副流感病毒1、2、3型化學(xué)發(fā)光免疫檢測試劑盒及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種副流感病毒1、2、3型化學(xué)發(fā)光免疫檢測試劑盒及其制備方法，副流感病毒1、2、3型化學(xué)發(fā)光免疫檢測試劑盒包括：副流感病毒1、2、3型重組蛋白包被的羧基化的磁微粒和抗人免疫球蛋白標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物。這種副流感病毒1、2、3型化學(xué)發(fā)光免疫檢測試劑盒能夠以全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀為檢測工具，完成副流感病毒1、2、3型的檢測這種副流感病毒1、2、3型化學(xué)發(fā)光免疫檢測試劑盒，經(jīng)過實(shí)驗(yàn)，其檢測靈敏度達(dá)到1U/L，相對于傳統(tǒng)的副流感病毒1、2、3型的檢測方法靈敏度至少提高了10倍，這種副流感病毒1、2、3型化學(xué)發(fā)光免疫檢測試劑盒的檢測精度較高。
【專利說明】
副流感病毒1、2、3型化學(xué)發(fā)光免疫檢測試劑盒及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及體外檢測領(lǐng)域，尤其涉及一種副流感病毒1、2、3型化學(xué)發(fā)光免疫檢測 試劑盒及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 人副流感病毒（Human Parainfluenzavirus，HPIV)是一種屬于副黏液病毒族 的單胞RNA病毒，根據(jù)其抗原性與遺傳性的不同可分為4種血清型即人副流感病毒 1型(HPIV1)、人副流感病毒2型（HPIV2)、人副流感病毒3型（HPIV3)及人副流感病 毒4型(HPIV4)。人副流感病毒是常見的急性病毒性呼吸道感染性疾病的病原體，在嬰兒 主要引起下呼吸道感染，在成人主要表現(xiàn)為上呼吸道感染。此外，人副流感病毒還曾有感染 泌尿道的報道，被認(rèn)為是前列腺炎的一種病因。乙型流感病毒是常見的流感流行病毒，其僅 在人類之間轉(zhuǎn)播，乙型流感通常有肌炎及胃腸道癥狀，在某些年份成為強(qiáng)勢株。相比較甲型 流感，乙型流感病毒更容易引起較嚴(yán)重的合并癥。
[0003] 目前副流感病毒1、2、3型感染的檢測主要有以下幾種方法： 一、酶聯(lián)免疫吸附法 酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)被廣泛應(yīng)用，但該方法也存在著下述的不足之處： ⑴使用12X8型、6X8型、8X12型或整板型96孔專用微孔板作為抗原包被用具和反 應(yīng)容器，在使用時只能分成12批次、6批次、8批次或整板一次使用，無法進(jìn)行獨(dú)立的、單 人份的檢測； (2) 定量測定所用的試劑種類較多，每一種檢測試劑都要用試劑瓶來盛裝，并且每使 用一種試劑時都需要更換吸液嘴來分別加注到微孔板的微孔中，不但試劑瓶種類多，加注 試劑的操作也極為繁瑣； (3) 缺少對檢測信息的相應(yīng)標(biāo)注，只能通過查看試劑盒外包裝盒的標(biāo)識才能了解或知 悉檢測試劑的生產(chǎn)批號及有效期信息，而且所知悉的信息在檢測過程中不受控，具有很大 的隨意性； (4) 檢測試劑在檢測過程中處于開放的空間，容易引起各種試劑之間的交叉污染而影 響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性； (5) 檢測過程多采用手工操作，試劑或樣本的加量不很精確，操作過程極為繁瑣和復(fù) 雜，容易發(fā)生操作差錯，檢測結(jié)果的準(zhǔn)確度和精密度較差； (6) 在檢測項(xiàng)目成套試劑的數(shù)量配置及使用上均為項(xiàng)目數(shù)X 48/96人份，如果需要檢 測10個項(xiàng)目，則試劑的配置及使用數(shù)須為10X48/96人份，如果只有一份樣本需要檢測10 個不同的項(xiàng)目，也需要配置10 X 48/96人份的試劑，存在著不夠經(jīng)濟(jì)合理的缺點(diǎn)。
[0004] 二、放射免疫分析法 放射免疫分析方法放射性污染大、加樣步驟繁瑣、操作復(fù)雜、操作時間長、測定結(jié)果不 穩(wěn)定、試劑保存時間短、試劑盒操作自動化程度低、配套儀器價格昂貴等不足之處。
[0005] 三、基因診斷 對許多RNA病毒來說RT-PCR診斷方法比傳統(tǒng)的病毒分離和抗原診斷方法既快又靈 敏。而且RT-PCR可以很容易的同時診斷多種病毒，另一些診斷方法如病毒分離和免疫熒光 分析卻不能。但該方法也有不足之處，如PCR技術(shù)，DNA擴(kuò)增的高校性導(dǎo)致了極微量的污 染既可出現(xiàn)假陽性，因而使結(jié)果失真。此外病毒作為外原基因的入侵者，必須在闡明其全部 或部分核苷酸序列時，才可以設(shè)計引物或探針，進(jìn)行核酸分子雜交和PCR檢測。
[0006] 從現(xiàn)有的副流感病毒1、2、3型的檢測方法可見，EIA、病毒分離、RT-PCR診斷方法盡 管都有一定的特異性和敏感性的優(yōu)點(diǎn)，但在操作上需要專業(yè)技術(shù)人員、專門的儀器設(shè)備和 特定的條件及費(fèi)時等缺點(diǎn)。
[0007] 吖啶酯作為標(biāo)記物的直接化學(xué)發(fā)光相比以上方法具有明細(xì)優(yōu)勢，主要表現(xiàn)在:反 應(yīng)不需要催化劑，只要堿性環(huán)境即可進(jìn)行，反應(yīng)迅速，背景發(fā)光低，信噪比高，干擾因素少， 試劑穩(wěn)定性好，可以兩點(diǎn)定標(biāo)，體系簡單，激發(fā)液成本低，吖啶酯易與蛋白質(zhì)聯(lián)結(jié)，且聯(lián)結(jié)后 光子產(chǎn)率不減少，已經(jīng)成為副流感病毒1、2、3型診斷新的發(fā)展方向。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 基于此，有必要提供一種檢測靈敏度較高的副流感病毒1、2、3型化學(xué)發(fā)光免疫檢 測試劑盒及其制備方法。
[0009] -種副流感病毒1、2、3型化學(xué)發(fā)光免疫檢測試劑盒，包括:副流感病毒1、2、3型重 組蛋白包被的羧基化的磁微粒和抗人免疫球蛋白標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物。
[0010] 在一個實(shí)施例中，所述副流感病毒1、2、3型重組蛋白包被的羧基化的磁微粒中，所 述副流感病毒1、2、3型重組蛋白與所述羧基化的磁微粒的比例為1:25~35。
[0011] 在一個實(shí)施例中，所述抗人免疫球蛋白標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物中，所述抗人免疫 球蛋白與所述化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物的比例為50:1~10。
[0012]在一個實(shí)施例中，所述羧基化的磁微粒的粒徑為〇.〇5ym~lym。
[0013] 在一個實(shí)施例中，所述化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物為魯米諾、異魯米諾、三聯(lián)吡啶釕或吖啶 酯。
[0014] 在一個實(shí)施例中，還包括化學(xué)發(fā)光底物液，所述化學(xué)發(fā)光底物液包括A液和B液。
[0015] 在一個實(shí)施例中，所述A液為H202溶液，所述B液為NaOH溶液。
[0016] 在一個實(shí)施例中，還包括副流感病毒1、2、3型定標(biāo)品。
[0017] 在一個實(shí)施例中，所述副流感病毒1、2、3型定標(biāo)品為濃度分別為1U/U10U/L、 100U/L、500U/L、1000U/L 和2000U/L的副流感病毒 1、2、3 型的溶液。
[0018] -種上述的副流感病毒1、2、3型化學(xué)發(fā)光免疫檢測試劑盒的制備方法，包括如下 步驟： 取羧基化的磁微粒的懸浮液，磁分離去上清后用MES緩沖液重懸，接著加入EDC水溶液， 活化羧基化的磁微粒的表面羧基，接著加入副流感病毒1、2、3型重組蛋白，室溫下混懸2h~ l〇h，磁分離去除上清后用Tri s緩沖液重懸，得到副流感病毒1、2、3型重組蛋白包被的羧基 化的磁微粒；以及 取抗人免疫球蛋白，加入碳酸鹽緩沖液后混勻，然后加入化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物后混勻，室溫 下避光反應(yīng)lh~2h后除雜，得到抗人免疫球蛋白標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物。
[0019] 這種副流感病毒1、2、3型化學(xué)發(fā)光免疫檢測試劑盒能夠以全自動化學(xué)發(fā)光免疫分 析儀為檢測工具，完成副流感病毒1、2、3型的檢測這種副流感病毒1、2、3型化學(xué)發(fā)光免疫檢 測試劑盒，經(jīng)過實(shí)驗(yàn)，其檢測靈敏度達(dá)到1U/L，相對于傳統(tǒng)的副流感病毒1、2、3型的檢測方 法靈敏度至少提高了 10倍，這種副流感病毒1、2、3型化學(xué)發(fā)光免疫檢測試劑盒的檢測精度 較高。
[0020]
【附圖說明】
[0021] 圖1為一實(shí)施方式的副流感病毒1、2、3型化學(xué)發(fā)光免疫檢測試劑盒的制備方法的 流程圖； 圖2為實(shí)施例3得到的副流感病毒1、2、3型標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。
[0022]
【具體實(shí)施方式】
[0023] 為使本發(fā)明的上述目的、特征和優(yōu)點(diǎn)能夠更加明顯易懂，下面結(jié)合附圖和具體實(shí) 施例對本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】做詳細(xì)的說明。在下面的描述中闡述了很多具體細(xì)節(jié)以便于 充分理解本發(fā)明。但是本發(fā)明能夠以很多不同于在此描述的其它方式來實(shí)施，本領(lǐng)域技術(shù) 人員可以在不違背本發(fā)明內(nèi)涵的情況下做類似改進(jìn)，因此本發(fā)明不受下面公開的具體實(shí)施 的限制。
[0024] -實(shí)施方式的副流感病毒1、2、3型化學(xué)發(fā)光免疫檢測試劑盒，包括:副流感病毒1、 2、3型重組蛋白包被的羧基化的磁微粒和抗人免疫球蛋白標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物。
[0025] 優(yōu)選的，副流感病毒1、2、3型重組蛋白包被的羧基化的磁微粒中，副流感病毒1、2、 3型重組蛋白與羧基化的磁微粒的比例為1:2 5~3 5。
[0026]優(yōu)選的，抗人免疫球蛋白標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物中，抗人免疫球蛋白與化學(xué)發(fā)光 標(biāo)記物的比例為50:1~10。
[0027] 優(yōu)選的，羧基化的磁微粒的粒徑為0.05wii~lym。
[0028] 化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物可以為魯米諾、異魯米諾、三聯(lián)吡啶釕或吖啶酯。其中，化學(xué)發(fā)光 標(biāo)記物優(yōu)選為吖啶酯。
[0029] 在其他的實(shí)施例中，上述副流感病毒1、2、3型化學(xué)發(fā)光免疫檢測試劑盒還包括化 學(xué)發(fā)光底物液。
[0030] 化學(xué)發(fā)光底物液包括A液和B液。A液可以為H202溶液，B液可以為NaOH溶液。
[0031] 本實(shí)施例中，A液為濃度為0. lmol/L的H202溶液，B液為濃度為0.25mol/L的NaOH溶 液。
[0032]在其他的實(shí)施例中，上述副流感病毒1、2、3型化學(xué)發(fā)光免疫檢測試劑盒還包括副 流感病毒1、2、3型定標(biāo)品。
[0033] 副流感病毒1、2、3型定標(biāo)品為濃度分別為1U/L、10U/L、100U/L、500U/L、1000U/L和 2000U/L的副流感病毒1、2、3型的溶液。
[0034]具體的，副流感病毒1、2、3型定標(biāo)品可以采用標(biāo)準(zhǔn)品緩沖液將副流感病毒1、2、3型 配制成濃度分別為1U/L、10U/L、100U/L、500U/L、1000U/L和2000U/L的副流感病毒1、2、3型 的溶液。
[0035] 這種副流感病毒1、2、3型化學(xué)發(fā)光免疫檢測試劑盒用于副流感病毒1、2、3型檢測 時，利用全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀對副流感病毒1、2、3型定標(biāo)品進(jìn)行檢測，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲 線，內(nèi)置于電腦軟件;接著測試實(shí)際樣本，根據(jù)樣本發(fā)光值計算樣本濃度;最后對副流感病 毒1、2、3型全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)進(jìn)行性能(靈敏度、線性、精密度、干擾性)的評價。
[0036] 這種副流感病毒1、2、3型化學(xué)發(fā)光免疫檢測試劑盒能夠以全自動化學(xué)發(fā)光免疫分 析儀為檢測工具，完成副流感病毒1、2、3型的檢測這種副流感病毒1、2、3型化學(xué)發(fā)光免疫檢 測試劑盒，經(jīng)過實(shí)驗(yàn)，其檢測靈敏度達(dá)到1U/L，相對于傳統(tǒng)的副流感病毒1、2、3型的檢測方 法靈敏度至少提高了 10倍，這種副流感病毒1、2、3型化學(xué)發(fā)光免疫檢測試劑盒的檢測精度 較高。
[0037] 此外，這種副流感病毒1、2、3型化學(xué)發(fā)光免疫檢測試劑盒還具有以下優(yōu)點(diǎn)： 1、 選擇吖啶酯作為標(biāo)記材料，并應(yīng)用于化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)，該發(fā)光體系為直接化 學(xué)發(fā)光，與傳統(tǒng)的酶促化學(xué)發(fā)光相比，該反應(yīng)不需要酶的參與，更加節(jié)約成本； 2、 選用吖啶酯的化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)線性范圍寬，能達(dá)到1U/L~1000U/L，而傳統(tǒng)的 副流感病毒1、2、3型的檢測方法的檢線性范圍為20U/L~1000U/L; 3、 吖啶酯化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)重復(fù)性高，批內(nèi)及批間差均在5%以內(nèi)，這是其它化學(xué) 發(fā)光免疫分析系統(tǒng)難以達(dá)到的； 4、 化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)已實(shí)現(xiàn)樣本的定量，通過內(nèi)置標(biāo)準(zhǔn)曲線到測試軟件，只需測 試樣本就可直接得到樣本的濃度值； 5、 化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)可以實(shí)現(xiàn)全自動化，試劑及樣本的添加全有儀器完成，操作 更加簡便，減少了人為的誤差。
[0038] 如圖1所示的上述副流感病毒1、2、3型化學(xué)發(fā)光免疫檢測試劑盒的制備方法，包括 如下步驟： 取羧基化的磁微粒的懸浮液，磁分離去上清后用MES緩沖液重懸，接著加入EDC水溶液， 活化羧基化的磁微粒的表面羧基，接著加入副流感病毒1、2、3型重組蛋白，室溫下混懸2h~ l〇h，磁分離去除上清后用Tri s緩沖液重懸，得到副流感病毒1、2、3型重組蛋白包被的羧基 化的磁微粒。
[0039] MES(2-(N-嗎啡啉）乙磺酸)緩沖液的濃度為0.02M，pH為5.5。
[0040] Tris緩沖液的濃度為0.1M并且含有2%BSA，pH為8.0。
[00411 EDC(1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基）-碳化二亞胺）水溶液的濃度為10mg/mL~20mg/ mL，EDC與羧基化的磁微粒的比例為0.05:0.1~1。
[0042]優(yōu)選的，副流感病毒1、2、3型重組蛋白包被的羧基化的磁微粒中，副流感病毒1、2、 3型重組蛋白與羧基化的磁微粒的比例為1:2 5~3 5。
[0043]優(yōu)選的，羧基化的磁微粒的粒徑為0.05M1~lym。
[0044]取抗人免疫球蛋白，加入碳酸鹽緩沖液后混勻，然后加入化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物后混勻， 室溫下避光反應(yīng)lh~2h后除雜，得到抗人免疫球蛋白標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物。
[0045] 碳酸鹽緩沖液濃度為0. lM，pH為9.0~9.5， 除雜的操作為離心脫鹽柱脫鹽，具體操作為：先分別用純凈水及TBS緩沖液（40 mM Tris-HCl，0.5% BSA，1% NaCl，pH 8.0)處理離心脫鹽柱，最后加入得到的副流感病毒1、2、3 型重組蛋白包被的羧基化的磁微粒的溶液，最后收集離心管中的液體。
[0046] 優(yōu)選的，抗人免疫球蛋白標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物中，副流感病毒1、2、3型重組蛋白 與化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物的比例為50:1~10。
[0047] 化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物可以為魯米諾、異魯米諾、三聯(lián)吡啶釕或吖啶酯。其中，化學(xué)發(fā)光 標(biāo)記物優(yōu)選為吖啶酯。
[0048] 得到的副流感病毒1、2、3型重組蛋白包被的羧基化的磁微粒和抗人免疫球蛋白標(biāo) 記的化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物組合即可得到上述副流感病毒1、2、3型化學(xué)發(fā)光免疫檢測試劑盒。
[0049] 這種副流感病毒1、2、3型化學(xué)發(fā)光免疫檢測試劑盒在使用時，還需要化學(xué)發(fā)光底 物液和副流感病毒1、2、3型定標(biāo)品。
[0050] 化學(xué)發(fā)光底物液和副流感病毒1、2、3型定標(biāo)品可以自行配制得到。
[0051 ] 化學(xué)發(fā)光底物液包括A液和B液。A液可以為H2〇2溶液，B液可以為NaOH溶液。
[0052] 本實(shí)施例中，A液為濃度為0. lmol/L的H2〇2溶液，B液為濃度為0.25mol/L的NaOH溶 液。
[0053]具體的，副流感病毒1、2、3型定標(biāo)品可以采用標(biāo)準(zhǔn)品緩沖液將副流感病毒1、2、3型 配制成濃度分別為1U/L、10U/L、100U/L、500U/L、1000U/L和2000U/L的副流感病毒1、2、3型 的溶液。
[0054]這種副流感病毒1、2、3型化學(xué)發(fā)光免疫檢測試劑盒的制備方法簡單方便，制得的 副流感病毒1、2、3型化學(xué)發(fā)光免疫檢測試劑盒的檢測靈敏度較高，具有良好的應(yīng)用前景。
[0055] 以下為具體實(shí)施例。
[0056] 實(shí)施例1:副流感病毒1、2、3型化學(xué)發(fā)光免疫檢測試劑盒的制備 (1)副流感病毒1、2、3型重組蛋白包被的羧基化的磁微粒的制備： 取含有50mg粒徑為0.05M1~lym的羧基化的磁微粒(MagnaBind21353)懸浮液，磁分離去 上清，用0.02 M，pH為5.5 MES緩沖液重懸，加入lmL新配置的1 Omg/mL的EDC水溶液，活化磁 珠表面羧基，加入4mg副流感病毒1、2、3型重組蛋白（biorbyt，貨號orb48780)，室溫下混懸 6h，磁分離，去除上清，用含2%BSA的0.1M，pH為8.0的Tris緩沖液重懸到lmg/mL，得到副流感 病毒1、2、3型重組蛋白包被的羧基化的磁微粒，每瓶5mL分裝保存于4°C備用。
[0057] (2)抗人免疫球蛋白標(biāo)記的吖啶酯的制備： 取50yL濃度為25mg/mL的抗人免疫球蛋白，加入150yL濃度為0. lM、pH為9.0~9.5的碳酸 鹽緩沖液，混勻，然后加入1.5yL濃度為5mg/mL的吖啶酯溶液混勻，室溫下避光反應(yīng)，1.5h后 取出，用2mL的zeba離心脫鹽柱脫鹽處理，脫鹽過程中首先分別用純凈水及TBS緩沖液進(jìn)行 處理，最后加入得到的抗人免疫球蛋白標(biāo)記的吖啶酯溶液，收集離心管中的液體至保存管 得到抗人免疫球蛋白標(biāo)記的吖啶酯，每瓶5mL分裝保存于4°C備用。
[0058] (3)副流感病毒1、2、3型定標(biāo)品的制備： 用標(biāo)準(zhǔn)品緩沖液(40 mM Tris-HCl，0.5% BSA，1% NaCl，pH 8.0)將副流感病毒1、2、3型 配置成濃度為〇1]/1、101]/1、1001]/1、5001]/1、10001]/1和20001]/1，每瓶0.5 1^分裝凍干，41€ 保存?zhèn)溆谩?br>[0059] 實(shí)施例2:副流感病毒1、2、3型化學(xué)發(fā)光免疫檢測方法 以全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀(YHL0,貨號iFlash3000)為檢測工具，方法學(xué)模式為間 接免疫法，即儀器依次加入50 yL的樣品、50 yL的副流感病毒1、2、3型重組蛋白包被的羧基 化的磁微粒以及50 yL的副流感病毒1、2、3型處理液，反應(yīng)20 min后，再加50 yL的抗人免疫 球蛋白吖啶酯，反應(yīng)20 min后，進(jìn)行磁分離，儀器將反應(yīng)混合物送入暗室，依次加入發(fā)光底 物A液(H2〇2)及B液(NaOH)進(jìn)行發(fā)光反應(yīng)，最后記錄發(fā)光值。
[0060] 實(shí)施例3:副流感病毒1、2、3型化學(xué)發(fā)光免疫檢測試劑盒性能評價 采用實(shí)施例2中的方法對副流感病毒1、2、3型定標(biāo)品進(jìn)行檢測，得到繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖 2所示。
[0061 ]接著對接著測試實(shí)際樣本，根據(jù)樣本發(fā)光值計算樣本濃度。
[0062]靈敏度的檢測： 參照CLSI EP17-A文件推薦實(shí)驗(yàn)方案，計算副流感病毒1、2、3型化學(xué)發(fā)光免疫檢測試 劑盒的靈敏度，求得的靈敏度為1U/L。
[0063]線性的檢測： 對濃度為1U/L、10U/L、100U/L、500U/L、1000U/L和2000U/L標(biāo)準(zhǔn)品做線性分析，計算線 性相關(guān)系數(shù)，r=0.9996,另外，該試劑盒對副流感病毒1、2、3型樣品檢測的線性范圍為1U/L ~1000U/L。
[0064]精密度測定： 取濃度為50U/L及500U/L兩個副流感病毒1、2、3型樣品，每個樣本每個濃度各做3個平 行，用三批試劑盒進(jìn)行檢測，計算試劑盒批內(nèi)及批間差，結(jié)果表明該試劑盒批內(nèi)及批間差均 小于5%。
[0065] 干擾性實(shí)驗(yàn)： 取混合血清分別添加干擾物包括:結(jié)合膽紅素、游離膽紅素、血紅蛋白、抗壞血酸、甘油 酯，添加比例按照1:20進(jìn)行，分別測定混合血清及添加了各種干擾物后混合血清的測值， 計算二者之間的偏差，以±10%為可接受范圍。結(jié)果表明，干擾性均達(dá)到NCCLS的文件標(biāo) 準(zhǔn)，可用于臨床實(shí)驗(yàn)室副流感病毒1、2、3型狀況的準(zhǔn)確評估。
[0066] 實(shí)施例4、副流感病毒1、2、3型化學(xué)發(fā)光免疫檢測試劑盒的對比實(shí)驗(yàn) 分別用化學(xué)發(fā)光檢測方法和傳統(tǒng)的酶聯(lián)免疫吸附法對濃度為0、50U/L的副流感病毒1、 2、3型樣品做檢測，兩種方法檢測靈敏度相比，數(shù)據(jù)如下表所示：
由上表可以看出，化學(xué)發(fā)光檢測方法的靈敏度較酶聯(lián)免疫吸附法提高了 10倍以上。
[0067] 以上所述實(shí)施例僅表達(dá)了本發(fā)明的幾種實(shí)施方式，其描述較為具體和詳細(xì)，但并不能 因此而理解為對本發(fā)明專利范圍的限制。應(yīng)當(dāng)指出的是，對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說， 在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)，這些都屬于本發(fā)明的保護(hù)范 圍。因此，本發(fā)明專利的保護(hù)范圍應(yīng)以所附權(quán)利要求為準(zhǔn)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種副流感病毒1、2、3型化學(xué)發(fā)光免疫檢測試劑盒，其特征在于，包括:副流感病毒 1、2、3型重組蛋白包被的羧基化的磁微粒和抗人免疫球蛋白標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的副流感病毒1、2、3型化學(xué)發(fā)光免疫檢測試劑盒，其特征在于， 所述副流感病毒1、2、3型重組蛋白包被的羧基化的磁微粒中，所述副流感病毒1、2、3型重組 蛋白與所述羧基化的磁微粒的比例為1:25~35。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的副流感病毒1、2、3型化學(xué)發(fā)光免疫檢測試劑盒，其特征在于， 所述抗人免疫球蛋白標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物中，所述副流感病毒1、2、3型重組蛋白與所述 化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物的比例為50:1~10。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的副流感病毒1、2、3型化學(xué)發(fā)光免疫檢測試劑盒，其特征在于， 所述羧基化的磁微粒的粒徑為〇. 〇5μηι~Ιμπι。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的副流感病毒1、2、3型化學(xué)發(fā)光免疫檢測試劑盒，其特征在于， 所述化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物為魯米諾、異魯米諾、三聯(lián)吡啶釕或吖啶酯。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的副流感病毒1、2、3型化學(xué)發(fā)光免疫檢測試劑盒，其特征在于， 還包括化學(xué)發(fā)光底物液，所述化學(xué)發(fā)光底物液包括Α液和Β液。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的副流感病毒1、2、3型化學(xué)發(fā)光免疫檢測試劑盒，其特征在于， 所述A液為H2〇 2溶液，所述B液為NaOH溶液。8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的副流感病毒1、2、3型化學(xué)發(fā)光免疫檢測試劑盒，其特征在于， 還包括副流感病毒1、2、3型定標(biāo)品。9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的副流感病毒1、2、3型化學(xué)發(fā)光免疫檢測試劑盒，其特征在于， 所述副流感病毒1、2、3型定標(biāo)品為濃度分別為1U/L、10U/L、100U/L、500U/L、1000U/L和 2000U/L的副流感病毒1、2、3型的溶液。10. -種根據(jù)權(quán)利要求1~9中任一項(xiàng)所述的副流感病毒1、2、3型化學(xué)發(fā)光免疫檢測試劑 盒的制備方法，其特征在于，包括如下步驟： 取羧基化的磁微粒的懸浮液，磁分離去上清后用MES緩沖液重懸，接著加入EDC水溶液， 活化羧基化的磁微粒的表面羧基，接著加入副流感病毒1、2、3型重組蛋白，室溫下混懸2h~ l〇h，磁分離去除上清后用Tri s緩沖液重懸，得到副流感病毒1、2、3型重組蛋白包被的羧基 化的磁微粒；以及取抗人免疫球蛋白，加入碳酸鹽緩沖液后混勻，然后加入化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物 后混勻，室溫下避光反應(yīng)lh~2h后除雜，得到抗人免疫球蛋白標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物。
【文檔編號】G01N21/76GK106053441SQ201610503671
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年6月30日
【發(fā)明人】夏福臻, 祝亮, 王剛, 錢純亙, 黃湘東
【申請人】深圳市亞輝龍生物科技股份有限公司