一種加味逍遙丸的多成分含量測定方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于中藥制劑質(zhì)量控制技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種加味逍遙丸含量測定方法。其技術(shù)方案是一種加味逍遙丸的多成分含量測定方法，包括步驟：A.制備對照品溶液；B.制備供試品溶液；C.用高效液相色譜儀(包括DAD檢測器)進(jìn)行檢測，色譜條件：色譜柱為Plastisil ODS C18、乙腈—磷酸水為流動相、流速為0.8mL/min～1.2mL/min、柱溫為35℃～39℃、檢測波長為200nm～400nm、進(jìn)樣量5?20μL；D.計(jì)算各成分的含量。本發(fā)明同時(shí)測定加味逍遙丸中梔子苷，甘草苷，丹皮酚，芍藥苷，甘草酸，阿魏酸6種成分的含量，操作簡單，靈敏度高、重現(xiàn)性好，檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠。
【專利說明】
一種加味逍遙丸的多成分含量測定方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于中藥制劑質(zhì)量控制技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種加味逍遙丸含量測定方 法。
【背景技術(shù)】
[0002] 加味逍遙丸主要由柴胡、當(dāng)歸、白芍、梔子，白術(shù)，茯苓，甘草，牡丹皮，薄荷九種藥 材組成，為中藥成方制劑，具有疏肝清熱、健脾養(yǎng)血之功效，臨床上主要用于肝郁血虛、肝脾 不和、兩脅脹痛、頭暈?zāi)垦?、倦怠食少、月?jīng)不調(diào)、臍腹脹痛等。其中阿魏酸是當(dāng)歸主要化學(xué) 成分;芍藥苷為白芍的主要化學(xué)成分;甘草酸、甘草苷為甘草的主要化學(xué)成分;丹皮酚是牡 丹皮的主要特征成分;梔子苷是梔子的主要化學(xué)成分。
[0003] 目前中國藥典中關(guān)于加味逍遙丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的含量測定項(xiàng)中僅用芍藥苷一種 成分的含量來控制該藥物的質(zhì)量，難以真正體現(xiàn)和保證加味逍遙丸的內(nèi)在質(zhì)量。
[0004] 現(xiàn)有文獻(xiàn)中，也僅有記載：高效液相色譜法同時(shí)測定加味逍遙丸中梔子苷和芍藥 苷的含量;高效液相色譜法測定加味逍遙丸中丹皮酚的含量;高效液相色譜法測定加味逍 遙丸中芍藥苷與甘草苷的含量。
[0005] 通過1-2種化學(xué)成分顯然無法全面評價(jià)和控制加味逍遙丸質(zhì)量。但能簡單、準(zhǔn)確測 定加味逍遙丸的多成份含量還是一個(gè)技術(shù)難題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是:為了克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足，本發(fā)明提供一種加味逍遙丸的多 成分含量測定方法，同時(shí)測定加味逍遙丸中梔子苷、甘草苷、丹皮酚、芍藥苷、甘草酸、阿魏 酸6種主要成分的含量。
[0007] 本發(fā)明的技術(shù)方案是:一種加味逍遙丸的多成分含量測定方法，其特征是執(zhí)行以 下步驟：
[0008] A.制備對照品溶液:分別稱取一定量的梔子苷，甘草苷，丹皮酚，芍藥苷，甘草酸， 阿魏酸對照品，用溶劑將其溶解，得到一定濃度的對照品儲備液;分別精密量一定量所述對 照品儲備液加無水甲醇稀釋，得對照品溶液；
[0009] B.制備供試品溶液:將待測加味逍遙丸溶解于溶劑中，濾過，得到一定濃度的供試 品溶液；
[0010] C.用高效液相色譜儀進(jìn)行檢測，其中所述高效液相色譜儀包括DAD檢測器，色譜條 件:色譜柱為Plastisil ODS Ci8、乙腈一磷酸水為流動相、流速為0.8mL/min~1.2mL/min、 柱溫為35 °C~39 °C、檢測波長為200nm~400nm、進(jìn)樣量5-20yL;
[0011] D.計(jì)算所述供試品溶液中6種成分的含量：以外標(biāo)法計(jì)算所述供試品溶液中所述 梔子苷、甘草苷、丹皮酚、芍藥苷、甘草酸、阿魏酸6種成分的含量。
[0012]進(jìn)一步的，所述溶劑為無水甲醇。
[0013]進(jìn)一步的，所述檢測器為二極管陣列檢測器，DAD參比波長為380nm所述檢測波長 為230nm、238nm、254nm、274nm、328nm，對應(yīng)的待測成分為:230nm為芍藥苷，238nm為梔子苷、 254nm為甘草酸，274nm為丹皮酸與甘草苷，328nm為阿魏酸。
[0014]進(jìn)一步的，所述流動相為乙腈一 0.1~0.2%磷酸水；
[0015] 進(jìn)一步的，所述流動相為乙腈一0.2%磷酸水;所述流速為1 .OmL/min;所述柱溫37 °C ;所述進(jìn)樣量10yL
[0016] 進(jìn)一步的，所述高效液相色譜儀進(jìn)行檢測時(shí)用梯度洗脫，梯度洗脫順序：
[0017] 〇~l〇min，乙腈濃度由5%增至8%;
[0018] 10~15min，乙腈濃度由8%增至10%;
[0019] 15~20min，乙腈濃度由10%增至13%;
[0020] 20~25min，乙腈濃度由13%增至16%;
[0021] 25~28min，乙腈濃度由16%增至20%;
[0022] 28~36min，乙腈濃度由20增至22%;
[0023] 36~4〇1^11，乙腈濃度為22%;
[0024] 40~43min，乙腈濃度由22 %增至27 % ;
[0025] 43~51min，乙腈濃度由27%增至40% ;
[0026] 51~60min，乙腈濃度由40%增至50%;
[0027] 60~70min，乙臆濃度由50%增至75% ;
[0028] 70~75min，乙腈濃度由75%增至90%;
[0029] 75~8〇1^11，乙腈濃度為90%。
[0030] 進(jìn)一步的，步驟B所述供試品溶液的制備方法為：
[0031] 取0.5~1.5g待測加味逍遙丸，精密稱定，精密加入無水甲醇25~75mL，稱定重量， 超聲處理20~40min，放冷，以無水甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，離心，取上清液，經(jīng)0.22~ 0.45mi微孔濾膜濾過，得到所述供試品溶液。
[0032] 進(jìn)一步的，步驟B所述供試品溶液的制備方法為：
[0033]稱取過40目篩的待測加味逍遙丸粉末約l.Og，精密稱定，置100mL磨口具塞錐形瓶 中，精密加入無水甲醇50mL，密塞，稱定重量，以功率200W、頻率80kHz超聲處理30min，冷卻， 再稱定重量，以無水甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，以12000r/min轉(zhuǎn)速進(jìn)行離心，取上清液，經(jīng) 0.45mi微孔濾膜濾過，得到所述供試品溶液。
[0034] 進(jìn)一步的，步驟A所述對照品溶液的制備方法為：
[0035] 分別稱取梔子苷、甘草苷、丹皮酚、芍藥苷、甘草酸、阿魏酸對照品適量，加無水甲 醇溶解并定容，制成質(zhì)量濃度分別為梔子苷0.6 mg/mL、甘草苷0.75mg/mL、丹皮酸0.8mg/ mL、茍藥苷1.2mg/mL，甘草酸0.8mg/mL、阿魏酸0.25mg/mL的混合對照品儲備液，分別精密吸 取2、4、6、8、12mL儲備液置于25mL容量瓶中，流動相定容，制得系列濃度的混合對照品溶液。 [0036]本發(fā)明的有益效果主要有:本發(fā)明采用高效液相色譜法(HPLC)在同一色譜條件下 同時(shí)測定加味逍遙丸中梔子苷，甘草苷，丹皮酚，芍藥苷，甘草酸，阿魏酸6種成分的含量，采 用梯度洗脫，在80min內(nèi)完成一次色譜分析，平均加樣回收率99.13%~100.25%，RSD值均〈 2.0 %。該方法操作簡單、靈敏度高、重現(xiàn)性好、檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠，為加味逍遙丸的質(zhì)量評 價(jià)提供了一種行之有效的檢測方法，可用于加味逍遙丸的質(zhì)量控制、質(zhì)量評價(jià)，為質(zhì)量評價(jià) 和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提高提供了技術(shù)支撐。
【附圖說明】
[0037] 圖1各檢測波長下各待測成分的紫外光譜圖:A-梔子苷紫外圖譜;B-甘草苷紫外圖 譜;C-丹皮酚紫外圖譜;D-芍藥苷紫外圖譜;E-甘草酸紫外圖譜;F-阿魏酸紫外圖譜。
【具體實(shí)施方式】
[0038] 為了更直觀更清楚地描述本發(fā)明技術(shù)方案，以及幫助理解本發(fā)明對現(xiàn)有技術(shù)的貢 獻(xiàn)之處，以下結(jié)合附圖和實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)地說明。
[0039] 實(shí)施例1
[0040] 本實(shí)施例為一種加味逍遙丸的多成分含量測定方法，所選用的儀器與材料如下：
[0041] 1260型高效液相色譜儀（包括DAD檢測器、四元低壓梯度栗、在線真空脫氣機(jī)）， ChemStation工作站(美國Agilent公司），AUW220D型分析天平(十萬分之一，日本島津精密 儀器分析公司），KQ-250DE型超聲波清洗器(江蘇昆山超聲波儀器有限公司）
[0042] 梔子苷(批號:MUST-15022411，純度 98.13%);阿魏酸(批號:]\11^1'-14102214，純度 99.36%);甘草苷（批號:]\11]51'-14100910，純度99.83%) ;芍藥苷（批號:]\11]51'-15060112，純 度99.42% );甘草酸（批號：MUST-14091708,純度98.69% );丹皮酚（批號：MUST-15020401， 純度99.30%);上述對照品均購于成都曼斯特生物科技有限公司；乙腈(批號：20150833,色 譜純）、甲醇(批號：20150322，色譜純）由山東禹王實(shí)業(yè)有限公司提供;水為市售娃哈哈純凈 水，其它試劑均為分析純；
[0043] 加味逍遙丸（批號：20150644,20150811,20150810，規(guī)格：6g/袋）由北京同仁堂制 藥股份有限公司提供;加味逍遙丸(批號= 1106208,1105122,1105803，規(guī)格:6g/袋）由天津 天士力(遼寧)制藥有限責(zé)任公司提供。
[0044] 具體執(zhí)行步驟以下：
[0045] A.制備對照品溶液:分別稱取梔子苷、甘草苷、丹皮酚、芍藥苷、甘草酸、阿魏酸對 照品適量，加無水甲醇溶解并定容，制成質(zhì)量濃度分別為梔子苷0.6mg/mL、甘草苷0.75mg/ mL、丹皮酸0 ? 8mg/mL、茍藥苷1 ? 2mg/mL，甘草酸0 ? 8mg/mL、阿魏酸0 ? 2 5mg/mL的混合對照品儲 備液，分別精密吸取2、4、6、8、12mL儲備液置于25mL容量瓶中，流動相定容，制得系列濃度的 混合對照品溶液。
[0046] B.制備供試品溶液:稱取過40目篩的待測加味逍遙丸粉末約1.0g，精密稱定，置 100mL磨口具塞錐形瓶中，精密加入無水甲醇50mL，密塞，稱定重量，以功率200W、頻率80kHz 超聲處理30min，冷卻，再稱定重量，以無水甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，以12000r/min轉(zhuǎn)速 進(jìn)行離心，取上清液，經(jīng)0.45mi微孔濾膜濾過，得到所述供試品溶液。
[0047] C.用高效液相色譜儀進(jìn)行檢測。色譜條件:色譜柱為Plastisil ODS C18、流動相為 乙腈一 0.2%磷酸水;流速為1.0mL/min;柱溫37°C;進(jìn)樣量10此;檢測器為二極管陣列檢測 器，DAD參比波長為380nm所述檢測波長為23〇11111、23811111、25411111、27411111、32811111，對應(yīng)的待測成 分為：230nm為茍藥苷，238nm為梔子苷、254nm為甘草酸，274nm為丹皮酸與甘草苷，328nm為 阿魏酸;檢測時(shí)用梯度洗脫，梯度洗脫順序：
[0048] 0~lOmin，乙腈濃度由5%增至8%;
[0049] 10~15min，乙腈濃度由8%增至10%;
[0050] 15~20min，乙腈濃度由10%增至13%;
[0051 ] 20~25min，乙腈濃度由13%增至16%;
[0052] 25~28min，乙腈濃度由16%增至20%;
[0053] 28~36min，乙臆濃度由20增至22% ;
[0054] 36~40min，乙腈濃度為22 % ;
[0055] 40~43min，乙腈濃度由22%增至27% ;
[0056] 43~51min，乙腈濃度由27%增至40% ;
[0057] 51~60min，乙腈濃度由40 %增至50 % ;
[0058] 60~70min，乙臆濃度由50%增至75% ;
[0059] 70~75min，乙腈濃度由75%增至90% ;
[0060] 75~8〇1^11，乙腈濃度為90%。
[0061 ] 色譜圖如圖1所示。
[0062] D.計(jì)算所述供試品溶液中6種成分的含量：以外標(biāo)法計(jì)算所述供試品溶液中所述 梔子苷、甘草苷、丹皮酚、芍藥苷、甘草酸、阿魏酸6種成分的含量。計(jì)算結(jié)果如1所示。
[0063] 表1不同批次加味逍遙丸中6種待測組分的含量測定結(jié)果(i:±?，n = 3)
[0064]
[0066] 實(shí)施例2
[0067] 進(jìn)行穩(wěn)定性試驗(yàn)，取同一批(批號為:20150811)供試品溶液，于室溫放置0,2,4,6， 8，12h，精密吸取10此，按實(shí)施例1所述色譜條件進(jìn)樣分析，計(jì)算各色譜峰面積的RSD值，結(jié)果 梔子苷、甘草苷、丹皮酚、芍藥苷、甘草酸、阿魏酸各組分峰面積的RSD值均小于1.5%，表明 供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定性良好。
[0068] 實(shí)施例3
[0069] 進(jìn)行重復(fù)性試驗(yàn)，如實(shí)施例1所述一種加味逍遙丸的多成分含量測定方法，取同一 批(批號為= 20150811)供試品溶液，平行制備5份供試品溶液，測定各組分峰面積RSD值，結(jié) 果梔子苷、甘草苷、丹皮酚、芍藥苷、甘草酸、阿魏酸峰面積的RSD值均小于1.4%，表明方法 重復(fù)性良好。
[0070] 實(shí)施例4
[0071]進(jìn)行加樣回收率試驗(yàn)，精密稱取已知含量的加味逍遙丸樣品（批號為:20150644)6 份，每份〇.5g，置于圓底燒瓶中，分別加入各對照品適量，按步驟2方法制備供試品溶液，定 容至50mL，按實(shí)施例1所述色譜條件進(jìn)行測定，并分別計(jì)算各成分的回收率，結(jié)果見表2。
[0072]表2加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果
[0073]

[0075]雖然，上文中已經(jīng)用一般性說明及具體實(shí)施例對本發(fā)明作了詳盡的描述，但在本 發(fā)明基礎(chǔ)上，可以對其構(gòu)思作一些修改或改進(jìn)，這對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。因 此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改或改進(jìn)，均落入本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種加味逍遙丸的多成分含量測定方法，其特征是執(zhí)行以下步驟： A. 制備對照品溶液:分別稱取一定量的梔子苷、甘草苷、丹皮酚、芍藥苷、甘草酸、阿魏 酸對照品，用溶劑將其溶解，得到一定濃度的對照品儲備液;分別精密量一定量所述對照品 儲備液加溶劑稀釋，得對照品溶液； B. 制備供試品溶液:將待測加味逍遙丸溶解于溶劑中，濾過，得到一定濃度的供試品溶 液； C. 用高效液相色譜儀進(jìn)行檢測，其中所述高效液相色譜儀包括DAD檢測器，色譜條件： 色譜柱為Plastisil ODS Ci8、乙腈一磷酸水為流動相、流速為0.8mL/min~1.2mL/min、柱溫 為35 °C~39 °C、檢測波長為200nm~400nm、進(jìn)樣量5-20yL; D. 計(jì)算所述供試品溶液中6種成分的含量：以外標(biāo)法計(jì)算所述供試品溶液中所述梔子 苷、甘草苷、丹皮酚、芍藥苷、甘草酸、阿魏酸6種成分的含量。2. 如權(quán)利要求1 一種加味逍遙丸的多成分含量測定方法，其特征是:所述溶劑為無水甲 醇。3. 如權(quán)利要求2-種加味逍遙丸的多成分含量測定方法，其特征是:所述檢測器為二極 管陣列檢測器，DAD參比波長為380nm所述檢測波長為230nm、238nm、254nm、274nm、328nmJt 應(yīng)的待測成分為:230nm為芍藥苷，238nm為梔子苷、254nm為甘草酸，274nm為丹皮酚與甘草 苷，328nm為阿魏酸。4. 如權(quán)利要求1 一4任意一項(xiàng)所述的一種加味逍遙丸的多成分含量測定方法，其特征 是:所述流動相為乙臆一0.1~0.2%磷酸水。5. 如權(quán)利要求1 一4任意一項(xiàng)所述的一種加味逍遙丸的多成分含量測定方法，其特征 是:所述流動相為乙腈一0.2%磷酸水;所述流速為1 .OmL/min;所述柱溫37°C ;所述進(jìn)樣量 10yL〇6. 如權(quán)利要求1 一4任意一項(xiàng)所述的一種加味逍遙丸的多成分含量測定方法，其特征 是:所述高效液相色譜儀進(jìn)行檢測時(shí)用梯度洗脫，梯度洗脫順序： 0~1〇111；[11，乙腈濃度由5%增至8%; 10~15111；[11，乙腈濃度由8%增至10%; 15~2〇111；[11，乙腈濃度由10%增至13%; 20~25111；[11，乙腈濃度由13%增至16%; 25~28min，乙腈濃度由16 %增至20 %; 28~36min，乙腈濃度由20增至22%; 36~40min，乙腈濃度為22 % ; 40~43min，乙腈濃度由22 %增至27 %; 43~5lmin，乙腈濃度由27 %增至40 % ; 51~6〇111；[11，乙腈濃度由40%增至50%; 60~7〇111；[11，乙腈濃度由50%增至75%; 70~75min，乙腈濃度由75 %增至90 % ; 75~80min，乙腈濃度為90 %。7. 如權(quán)利要求1所述的一種加味逍遙丸的多成分含量測定方法，其特征是：步驟B所述 供試品溶液的制備方法為： 取0.5~1.5g待測加味逍遙丸，精密稱定，精密加入無水甲醇25~75mL，稱定重量，超聲 處理20~40min，放冷，以無水甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勾，離心，取上清液，經(jīng)0.22~0.45μηι 微孔濾膜濾過，得到所述供試品溶液。8. 如權(quán)利要求1所述的一種加味逍遙丸的多成分含量測定方法，其特征是：步驟Β所述 供試品溶液的制備方法為： 稱取過40目篩的待測加味逍遙丸粉末約1.0g，精密稱定，置100mL磨口具塞錐形瓶中， 精密加入無水甲醇50mL，密塞，稱定重量，以功率200W、頻率80kHz超聲處理30min，冷卻，再 稱定重量，以無水甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，以12000r/min轉(zhuǎn)速進(jìn)行離心，取上清液，經(jīng) 0.45μπι微孔濾膜濾過，得到所述供試品溶液。9. 如權(quán)利要求1所述的一種加味逍遙丸的多成分含量測定方法，其特征是：步驟Α所述 對照品溶液的制備方法為： 分別稱取梔子苷、甘草苷、丹皮酚、芍藥苷、甘草酸、阿魏酸對照品適量，加無水甲醇溶 解并定容，制成質(zhì)量濃度分別為梔子苷〇. 6mg/mL、甘草苷0.75mg/mL、丹皮酸0.8mg/mL、茍藥 苷1 · 2mg/mL，甘草酸0 · 8mg/mL、阿魏酸0 · 25mg/mL的混合對照品儲備液，分別精密吸取2、4、 6、8、12mL儲備液置于25mL容量瓶中，流動相定容，制得系列濃度的混合對照品溶液。
【文檔編號】G01N30/88GK106053702SQ201610614520
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年7月29日
【發(fā)明人】陳帥, 王慧竹, 薛健飛, 王肅樊
【申請人】吉林化工學(xué)院