從海洋低值貝類中分離純化得到的核苷類成分及其制備方法與應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種從海洋低值貝類(四角蛤蜊、菲律賓蛤仔、文蛤、毛蚶、青蛤、竹蟶、西施舌等)中分離純化核苷類化學(xué)成分的方法，該方法包括(1)貝類軟體水提醇沉上清液的制備；(2)大孔吸附樹脂柱粗分離；(3)陽離子交換樹脂的分離純化。本發(fā)明提供的從海洋低值貝類中分離純化核苷類成分的方法，工藝設(shè)計(jì)合理，可操作性強(qiáng)，生產(chǎn)周期短，成本低，環(huán)保性強(qiáng)，制備得到的核苷類成分純度高，具有很好的保肝護(hù)肝功效，本發(fā)明可充分利用四角蛤蜊、菲律賓蛤仔、文蛤等低值貝類資源，具有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。
【專利說明】
從海洋低值貝類中分離純化得到的核苷類成分及其制備方法與應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及一種海洋低值貝類，具體涉及一種從海洋低值貝類(四角蛤蜊、菲律賓蛤仔、文蛤、毛蚶、青蛤、竹蟶、西施舌等)中分離純化得到的核苷類化學(xué)成分及其制備方法。【背景技術(shù)】
[0002]江蘇沿海面積廣闊，在潮間帶具有豐富的海洋生物資源，尤其以低值貝類資源如四角蛤蜊、菲律賓蛤仔、文蛤等產(chǎn)量巨大。海洋貝類蛤蜊藥用歷史悠久，在古代文獻(xiàn)中多有其功效的記載，現(xiàn)代研究表明具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、降血糖、抗氧化等功效。核苷類成分不僅是構(gòu)成RNA、DNA的基本組成，也是生物氧化和能量代謝中的能源物質(zhì)和抗病毒、抗腫瘤藥物的中間體，特別是維持生物體的抗氧化，保持正常免疫功能，抗感染等方面具有重要的生理活性。目前關(guān)于低值貝類資源如四角蛤蜊、菲律賓蛤仔、文蛤等中的核苷類化學(xué)成分研究報(bào)道較少?，F(xiàn)有技術(shù)中主要存在的問題是:分離過程步驟較為繁瑣，生產(chǎn)周期較長，生產(chǎn)成本較高，并且分離所用氯仿等萃取劑或洗脫劑，環(huán)保性差，且分離得到核苷類物質(zhì)的種類少，純度低，價(jià)值低。
[0003]因此，為了充分利用四角蛤蜊、菲律賓蛤仔、文蛤等低值貝類資源，很有必要在現(xiàn)有技術(shù)的基礎(chǔ)之上，深度開發(fā)研究其活性成分，開發(fā)其新的應(yīng)用價(jià)值。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]發(fā)明目的:本發(fā)明的目的是為了解決上述技術(shù)問題，提供一種操作簡便、綠色環(huán)保、綜合成本低、生產(chǎn)周期短的從海洋低值貝類中純化分離核苷類成分的方法。本發(fā)明另一個(gè)目的是提供從海洋低值貝類中純化分離核苷類成分的應(yīng)用。
[0005]技術(shù)方案，為了實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為:
[0006]—種從海洋低值貝類中分離純化得到的核苷類成分，它包括肌苷、次黃嘌呤、黃嘌呤、鳥苷、胸腺嘧啶和2-脫氧鳥苷、腺嘌呤、鳥嘌呤、腺苷、2-脫氧肌苷、尿苷、胸苷、2-脫氧尿苷、胞嘧啶、胞苷、鳥苷酸、尿苷酸、肌苷酸、腺苷酸、胞苷酸。
[0007]—種從海洋低值貝類中分離純化核苷類成分的方法，包括以下步驟:
[0008](1)貝類軟體水提醇沉上清液的制備:
[0009]取新鮮的貝類軟體，洗凈瀝干后，稱重，加水煎煮，濾過，合并濾液，濃縮，離心去沉淀，得上清液，加入乙醇，靜置，抽濾得上清液，上清液濃縮至無醇味，采用電滲析進(jìn)行脫鹽處理；
[0010](2)大孔吸附樹脂柱粗分離:
[0011]將步驟(1)制備得到的貝類軟體水提醇沉上清液，上大孔吸附樹脂柱進(jìn)行層析，先用水進(jìn)行洗脫除雜，再用體積濃度為5%乙醇水溶液進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，得大孔吸附樹脂分離物；
[0012](3)陽離子交換樹脂的進(jìn)一步分離:
[0013]將步驟(2)制備得到的大孔吸附樹脂分離物，上陽離子交換樹脂柱，先用水洗雜， 再用體積濃度為3 %的氨水和體積濃度30 %乙醇混合溶液洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，即得核苷類成分。
[0014]作為優(yōu)選方案，以上所述的從海洋低值貝類中分離純化核苷類成分的方法，貝類軟體為四角蛤蜊、菲律賓蛤仔、文蛤、毛蚶、青蛤、竹蟶或西施舌。
[0015]作為優(yōu)選方案，以上所述的從海洋低值貝類中分離純化核苷類成分的方法，步驟(1)加入3?10倍量水，加熱煎煮2?3次，每次20?60min。
[0016]作為優(yōu)選方案，以上所述從海洋低值貝類中分離純化核苷類成分的方法，步驟(1) 電滲析方法為，電壓15-30V，上樣濃度為10-40g(固含)/L，脫鹽時(shí)間為l-4h。[〇〇17]作為優(yōu)選方案，以上所述的從海洋低值貝類中分離純化核苷類成分的方法，步驟(2)中大孔吸附樹脂為型號(hào)為SP207型大孔吸附樹脂，上樣量是1-3倍柱體積，水洗倍數(shù)是2-6倍柱體積；乙醇洗脫液用量是5-20倍柱體積。
[0018]作為優(yōu)選方案，以上所述的從海洋低值貝類中分離純化核苷類成分的方法，步驟(3)最大上樣量是10倍柱體積;水洗倍數(shù)是3-8倍柱體積;步驟(3)堿性乙醇的洗脫體積是3-8倍柱體積。
[0019]作為優(yōu)選方案，以上所述的從海洋低值貝類中分離純化核苷類成分的方法，步驟 (3)陽離子交換樹脂為型號(hào)001*7型強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂。
[0020]作為優(yōu)選方案，以上所述的從海洋低值貝類中分離純化核苷類成分的方法，步驟 (3)核苷類成分包括肌苷、次黃嘌呤、黃嘌呤、鳥苷、胸腺嘧啶和2-脫氧鳥苷、腺嘌呤、鳥嘌呤、腺苷、2-脫氧肌苷、尿苷、胸苷、2-脫氧尿苷、胞嘧啶、胞苷、鳥苷酸、尿苷酸、肌苷酸、腺苷酸、胞苷酸等。
[0021]本發(fā)明制備得到的從海洋低值貝類中分離純化得到的核苷類成分在制備保肝、護(hù)肝、抗氧化的藥物或保健品中的應(yīng)用。
[0022]有益效果:本發(fā)明制備得到的從海洋低值貝類中分離純化得到的核苷類成分含有純度高的肌苷、次黃嘌呤、黃嘌呤、鳥苷、胸腺嘧啶、2-脫氧鳥苷、腺嘌呤、鳥嘌呤、腺苷、2-脫氧肌苷、尿苷、胸苷、2-脫氧尿苷、胞嘧啶、胞苷、鳥苷酸、尿苷酸、肌苷酸、腺苷酸、胞苷酸等， 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明具有很好的保肝、護(hù)肝、抗氧化功效。[〇〇23]本發(fā)明提供的從海洋低值貝類中分離純化核苷類成分的方法，工藝設(shè)計(jì)合理，可操作性強(qiáng)，生產(chǎn)周期短，成本低，環(huán)保性強(qiáng)，制備得到的核苷類成分純度高，可充分利用四角蛤蜊、菲律賓蛤仔、文蛤、青蛤等低值貝類資源，具有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值?！靖綀D說明】
[0024]圖1為核苷成分對(duì)CC14致急性肝損傷模型小鼠血清ALT影響的柱狀圖。
[0025]圖2為核苷成分對(duì)CC14致急性肝損傷模型小鼠血清AST影響的柱狀圖。
[0026]圖3為核苷成分對(duì)CC14致急性肝損傷模型小鼠肝臟指數(shù)影響的柱狀圖。[〇〇27]圖4為核苷成分對(duì)CC14致急性肝損傷模型小鼠血漿中S0D影響的柱狀圖。
[0028]圖5為核苷成分對(duì)CC14致急性肝損傷模型小鼠肝臟中MDA影響的柱狀圖?！揪唧w實(shí)施方式】
[0029]實(shí)施例1
[0030] —種從海洋低值貝類中分離純化核苷類成分的方法，包括以下步驟:[〇〇31] (1)四角蛤蜊醇沉上清液的制備:取新鮮的四角蛤蜊軟體，洗凈瀝干后，稱重，加3 倍量水煎煮加熱回流2次，每次45min，濾過，合并濾液，濃縮，離心去沉淀，得上清液，加入乙醇使乙醇濃度為80 %，靜置過夜，抽濾得上清液;上清液濃縮至無醇味，采用電滲析進(jìn)行脫鹽，電壓為30V，上樣濃度為30g (固含)/L，脫鹽時(shí)間為1.5h。
[0032] (2)大孔吸附樹脂柱粗分離:取步驟(1)制備得到的四角蛤蜊軟體水提醇沉上清液 1.6倍柱體積，上SP207型大孔吸附樹脂柱進(jìn)行層析，先用2-3倍柱體積水進(jìn)行洗雜，再用8-10倍柱體積的5 %乙醇水溶液進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮至一定體積，得大孔吸附樹脂分離物；[〇〇33] (3)陽離子交換樹脂的進(jìn)一步分離:將10倍柱體積的大孔吸附樹脂分離物上001*7 型強(qiáng)酸型陽離子交換樹脂，先用4?5倍柱體積水洗雜，再用4?5倍柱體積的3%氨水和30% 乙醇混合液洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，即得純度高的核苷類成分。
[0034] (4)核苷類成分的含量測定:精密稱取肌苷標(biāo)準(zhǔn)品適量，加入甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。測定于260nm波長下的吸光度，以肌苷為對(duì)照品，計(jì)算總核苷的含量。
[0035]另取核苷、核苷酸標(biāo)準(zhǔn)品適量，精密稱定，進(jìn)行HPLC分析，測定肌苷、次黃嘌呤、黃嘌呤鳥苷酸等主要成分的含量。
[0036]具體色譜條件為:色譜柱:Waters XBridge (:18(4.6\250謹(jǐn)，5_);柱溫:25°(:;流動(dòng)相:甲醇(A)-〇.l%乙酸水(B)，梯度洗脫:0?8min，0-2%A;8?30min，2%-6%A;30? 40min，6%_10%A;40?50min，10%_30%A;流速:0 ? 5mL/min;檢測波長:254nm，進(jìn)樣體積: lOyLo
[0037]測量得到核苷成分含量(肌苷、次黃嘌呤、黃嘌呤、鳥苷、胸腺嘧啶、2-脫氧鳥苷)百分含量為79.8%。
[0038]四角蛤蜊經(jīng)江蘇省海洋水產(chǎn)研究所萬夕和研究員鑒定為蛤蜊科動(dòng)物四角蛤蜊 Mactra veneriformisReeve的新鮮軟體。[〇〇39] 實(shí)施例2
[0040] —種從菲律賓蛤仔中分離純化核苷類成分的方法，包括以下步驟:[0041 ] (1)菲律賓蛤仔醇沉上清液的制備:取新鮮的菲律賓蛤仔軟體，洗凈瀝干后，稱重， 加3倍量水加熱回流2次，每次60min，濾過，合并濾液，濃縮，離心去沉淀，得上清液，加入乙醇使乙醇濃度為75%，靜置過夜，抽濾得上清液。上清液濃縮至無醇味，采用電滲析進(jìn)行脫鹽，電壓為20V，上樣濃度為20g(固含)/L，脫鹽時(shí)間為2h。[〇〇42] (2)大孔吸附樹脂柱粗分離:取步驟(1)制備得到的菲律賓蛤仔軟體水提醇沉上清液2倍柱體積，上SP207型大孔吸附樹脂柱進(jìn)行層析，先用3倍柱體積水進(jìn)行洗雜，再用8倍柱體積的5%乙醇水溶液進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮至一定體積，得大孔吸附樹脂分離物；[〇〇43] (3)陽離子交換樹脂的進(jìn)一步分離:將8倍柱體積的大孔吸附樹脂分離物上001*7 型強(qiáng)酸型陽離子交換樹脂，先用5倍柱體積水洗雜，再用5倍柱體積的3 %氨水和30%乙醇混合液洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，即得純度高的核苷類成分。
[0044] (4)核苷類成分的含量測定:精密稱取肌苷標(biāo)準(zhǔn)品適量，加入甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。測定于260nm波長下的吸光度，以肌苷為對(duì)照品，計(jì)算總核苷的含量。
[0045]另取核苷、核苷酸標(biāo)準(zhǔn)品適量，精密稱定，進(jìn)行HPLC分析，測定肌苷、次黃嘌呤、黃嘌呤鳥苷酸等主要成分的含量。[〇〇46]具體色譜條件為:色譜柱:Waters XBridge &8(4.6\25〇!11111，5_);柱溫:25°(:;流動(dòng)相:甲醇(A)-〇.l%乙酸水(B)，梯度洗脫:0?8min，0-2%A;8?30min，2%-6%A;30? 40min，6%_10%A;40?50min，10%_30%A;流速:0 ? 5mL/min;檢測波長:254nm，進(jìn)樣體積: lOyLo
[0047]測量得到核苷成分含量(肌苷、次黃嘌呤、黃嘌呤、鳥苷、胸腺嘧啶、2-脫氧鳥苷)百分含量為74.5%。
[0048]菲律賓蛤仔經(jīng)江蘇省海洋水產(chǎn)研究所萬夕和研究員鑒定為簾蛤科動(dòng)物菲律賓蛤仔Ruditapes philippinarum的新鮮軟體。
[0049]實(shí)施例3
[0050] —種從毛蚶中分離純化核苷類成分的方法，包括以下步驟:[〇〇511 (1)毛蚶醇沉上清液的制備:取新鮮的毛蚶軟體，洗凈瀝干后，稱重，加4倍量水加熱回流2次，每次50min，濾過，合并濾液，濃縮，離心去沉淀，得上清液，加入乙醇使乙醇濃度為8〇%，靜置過夜，抽濾得上清液。上清液濃縮至無醇味，采用電滲析進(jìn)行脫鹽，電壓為30V， 上樣濃度為34g (固含)/L，脫鹽時(shí)間為1.5h。[〇〇52] (2)大孔吸附樹脂柱粗分離:取步驟(1)制備得到的毛蚶軟體水提醇沉上清液1.5 倍柱體積，上SP207型大孔吸附樹脂柱進(jìn)行層析，先用4倍柱體積水進(jìn)行洗雜，再用10倍柱體積的5 %乙醇水溶液進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮至一定體積，得大孔吸附樹脂分離物； [〇〇53] (3)陽離子交換樹脂的進(jìn)一步分離:將9倍柱體積的大孔吸附樹脂分離物上001*7 型強(qiáng)酸型陽離子交換樹脂，先用4倍柱體積水洗雜，再用8倍柱體積的3 %氨水和30%乙醇混合液洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，即得純度高的核苷類成分。
[0054] (4)核苷類成分的含量測定:精密稱取肌苷標(biāo)準(zhǔn)品適量，加入甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。測定于260nm波長下的吸光度，以肌苷為對(duì)照品，計(jì)算總核苷的含量。[〇〇55]另取核苷、核苷酸標(biāo)準(zhǔn)品適量，精密稱定，進(jìn)行HPLC分析，測定肌苷、次黃嘌呤、黃嘌呤鳥苷酸等主要成分的含量。[〇〇56]具體色譜條件為:色譜柱:Waters XBridge &8(4.6\25〇!11111，5_);柱溫:25°(:;流動(dòng)相:甲醇(A)-〇.l%乙酸水(B)，梯度洗脫:0?8min，0-2%A;8?30min，2%-6%A;30? 40min，6%_10%A;40?50min，10%_30%A;流速:0 ? 5mL/min;檢測波長:254nm，進(jìn)樣體積: lOyLo
[0057]測量得到核苷成分含量(肌苷、次黃嘌呤、黃嘌呤、鳥苷、胸腺嘧啶、2-脫氧鳥苷)百分含量為72.8%。[〇〇58] 毛蚶經(jīng)江蘇省海洋水產(chǎn)研究所萬夕和研究員鑒定為蚶科動(dòng)物毛蚶Scapharca subcrenata的新鮮軟體。
[0059]實(shí)施例4核苷類成分對(duì)CC14致小鼠急性肝損傷保護(hù)作用評(píng)價(jià)
[0060] 1、實(shí)驗(yàn)分組:
[0061] 取ICR的雄性小鼠隨機(jī)分成6個(gè)組，每組12只，分別為正常對(duì)照組，聯(lián)苯雙酯陽性藥組(150mg/kg)，CCl4模型組和本發(fā)明實(shí)施例1制備得到的核苷成分(10mg/kg，20mg/kg，40mg/kg共3個(gè)劑量組)。[〇〇62]2、實(shí)驗(yàn)方法:[〇〇63]正常對(duì)照組和CC14模型組灌胃給予0.2mL/10g的蒸餾水，各給藥組分別灌胃給予 0.2mL/10g的各劑量核苷成分，連續(xù)灌胃七天后，于第七天灌胃給藥一個(gè)小時(shí)后，正常對(duì)照組的小鼠按照體重0.2mL/10g來腹腔注射花生油溶液，其它六個(gè)組的小鼠都是按照體重 0.2mL/10g腹腔注射含有0.1 % CC14的花生油溶液。禁食(不禁水)16h，稱量體重，取血后，測定血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶ALT和谷草轉(zhuǎn)氨酶AST的水平。取血后，將小鼠立即進(jìn)行解剖，迅速取出整個(gè)肝臟組織，稱量總肝臟重量，同時(shí)取一小塊約〇.5g的肝組織用生理鹽水制成10%的肝勻漿，低溫離心后吸取上清部位，用黃嘌呤氧化酶法測定肝勻漿上清部位中S0D活力，用硫代巴比妥酸法測定肝勻漿上清部位中MDA含量。[〇〇64]3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
[0065]如圖1至圖3的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明制備得到的核苷成分具有明顯的預(yù)防并減輕 CC14誘導(dǎo)引起小鼠急性肝損傷，能有效的緩解因CC14引起的小鼠肝細(xì)胞的損傷，能減輕因肝細(xì)胞損傷引起的血清中ALT及AST含量的上升，抑制CC14誘導(dǎo)的化學(xué)性肝損傷小鼠肝臟指數(shù)的升高，同時(shí)能提高S0D，表明本發(fā)明純化得到的核苷成分可開發(fā)成保肝活性的藥品或保健品，具有重要的應(yīng)用價(jià)值。
[0066]實(shí)施例5核苷類成分對(duì)小鼠急性肝損傷氧化應(yīng)激的保護(hù)作用評(píng)價(jià)[〇〇67]1、實(shí)驗(yàn)分組:[〇〇68] 取ICR的雄性小鼠隨機(jī)分成7個(gè)組，每組12只，分別為正常對(duì)照組，聯(lián)苯雙酯陽性藥組(150mg/kg)，CCl4模型組和本發(fā)明實(shí)施例1制備得到的核苷成分(10mg/kg，20mg/kg， 40mg/kg，80mg/kg共4個(gè)劑量組)。[〇〇69]2、實(shí)驗(yàn)方法:[〇〇7〇]正常對(duì)照組和CC14模型組灌胃給予0.2mL/10g的蒸餾水，各給藥組分別灌胃給予 0.2mL/10g的各劑量核苷成分，連續(xù)灌胃七天后，于第七天灌胃給藥一個(gè)小時(shí)后，正常對(duì)照組的小鼠按照體重0.2mL/10g來腹腔注射花生油溶液，其它六個(gè)組的小鼠都是按照體重 0.2mL/10g腹腔注射含有0.1 % CC14的花生油溶液。禁食(不禁水)16h，稱量體重，取血后，測定血清中超氧化歧化酶S0D的水平。取血后，將小鼠立即進(jìn)行解剖，迅速取出肝臟組織，取約 〇.5g的肝組織用生理鹽水制成10%的肝勻漿，低溫離心后吸取上清部位，用黃嘌呤氧化酶法測定血清與肝勻漿上清部位中S0D活力，用硫代巴比妥酸法測定肝勻漿上清部位中MDA含量，用BCA法測定其中蛋白含量。
[0071]3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
[0072]自由基是啟動(dòng)脂質(zhì)過氧化的關(guān)鍵性因素，肝臟損傷越嚴(yán)重，其自由基含量越多。 MDA含量常反映了機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的程度，間接顯示體內(nèi)過氧化的程度。而S0D活力可顯示機(jī)體清除氧自由基的能力，故通常將MDA與S0D的測定相互配合。如圖4、圖5的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明制備得到的核苷成分能顯著提高CCL4所致的小鼠急性肝損傷中S0D活力，顯著降低MDA含量，故說明核苷類成分具有明顯的抗氧化作用，表明本發(fā)明純化得到的核苷成分可開發(fā)成抗氧化活性的藥品或保健品，具有重要的應(yīng)用價(jià)值。
[0073]應(yīng)當(dāng)指出的是，以上【具體實(shí)施方式】只是本發(fā)明比較有代表性的例子，顯然本發(fā)明的技術(shù)方案不限于上述實(shí)施例。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員，根據(jù)此文件中所公開提到或是聯(lián)想到的，均應(yīng)認(rèn)為是本專利所要保護(hù)的范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種從海洋低值貝類中分離純化得到的核苷類成分，其特征在于，它包括肌苷、次黃 嘌呤、黃嘌呤、鳥苷、胸腺嘧啶、2-脫氧鳥苷、腺嘌呤、鳥嘌呤、腺苷、2-脫氧肌苷、尿苷、胸苷、 2-脫氧尿苷、胞嘧啶、胞苷、鳥苷酸、尿苷酸、肌苷酸、腺苷酸、胞苷酸。2.—種從海洋低值貝類中分離純化核苷類成分的方法，其特征在于，包括以下步驟:(1)貝類軟體水提醇沉上清液的制備:取新鮮的貝類軟體，洗凈瀝干后，稱重，加水煎煮，濾過，合并濾液，濃縮，離心去沉淀， 得上清液，加入乙醇，靜置，抽濾得上清液，上清液濃縮至無醇味，采用電滲析進(jìn)行脫鹽處 理；(2)大孔吸附樹脂柱粗分離純化:將步驟(1)制備得到的貝類軟體水提醇沉上清液，上大孔吸附樹脂柱進(jìn)行層析，先用水 進(jìn)行洗脫除雜，再用體積濃度為5 %乙醇水溶液進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，得大孔吸 附樹脂分離物；(3)陽離子交換樹脂分離純化:將步驟(2)制備得到的大孔吸附樹脂分離物，上陽離子交換樹脂柱，先用水洗雜，再用 體積濃度為3 %的氨水和體積濃度30 %乙醇混合溶液洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，即得核 苷類成分。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的從海洋低值貝類中分離純化核苷類成分的方法，其特征在于， 貝類軟體為四角蛤蜊、菲律賓蛤仔或文蛤。4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的從海洋低值貝類中分離純化核苷類成分的方法，其特征在于， 步驟(1)加入3?10倍量水，加熱煎煮2?3次，每次20?60min。5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的從海洋低值貝類中分離純化核苷類成分的方法，其特征在于， 步驟(1)電滲析方法為，電壓15-30V，上樣濃度為10-40g/L，脫鹽時(shí)間為1 -4h。6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的從海洋低值貝類中分離純化核苷類成分的方法，其特征在于， 步驟(2)中大孔吸附樹脂為型號(hào)為SP207型大孔吸附樹脂，上樣量是1?3倍柱體積，水洗倍 數(shù)是2-6倍柱體積；乙醇洗脫液用量是5-20倍柱體積。7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的從海洋低值貝類中分離純化核苷類成分的方法，其特征在于， 步驟(3)最大上樣量是10倍柱體積;水洗倍數(shù)是3-8倍柱體積;步驟(3)堿性乙醇的洗脫體積 是3-10倍柱體積。8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的從海洋低值貝類中分離純化核苷類成分的方法，其特征在于， 步驟(3)陽離子交換樹脂為型號(hào)001*7型強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂。9.根據(jù)權(quán)利要求2所述的從海洋低值貝類中分離純化核苷類成分的方法，其特征在于， 步驟(3)核苷類成分包括肌苷、次黃嘌呤、黃嘌呤、鳥苷、胸腺嘧啶和2-脫氧鳥苷。10.權(quán)利要求1所述的從海洋低值貝類中分離純化得到的核苷類成分在制備保肝、護(hù) 肝、抗氧化藥物或保健品中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK106018582SQ201610309716
【公開日】2016年10月12日
【申請(qǐng)日】2016年5月11日
【發(fā)明人】劉睿, 吳皓, 程建明, 張倩, 王欣之, 楊小林, 邱韻縈
【申請(qǐng)人】南京中醫(yī)藥大學(xué)