度 為5.0 X 1 (T6mo 1 /L，做為溶液A;向溶液A中加入苯甲酸，其中苯甲酸的濃度為1.0 X 1 (T3mo 1 / L，做為溶液B;將溶液A與溶液B用濃HC1或NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值，測定溶液室溫磷光強度隨pH 值的變化情況，結(jié)果是pH對溶液體系的磷光強度沒有影響。
[0048] 試驗3:本試驗驗證苯甲酸濃度對1-溴代芘磷光分子探針溶液室溫下磷光光譜影 響。具體試驗如下:將1-溴代芘加入到濃度為3.0 X 10_3mol/L的γ -⑶溶液中，其中1-溴代芘 的濃度為5.0 X 10_6mol/L，再加入苯甲酸，其中苯甲酸濃度為0-7.0 X 10_3mol/L，測定其室 溫磷光光譜。結(jié)果是:隨著苯甲酸的加入，探針分子在612nm處的室溫磷光強度逐漸增強，在 苯甲酸濃度為〇~7.0 Xl(T3m〇l/L的范圍內(nèi)，隨著苯甲酸的加入磷光強度逐漸增強，最后趨 于穩(wěn)定；當苯甲酸濃度在〇~6.8 X l(r4m〇l/L范圍內(nèi)，溶液的室溫磷光強度與苯甲酸濃度呈 現(xiàn)良好的線性關(guān)系（R 2 = 〇. 9909)，其線性回歸方程為y = 24.89x+8.575;對空白樣進行20次 平均測定，按3σ/Κ(σ為空白標準偏差，K為回歸方程斜率），計算檢出限為1.06μπι 〇 1/L，線性 范圍為0~6.8X10_4mo 1 /L。表明本磷光試劑可以高靈敏檢測苯甲酸。
[0049] 試驗4:本試驗驗證苯甲酸與其它酸共存時，對1-溴代芘磷光分子探針溶液室溫下 磷光光譜影響，具體試驗如下:將1-溴代芘加入到濃度為3.0 X 10_3mol/L的γ -⑶溶液中，其 中1-溴代芘的濃度為5.0 Xl(T6m〇l/L，再加入苯甲酸或苯甲酸與其它常見食品添加劑和酸 (草酸、梓檬酸、蛋氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、白氨酸、苯丙氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸、冰乙酸、磷 酸、抗壞血酸、酒石酸、糖精和葡萄糖），其中苯甲酸的濃度為1.0Xl(T 3m〇l/L，其它常見食品 添加劑和酸的濃度為l.〇Xl〇_3mol/L，測定各溶液的室溫磷光光譜，結(jié)果是:常見的食品添 加劑如糖精和葡萄糖、常見酸如草酸、檸檬酸、蛋氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、白氨酸、苯丙氨酸、 半胱氨酸、天冬氨酸、冰乙酸、磷酸、抗壞血酸、酒石酸均不明顯干擾苯甲酸復(fù)合物的室溫磷 光發(fā)射，其室溫磷光強度與溶液中僅存在苯甲酸時相似。由此表明，1 -BrPy對苯甲酸的室溫 磷光檢測不受其它常見的食品添加劑和常見酸的影響。
[0050] 試驗5:本試驗是磷光分子探針ι-BrPy檢測實際樣品飲料中的苯甲酸的應(yīng)用，具體 如下：
[0051 ] 一、將苯甲酸加入到碳酸飲料、軟飲料中，苯甲酸的濃度為分別為0.0100，0.0150， 0.0200mM，做為測試樣品。
[0052]二、將1-溴代芘加入到濃度為3.0X l(T3m〇l/L的γ -⑶溶液中，其中1-溴代芘的濃 度為5.0 X l(T6mol/L;向溶液中加入苯甲酸標準品，并在345nm激發(fā)下，檢測612nm處室溫磷 光發(fā)射強度，得到磷光發(fā)射強度隨苯甲酸濃度的標準曲線；
[0053]三、在345nm激發(fā)下，檢測612nm處步驟一中測試樣品的室溫磷光發(fā)射強度，然后從 標準曲線上查出測試樣品的濃度值。
[0054]實驗結(jié)果，苯甲酸的回收率在96.8~102.5%之間，說明本方法可應(yīng)用于實際樣品 飲料中的苯甲酸檢測。
[0055]實施例3:本實施例的室溫磷光檢測苯甲酸的方法是：以1-溴代芘（Ι-BrPy)作為磷 光分子探針，在環(huán)糊精(CD)水溶液中，采用室溫磷光光譜法進行檢測;其中1-溴代芘的濃度 為5.0 X 10_7mol/L，環(huán)糊精為γ -環(huán)糊精（γ -CD)，γ -CD的濃度為3.0 X 10_3mol/L。進行下列 試驗：
[0056]試驗1:本試驗驗證其它常見的食品添加劑及常見的酸對1-溴代芘磷光分子探針 溶液室溫下磷光光譜影響。具體試驗如下:將1-溴代芘加入到濃度為3.0X ΙθΛιοΙ/L的γ -⑶溶液中，其中1-溴代芘的濃度為5.OX l(T7m〇l/L，再加入各種常見的食品添加劑(苯甲酸、 糖精和葡萄糖)及常見的酸(草酸、檸檬酸、蛋氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、白氨酸、苯丙氨酸、半胱 氨酸、天冬氨酸、冰乙酸、磷酸、抗壞血酸、酒石酸），加入的食品添加劑及常見的酸的濃度為 1-BrPy濃度的104倍，測定各溶液在激發(fā)波長為345nm最大發(fā)射波長612nm處的的磷光光譜 強度，得到磷光光譜強度與與物質(zhì)種類的關(guān)系直方圖如圖10所示;從圖中可以看出，僅苯甲 酸導(dǎo)致溶液室溫磷光發(fā)生顯著增強，而其它常見的食品添加劑對溶液室溫磷光光譜影響不 明顯。這表明，磷光探針1-溴代芘可在常見的食品添加劑及常見的酸中單一選擇性檢測苯 甲酸。從圖中可以看出除苯甲酸之外的常見食品添加劑及酸對溶液室溫磷光光譜影響不明 顯。
[0057] 試驗2:本試驗驗證pH值對1-溴代芘磷光分子探針溶液室溫下磷光光譜影響。具體 試驗如下:將1-溴代芘加入到濃度為3.0X l(T3m〇l/L的γ -CD溶液中，其中1-溴代芘的濃度 為5.0 X 1 (T7mo 1 /L，做為溶液A;向溶液A中加入苯甲酸，其中苯甲酸的濃度為1.0 X 1 (T3mo 1 / L，做為溶液B;將溶液A與溶液B用濃HC1或NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值，測定溶液室溫磷光強度隨pH 值的變化，結(jié)果為pH對溶液體系的磷光強度沒有影響。
[0058] 試驗3:本試驗驗證苯甲酸濃度對1-溴代芘磷光分子探針溶液室溫下磷光光譜影 響。具體試驗如下:將1-溴代芘加入到濃度為3.0 X 10_3mol/L的γ -⑶溶液中，其中1-溴代芘 的濃度為5.0 X ΙθΛιοΙ/L，再加入苯甲酸，其中苯甲酸濃度為0-7.0 X 10_3mol/L，測定其室 溫磷光光譜。結(jié)果為，隨著苯甲酸的加入，探針分子在612nm處的室溫磷光強度逐漸增強。同 時，在苯甲酸濃度為0~7.0 X l(T3m〇l/L的范圍內(nèi)，隨著苯甲酸的加入磷光強度逐漸增強，最 后趨于穩(wěn)定；當苯甲酸濃度在〇~5.6 X l(T4m〇l/L范圍內(nèi)，溶液的室溫磷光強度與苯甲酸濃 度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系(R 2 = 〇. 9901)，其線性回歸方程為y = 33.29x+5.285;對空白樣進行 20次平均測定，按3σ/Κ(σ為空白標準偏差，K為回歸方程斜率），計算檢出限為1.08ymol/L， 線性范圍為0~5.6X1 (T4mo 1 /L。表明本磷光試劑可以高靈敏檢測苯甲酸。
[0059]試驗4:本試驗驗證苯甲酸與其它酸共存時，對1-溴代芘磷光分子探針溶液室溫下 磷光光譜影響，具體試驗如下:將1-溴代芘加入到濃度為3.0 X 10_3mol/L的γ -⑶溶液中，其 中1-溴代芘的濃度為5.0 Xl(r7m〇l/L，再加入苯甲酸或苯甲酸與其它常見食品添加劑和酸 (草酸、梓檬酸、蛋氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、白氨酸、苯丙氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸、冰乙酸、磷 酸、抗壞血酸、酒石酸、糖精和葡萄糖），其中苯甲酸的濃度為1.0Xl(T 3m〇l/L，其它常見食品 添加劑和酸的濃度為l.〇Xl〇_3mol/L，測定各溶液的室溫磷光光譜，結(jié)果為，常見的食品添 加劑如糖精和葡萄糖、常見酸如草酸、檸檬酸、蛋氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、白氨酸、苯丙氨酸、 半胱氨酸、天冬氨酸、冰乙酸、磷酸、抗壞血酸、酒石酸均不明顯干擾苯甲酸復(fù)合物的室溫磷 光發(fā)射，其室溫磷光強度與溶液中僅存在苯甲酸時相似。由此表明，1 -BrPy對苯甲酸的室溫 磷光檢測不受其它常見的食品添加劑和常見酸的影響。
[0060]試驗5:本試驗是磷光分子探針ι-BrPy檢測實際樣品飲料中的苯甲酸的應(yīng)用，具體 如下：
[0061 ] -、將苯甲酸加入到碳酸飲料、軟飲料中，苯甲酸的濃度為分別為0.0100，0.0150， 0.0200mM，做為測試樣品。
[0062]二、將1-溴代芘加入到濃度為3.0X l(T3m〇l/L的γ -⑶溶液中，其中1-溴代芘的濃 度為5.0 X l(T7mol/L;向溶液中加入苯甲酸標準品，并在345nm激發(fā)下，檢測612nm處室溫磷 光發(fā)射強度，得到磷光發(fā)射強度隨苯甲酸濃度的標準曲線；
[0063]三、在345nm激發(fā)下，檢測612nm處步驟一中測試樣品的室溫磷光發(fā)射強度，然后從 標準曲線上查出測試樣品的濃度值。
[0064] 實驗結(jié)果，苯甲酸的回收率在94.2~101 %之間，結(jié)果表明，本方法可應(yīng)用于實際 樣品飲料中的苯甲酸檢測。
[0065]實施例4:本實施例的室溫磷光檢測苯甲酸的方法是：以1-溴代芘（Ι-BrPy)作為磷 光分子探針，在環(huán)糊精(CD)水溶液中，采用室溫磷光光譜法進行檢測;其中1-溴代芘的濃度 為1.0 X 10_7mol/L，環(huán)糊精為γ -環(huán)糊精（γ -CD)，γ -CD的濃度為1.0 X 10_3mol/L。進行下列 試驗：
[0066]試驗1:本試驗驗證其它常見的食品添加劑及常見的酸對1-溴代芘磷光分子探針 溶液室溫下磷光光譜影響。具體試驗如下:將1-溴代芘加入到濃度為1.0 X l〇_3mol/L的γ -⑶溶液中，其中1-溴代芘的濃度為l.〇Xl〇_7mol/L，再加入各種常見的食品添加劑(苯甲酸、 糖精和葡萄糖)及常見的酸(草酸、檸檬酸、蛋氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、白氨酸、苯丙氨酸、半胱 氨酸、天冬氨酸、冰乙酸、磷酸、抗壞血酸、酒石酸），加入的食品添加劑及常見的酸的濃度為 Ι-BrPy濃度的104倍，測定各溶液在激發(fā)波長為345nm最大發(fā)射波長612nm處的的磷光光譜， 結(jié)果為，僅苯甲酸導(dǎo)致溶液室溫磷光發(fā)生顯著增強，而其它常見的食品添加劑對溶液室溫 磷光光譜影響不明顯。這表明，磷光探針1-溴代芘可在常見的食品添加劑及常見的酸中單 一選擇性檢測苯甲酸。同時可知除苯甲酸之外的常見食品添加劑及酸對溶液室溫磷光光譜 影響不明顯。
[0067] 試驗2:本試驗驗證pH值對1-溴代芘磷光分子探針溶液室溫下磷光光譜影響。具體 試驗如下:將1-溴代芘加入到濃度為1.0 X l(T3m〇l/L的γ -CD溶液中，其中1-溴代芘的濃度 為1.0 X 1 (T7mo 1 /L，做為溶液A;向溶液A中加入苯甲酸，其中苯甲酸的濃度為1.0 X 1 (T3mo 1 / L，做為溶液B;將溶液A與溶液B用濃HC1或NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值，測定溶液室溫磷光強度隨pH 值的變化情況，結(jié)果為，pH對溶液體系的磷光強度沒有影響。
[0068] 試驗3:本試驗驗證苯甲酸濃度對1-溴代芘磷光分子探針溶液室溫下磷光光譜影 響。具體試驗如下:將1-溴代芘加入到濃度為1.〇 X l(T3mol/L的γ -⑶溶液中，其中1-溴代芘 的濃度為1. 〇 X 1 (T7mo 1/L，再加入苯甲酸，其中苯甲酸濃度為0-7.0 X ΙΟΛιο 1/L，測定其室 溫磷光光譜。結(jié)果為，隨著苯甲酸的加入，探針分子在612nm處的室溫磷光強度逐漸增強。同 時，在苯甲酸濃度為0~7.0 X l(T3m〇l/L的范圍內(nèi)，隨著苯甲酸的加入磷光強度逐漸增強，最 后趨于穩(wěn)定；當苯甲酸濃度在〇~6.2 X l(T4m〇l/L范圍內(nèi)，溶液的室溫磷光強度與苯甲酸濃 度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系(R 2 = 0.9905)，其線性回歸方程為y = 35.09x+5.185;對空白樣進行 20次平均測定，按3〇/Κ(σ為空白標準偏差，K為回歸方程斜率），計算檢出限為0.99ymol/L， 線性范圍為0~6.2X1 (T4mo 1 /L。表明本磷光試劑可以高靈敏檢測苯甲酸。
[0069]試驗4:本試驗驗證苯甲酸與其它酸共存時，對1-溴代芘磷光分子探針溶液室溫下 磷光光譜影響，具體試驗如下:將1-溴代芘加入到濃度為1. 〇 X l(T3mol/L的γ -⑶溶液中，其 中1-溴代芘的濃度為1.0Xl(T7m〇l/L，再加入苯甲酸或苯甲酸與其它常見食品添加劑和酸 (草酸、梓檬酸、蛋氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、白氨酸、苯丙氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸、冰乙酸、磷 酸、抗壞血酸、酒石酸、糖精和葡萄糖），其中苯甲酸的濃度為1.0Xl(T 3m〇l/L，其它常見食品 添加劑和酸的濃度為l.〇Xl〇_3mol/L，測定各溶液的室溫磷光光譜，結(jié)果為，常見的食品添 加劑如糖精和葡萄糖、常見酸如草酸、檸檬酸、蛋氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、白氨酸、苯丙氨酸、 半胱氨酸、天冬氨酸、冰乙酸、磷酸、抗壞血酸、酒石酸均不明顯干擾苯甲酸復(fù)合物的室溫磷 光發(fā)射，其室溫磷光強度與溶液中僅存在苯甲酸時相似。由此表明，1 -BrPy對苯甲酸的室溫 磷光檢測不受其它常見的食品添加劑和常見酸的影響。
[0070] 試驗5:本試驗是磷光分子探針Ι-BrPy檢測實際樣品飲料中的苯甲酸的應(yīng)用，具體 如下：
[0071] -、將苯甲酸加入到碳酸飲料、軟飲料中，苯甲酸的濃度為分別為0.0100,0.0150， 0.0200mM，做為測試樣品。
[0072] 二、將1-溴代芘加入到濃度為1 .OX l(T3m〇l/L的γ -⑶溶液中，其中1-溴代芘的濃 度為1.0 X l(T7mol/L;向溶液中加入苯甲酸標準品，并在345nm激發(fā)下，檢測612nm處室溫磷 光發(fā)射強度，得到磷光發(fā)射強度隨苯甲酸濃度的標準曲線；
[0073]三、在345nm激發(fā)下，檢測612nm處步驟一中測試樣品的室溫磷光發(fā)射強度，然后從 標準曲線上查出測試樣品的濃度值。
[0074] 實驗結(jié)果為苯甲酸的回收率在96.0~102%之間，結(jié)果表明本方法可應(yīng)用于實際 樣品飲料中的苯甲酸檢測。
[0075]實施例5:本實施例的室溫磷光檢測苯甲酸的方法是：以1-溴代芘（Ι-BrPy)作為磷 光分子探針，在環(huán)糊精(CD)水溶液中，采用室溫磷光光譜法進行檢測;其中1-溴代芘的濃度 為1 · 0 X 10 7mol/L，環(huán)糊精為α_環(huán)糊精(a_CD)α_⑶的濃度為1 · 0 X 10 3mo 1/L。進彳丁下列試 驗：
[0076]試驗1:本試驗驗證其它常見的食品添加劑及常見的酸對1-溴代芘磷光分子探針 溶液室溫下磷光光譜影響。具體試驗如下:將1-溴代芘加入到濃度為1.〇 X ΙθΛιοΙ/L的α-⑶ 溶液中，其中1-溴代芘的濃度為1.0X10_7mol/L，再加入各種常見的食品添加劑(苯甲酸、糖 精和葡萄糖)及常見的酸(草酸、檸檬酸、蛋氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、白氨酸、苯丙氨酸、半胱氨 酸、天冬氨酸、冰乙酸、磷酸、抗壞血酸、酒石酸），加入的食品添加劑及常見的酸的濃度為1-BrPy濃度的10 4倍，測定各溶液在激發(fā)波長為345nm、最大發(fā)射波長612nm處的的磷光光譜， 結(jié)果為，僅苯甲酸導(dǎo)致溶液室溫磷光發(fā)生顯著增強，而其它常見的食品添加劑對溶液室溫 磷光光譜影響不明顯。這表明，磷光探針1-溴代芘可在常見的食品添加劑及常見的酸中單 一選擇性檢測苯甲酸，而且除苯甲酸之外的常見食品添加劑及酸對溶液室溫磷光光譜影響 不明顯。
[0077] 試驗2:本試驗驗證pH值對1-溴代芘磷光分子探針溶液室溫下磷光光譜影響。具體 試驗如下:將1-溴代芘加入到濃度為1 .〇 X l(T3m〇l/L的α-⑶溶液中，其中1-溴代芘的濃度為 1.0 X l(T7m〇 1/L，做為溶液A;向溶液Α中加入苯甲酸，其中苯甲酸的濃度為1.0 X l(T3m〇 1/L， 做為溶液B;將溶液A與溶液B用濃HC1或NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值，測定溶液室溫磷光強度隨pH值 的變化情況，結(jié)果為，pH對溶液體系的磷光強度沒有影響。
[0078] 試驗3:本試驗驗證苯甲酸濃度對1-溴代芘磷光分子探針溶液室溫下磷光光譜影 響。具體試驗如下:將1-溴代芘加入到濃度為1.0Xl(T3mol/L的α-⑶溶液中，其中1-溴代芘 的濃度為1. 〇 X 1 (T7mo 1/L，再加入苯甲酸，其中苯甲酸濃度為0-7.0 X ΙΟΛιο 1/L，測定其室 溫磷光光譜。結(jié)果表明，隨著苯甲酸的加入，探針分子在612nm處的室溫磷光強度逐漸增強。 同時，在苯甲酸濃度為0~7.0Xl(T 3m〇l/L的范圍內(nèi)，隨著苯甲酸的加入磷光強度逐漸增強， 最后趨于穩(wěn)定；當苯甲酸濃度在〇~6.0 X l(T4m〇l/L范圍內(nèi)，溶液的室溫磷光強度與苯甲酸 濃度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系(R 2 = 〇. 9905)，其線性回歸方程為y= 15.58x+7.285;對空白樣進 行20次平均測定，按3σ/Κ(σ為空白標準偏差，K為回歸方程斜率），計算檢出限為0.98μπι 〇1/ L，線性范圍為0~6.0X10_4mo 1 /L。表明本磷光試劑可以高靈敏檢測苯甲酸。
[0079]試驗4:本試驗驗證苯甲酸與其它酸共存時，對1-溴代芘磷光分子探針溶液室溫下 磷光光譜影響，具體試驗如下:將1-溴代芘加入到濃度為1. ο X ΙθΛιοΙ/L的α-CD溶液中，其 中1-溴代芘的濃度為1.0Xl(T7m〇l/L，再加入苯甲酸或苯甲酸與其它常見食品添加劑和酸 (草酸、梓檬酸、蛋氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、白氨酸、苯丙氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸、冰乙酸、磷 酸、抗壞血酸、酒石酸、糖精和葡萄糖），其中苯甲酸的濃度為1.0Xl(T 3m〇l/L，其它常見食品 添加劑和酸的濃度為1. 〇 X 1 (T3mo 1 /L，測定各溶液的室溫磷光光譜圖。從圖中可以看出，常 見的食品添加劑如糖精和葡萄糖、常見酸如草酸、檸檬酸、蛋氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、白氨酸、 苯丙氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸、冰乙酸、磷酸、抗壞血酸、酒石酸均不明顯干擾苯甲酸復(fù)合 物的室溫磷光發(fā)射，其室溫磷光強度與溶液中僅存在苯甲酸時相似。由經(jīng)表明，Ι-BrPy對苯 甲酸的室溫磷光檢測不受其它常見的食品添加劑和常見酸的影響。
[0080]試驗5:本試驗是磷光分子探針Ι-BrPy檢測實際樣品飲料中的苯甲酸的應(yīng)用，具體 如下：
[0081 ] -、將苯甲酸加入到碳酸飲料、軟飲料中，苯甲酸的濃度為分別為0.0100，0.0150， 0.0200mM，做為測試樣品。
[0082]二、將1-溴代芘加入到濃度為1.0X10_3mol/L的a-⑶溶液中，其中1-溴代芘的濃度 為1.0 X l(T7mol/L;向溶液中加入苯甲酸標準品，并在345nm激發(fā)下，檢測612nm處室溫磷光 發(fā)射強度，得到磷光發(fā)射強度隨苯甲酸濃度的標準曲線；
[0083]三、在345nm激發(fā)下，檢測612nm處步驟一中測試樣品的室溫磷光發(fā)射強度，然后從 標準曲線上查出測試樣品的濃度值。
[0084] 實驗結(jié)果，苯甲酸的回收率在95.2~102%之間，結(jié)果表明，本方法可應(yīng)用于實際 樣品飲料中的苯甲酸檢測。
[0085]實施例6:本實施例的室溫磷光檢測苯甲酸的方法是：以1-溴代芘（Ι-BrPy)作為磷 光分子探針，在環(huán)糊精(CD)水溶液中，采用室溫磷光光譜法進行檢測;其中1-溴代芘的濃度 為5.0 X 10_6mo 1 /L，環(huán)糊精為β-環(huán)糊精(β-CD)，β-CD的濃度為3.0 X 10_3mo 1 /L。進行下列試 驗：
[0086]試驗1:本試驗驗證其它常見的食品添加劑及常見的酸對1-溴代芘磷光分子探針 溶液室溫下磷光光譜影響。具體試驗如下:將1-溴代芘加入到濃度為3.0 X 10_3mol/L的β-⑶ 溶液中，其中1-溴代芘的濃度為5.0Xl(T6m 〇l/L，再加入各種常見的食品添加劑(苯甲酸、糖 精和葡萄糖)及常見的酸(草酸、檸檬酸、蛋氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、白氨酸、苯丙氨酸、半胱氨 酸、天冬氨酸、冰乙酸、磷酸、抗壞血酸、酒石酸），加入的食品添加劑及常見的酸的濃度為1-BrPy濃度的10 4倍，測定各溶液在激發(fā)波長為345nm最大發(fā)射波長612nm處的的磷光光譜，結(jié) 果為，僅苯甲酸導(dǎo)致溶液室溫磷光發(fā)生顯著增強，而其它常見的食品添加劑對溶液室溫磷 光光譜影響不明顯。這表明，磷光探針1-溴代芘可在常見的食品添加劑及常見的酸中單一 選擇性檢測苯甲酸，而且除苯甲酸之外的常見食品添加劑及酸對溶液室溫磷光光譜影響不 明顯。
[0087] 試驗2:本試驗驗證pH值對1-溴代芘磷光分子探針溶液室溫下磷光光譜影響。具體 試驗如下:將1-溴代芘加入到濃度為3.0 X l(T3m〇l/L的β-⑶溶液中，其中1-溴代芘的濃度為 5.0 X l(T6m〇 1/L，做為溶液A;向溶液Α中加入苯甲酸，其中苯甲酸的濃度為1.0 X l(T3m〇 1/L， 做為溶液B;將溶液A與溶液B用濃HC1或NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值，測定溶液室溫磷光強度隨pH值 的變化情況，結(jié)果表明pH對溶液體系的磷光強度沒有影響。
[0088] 試驗3:本試驗驗證苯甲酸濃度對1-溴代芘磷光分子探針溶液室溫下磷光光譜影 響。具體試驗如下:將1-溴代芘加入到濃度為3.0 X 10_3mol/L的β-⑶溶液中，其中1-溴代芘 的濃度為5.0 X 10_6mol/L，再加入苯甲酸，其中苯甲酸濃度為0-7.0 X 10_3mol/L，測定其室 溫磷光光譜。結(jié)明表明，隨著苯甲酸的加入，探針分子在612nm處的室溫磷光強度逐漸增強。 同時，在苯甲酸濃度為0~7.0Xl(T 3m〇l/L的范圍內(nèi)，隨著苯甲酸的加入磷光強度逐漸增強， 最后趨于穩(wěn)定；當苯甲酸濃度在〇~6.4 X l(T4m〇l/L范圍內(nèi)，溶液的室溫磷光強度與苯甲酸 濃度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系(R 2 = 0.9932)，其線性回歸方程為y = 24.59x+6.375;對空白樣進 行20次平均測定，按3σ/Κ(σ為空白標準偏差，K為回歸方程斜率），計算檢出限為2.96μπι 〇1/ L，線性范圍為0~6.4X10_4mo 1 /L。表明本磷光試劑可以高靈敏檢測苯甲酸。
[0089]試驗4:本試驗驗證苯甲酸與其它酸共存時，對1-溴代芘磷光分子探針溶液室溫下 磷光光譜影響，具體試驗如下:將1-溴代芘加入到濃度為3.0 X 10_3mol/L的β-CD溶液中，其 中1-溴代芘的濃度為5.0 Xl(T6m〇l/L，再加入苯甲酸或苯甲酸與其它常見食品添加劑和酸 (草酸、梓檬酸、蛋氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、白氨酸、苯丙氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸、冰乙酸、磷 酸、抗壞血酸、酒石酸、糖精和葡萄糖），其中苯甲酸的濃度為1.0Xl(T 3m〇l/L，其它常見食品 添加劑和酸的濃度為l.〇Xl〇_3mol/L，測定各溶液的室溫磷光光譜，結(jié)果為，常見的食品添 加劑如糖精和葡萄糖、常見酸如草酸、檸檬酸、蛋氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、白氨酸、苯丙氨酸、 半胱氨酸、天冬氨酸、冰乙酸、磷酸、抗壞血酸、酒石酸均不明顯干擾苯甲酸復(fù)合物的室溫磷 光發(fā)射，其室溫磷光強度與溶液中僅存在苯甲酸時相似。由此表明，1 -BrPy對苯甲酸的室溫 磷光檢測不受其它常見的食品添加劑和常見酸的影響。
[0090]試驗5:本試驗是磷光分子探針ι-BrPy檢測實際樣品飲料中的苯甲酸的應(yīng)用，具體 如下：
[0091 ] -、將苯甲酸加入到碳酸飲料、軟飲料中，苯甲酸的濃度為分別為0.0100，0.0150， 0.0200mM，做為測試樣品。
[0092]二、將1-溴代芘加入到濃度為3.0Xl(T3m〇l/L的β-⑶溶液中，其中1-溴代芘的濃度 為5.0 X l(T6mol/L;向溶液中加入苯甲酸標準品，并在345nm激發(fā)下，檢測612nm處室溫磷光 發(fā)射強度，得到磷光發(fā)射強度隨苯甲酸濃度的標準曲線；
[0093]三、在345nm激發(fā)下，檢測612nm處步驟一中測試樣品的室溫磷光發(fā)射強度，然后從 標準曲線上查出測試樣品的濃度值。
[0094] 實驗結(jié)果，苯甲酸的回收率在95.8~101.5%之間，結(jié)果表明，本方法可應(yīng)用于實 際樣品飲料中的苯甲酸檢測。
[0095]實施例7:本實施例的室溫磷光檢測苯甲酸的方法是：以1-溴代芘（Ι-BrPy)作為磷 光分子探針，在環(huán)糊精(CD)水溶液中，采用室溫磷光光譜法進行檢測;其中1-溴代芘的濃度 為5.0 X 10_7mo 1 /L，環(huán)糊精為β-環(huán)糊精(β-CD)，β-CD的濃度為3.0 X 10_3mo 1 /L。進行下列試 驗：
[0096]試驗1:本試驗驗證其它常見的食品添加劑及常見的酸對1-溴代芘磷光分子探針 溶液室溫下磷光光譜影響。具體試驗如下:將1-溴代芘加入到濃度為3.0 X 10_3mol/L的β-⑶ 溶液中，其中1-溴代芘的濃度為5.0Xl(T7m 〇l/L，再加入各種常見的食品添加劑(苯甲酸、糖 精和葡萄糖)及常見的酸(草酸、檸檬酸、蛋氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、白氨酸、苯丙氨酸、半胱氨 酸、天冬氨酸、冰乙酸、磷酸、抗壞血酸、酒石酸），加入的食品添加劑及常見的酸的濃度為1-BrPy濃度的104倍，測定各溶液在激發(fā)波長為345nm最大發(fā)射波長612nm處的的磷光光譜，結(jié) 果表明，僅苯甲酸導(dǎo)致溶液室溫磷光發(fā)生顯著增強，而其它常見的食品添加劑對溶液室溫 磷光光譜影響不明顯。這表明，磷光探針1-溴代芘可在常見的食品添加劑及常見的酸中單 一選擇性檢測苯甲酸，而且除苯甲酸之外的常見食品添加劑及酸對溶液室溫磷光光譜影響 不明顯。
[0097] 試驗2:本試驗驗證pH值對1-溴代芘磷光分子探針溶液室溫下磷光光譜影響。具體 試驗如下:將1-溴代芘加入到濃度為3.0 X l(T3m〇l/L的β-⑶溶液中，其中1-溴代芘的濃度為 5.0 X l(T7m〇 1/L，做為溶液A;向溶液Α中加入苯甲酸，其中苯甲酸的濃度為1.0 X l(T3m〇 1/L， 做為溶液B;將溶液A與溶液B用濃HC1或NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值，測定溶液室溫磷光強度隨pH值 的變化情況，結(jié)果表明，pH對溶液體系的磷光強度沒有影響。
[0098] 試驗3:本試驗驗證苯甲酸濃度對1-溴代芘磷光分子探針溶液室溫下磷光光譜影 響。具體試驗如下:將1-溴代芘加入到濃度為3.0 X 10_3mol/L的β-⑶溶液中，其中1-溴代芘 的濃度為5.0 X ΙθΛιοΙ/L，再加入苯甲酸，其中苯甲酸濃度為0-7.0 X 10_3mol/L，測定其室 溫磷光光譜。結(jié)果表明，隨著苯甲酸的加入，探針分子在612nm處的室溫磷光強度逐漸增強。 同時，在苯甲酸濃度為0~7.0Xl(T 3m〇l/L的范圍內(nèi)，隨著苯甲酸的加入磷光強度逐漸增強， 最后趨于穩(wěn)定；當苯甲酸濃度在〇~5.0 X l(T4m〇l/L范圍內(nèi)，溶液的室溫磷光強度與苯甲酸 濃度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系(R 2 = 0.9927)，其線性回歸方程為y = 34.69x+4.285;對空白樣進 行20次平均測定，按3σ/Κ(σ為空白標準偏差，K為回歸方程斜率），計算檢出限為1.98μπι 〇1/ L，線性范圍為0~5.0X10_4mo 1 /L。表明本磷光試劑可以高靈敏檢測苯甲酸。
[0099]試驗4:本試驗驗證苯甲酸與其它酸共存時，對1-溴代芘磷光分子探針溶液室溫下 磷光光譜影響，具體試驗如下:將1-溴代芘加入到濃度為3.0 X 10_3mol/L的β-CD溶液中，其 中1-溴代芘的濃度為5.0 Xl(r7m〇l/L，再加入苯甲酸或苯甲酸與其它常見食品添加劑和酸 (草酸、梓檬酸、蛋氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、白氨酸、苯丙氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸、冰乙酸、磷 酸、抗壞血酸、酒石酸、糖精和葡萄糖），其中苯甲酸的濃度為1.0Xl(T 3m〇l/L，其它常見食品 添加劑和酸的濃度為l.〇Xl〇_3mol/L，測定各溶液的室溫磷光光譜，結(jié)果表明，常見的食品 添加劑如糖精和葡萄糖、常見酸如草酸、檸檬酸、蛋氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、白氨酸、苯丙氨 酸、半胱氨酸、天冬氨酸、冰乙酸、磷酸、抗壞血酸、酒石酸均不明顯干擾苯甲酸復(fù)合物的室 溫磷光發(fā)射，其室溫磷光強度與溶液中僅存在苯甲酸時相似。由此表明，Ι-BrPy對苯甲酸的 室溫磷光檢測不受其它常見的食品添加劑和常見酸的影響。
[0100] 試驗5:本試驗是磷光分子探針Ι-BrPy檢測實際樣品飲料中的苯甲酸的應(yīng)用，具體 如下：
[0101] -、將苯甲酸加入到碳酸飲料、軟飲料中，苯甲酸的濃度為分別為0.0100，0.0150， 0.0200mM，做為測試樣品。
[0102] 二、將1-溴代芘加入到濃度為3.0Xl(T3m〇l/L的β-⑶溶液中，其中1-溴代芘的濃度 為5.0 X l(T7mol/L;向溶液中加入苯甲酸標準品，并在345nm激發(fā)下，檢測612nm處室溫磷光 發(fā)射強度，得到磷光發(fā)射強度隨苯甲酸濃度的標準曲線；
[0103] 三、在345nm激發(fā)下，檢測612nm處步驟一中測試樣品的室溫磷光發(fā)射強度，然后從 標準曲線上查出測試樣品的濃度值。
[0104] 實驗結(jié)果，苯甲酸的回收率在94.6~102%之間，結(jié)果表明，本方法可應(yīng)用于實際 樣品飲料中的苯甲酸檢測。
【主權(quán)項】
1. 一種室溫磷光檢測苯甲酸的方法，其特征在于該方法是以1-溴代芘作為磷光分子探 針，在環(huán)糊精水溶液中，采用室溫磷光光譜法進行定性或定量檢測。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種室溫磷光檢測苯甲酸的方法，其特征在于定性檢測的方 法具體按以下步驟進行:將待測試樣加入到環(huán)糊精水溶液中，再加入1-溴代芘作為磷光分 子探針，混合均勻后得到待檢溶液，在激發(fā)波長為345nm的條件下檢測待檢溶液的室溫磷光 光譜，如果在最大發(fā)射波長處的磷光強度比空白試樣顯著增強，則可判定該待測試樣中含 有苯甲酸。3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種室溫磷光檢測苯甲酸的方法，其特征在于環(huán)糊精水溶 液中，環(huán)糊精為α、β、γ-環(huán)糊精。4. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種室溫磷光檢測苯甲酸的方法，其特征在于環(huán)糊精水溶 液中，環(huán)糊精的濃度為1.0 X 10-3~4.0 X 10-3mo 1 /L。5. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種室溫磷光檢測苯甲酸的方法，其特征在于1-溴代芘的 濃度為1 · 〇 X 10-8mol/L~1 · 0 X 10-6mol/L。6. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種室溫磷光檢測苯甲酸的方法，其特征在于最大發(fā)射波 長為612nm。7. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種室溫磷光檢測苯甲酸的方法，其特征在于顯著增強是 指憐光強度提尚了20%以上。8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種室溫磷光檢測苯甲酸的方法，其特征在于定量檢測的方 法具體按以下步驟進行:將苯甲酸標準品加入到環(huán)糊精水溶液中，配制一系列標準試樣，再 加入1-溴代芘作為磷光分子探針，混合均勻后得到標準試樣溶液，在激發(fā)波長為345nm的條 件下測試標準試樣溶液的室溫磷光光譜，得到在最大發(fā)射波長處的磷光強度，以苯甲酸濃 度為橫作標，以最大發(fā)射波長處的磷光強度為縱作標，作出標準曲線；用與標準品相同的方 法檢測待測試樣的磷光強度，從標準曲線上查出待測試樣中的苯甲酸的濃度。9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種室溫磷光檢測苯甲酸的方法，其特征在于環(huán)糊精水溶液 中，環(huán)糊精的濃度為1.0 X 10-3~4.0 X 10-3mo 1 /L。10. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種室溫磷光檢測苯甲酸的方法，其特征在于1-溴代芘的濃 度為1 · 0 X 10-8mol/L~1 · 0 X 10-6mol/L。
【文檔編號】G01N21/64GK105973863SQ201610613639
【公開日】2016年9月28日
【申請日】2016年7月29日
【發(fā)明人】郭祥峰, 王金平, 賈麗華
【申請人】齊齊哈爾大學(xué)