一種基于XBP1和XBP1s表達水平的檢測胃癌組織的試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種基于XBP1和XBP1s表達水平的檢測胃癌組織的試劑盒，包含以下試劑：用于檢測XBP1和XBP1s的蛋白水平的蛋白質(zhì)檢測試劑組和用于檢測XBP1和XBP1s的mRNA水平的核酸檢測試劑組；所述蛋白質(zhì)檢測試劑組包含抗XBP1抗體；所述核酸檢測試劑組包含檢測引物組；所述XBP1的蛋白質(zhì)序列如SEQ ID NO:1所示，所述XBP1的cDNA編碼序列如SEQ ID NO:2所示；所述XBP1s的蛋白質(zhì)序列如SEQ ID NO:3所示，所述XBP1s的cDNA編碼序列如SEQ ID NO:4所示。使用本發(fā)明，可有效地甄別正常組織和胃癌組織，既可用于科研工作中，也有助于胃癌早期診斷。
【專利說明】
一種基于XBP1和XBP1 s表達水平的檢測胃癌組織的試劑盒
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及腫瘤檢測領(lǐng)域，更特別地，涉及一種檢測胃癌組織的試劑盒。
【背景技術(shù)】
[0002] 我國是胃癌高發(fā)國家，其發(fā)病率和死亡率分別高居全部惡性腫瘤的第3位和第2 位。由于胃癌起病隱匿，早期多無明顯癥狀，不易覺察，使得胃癌的早期發(fā)現(xiàn)非常困難。特別 是在我國，超過80%的胃癌在確診時就已處于進展期，預后很差，嚴重威脅著人們的生命健 康。
[0003] 目前，除了影像學檢查和內(nèi)鏡檢查之外，生物大分子腫瘤標志物的檢測也可用于 胃癌的診斷。臨床上常用的生物大分子腫瘤標志物如癌胚抗原(CEA)、糖蛋白類抗原(CA19-9、CA125)能提高體內(nèi)惡性腫瘤特別是胃腸道惡性腫瘤的檢出率，但這些標志物并不能做到 早期高靈敏度、高特異性地診斷胃癌。由于體內(nèi)各器官分化來源、腫瘤的成瘤原因以及腫瘤 分泌的腫瘤因子均不相同，因此要特異性地、高靈敏地早期檢測出某一種特定腫瘤，仍是一 項很龐大的課題。
[0004] 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是一種重要的真核細胞器，主要負責可溶性蛋白和膜蛋白的生物合成、折 疊以及修飾，同時也是細胞內(nèi)的動態(tài)Ca2+儲存庫。由于病毒感染、藥物損傷等原因引起的內(nèi) 質(zhì)網(wǎng)中出現(xiàn)錯誤折疊、或未折疊蛋白在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔內(nèi)聚集以及Ca 2+平衡紊亂的狀態(tài)稱為內(nèi)質(zhì) 網(wǎng)應激(endoplasmic reticulum stress，ERS)。為了確保蛋白折疊的正確性以及預防非折 疊或者錯誤折疊蛋白在細胞內(nèi)的聚集，抵抗ERS的不利作用，細胞初期呈現(xiàn)出保護性的未折 疊蛋白反應(Unfold Protein Response，UPR)，其改變細胞的轉(zhuǎn)錄和翻譯程序以緩解ERS， 因此一定程度的ERS能激活細胞保護性適應機制。而嚴重的應激損傷內(nèi)質(zhì)網(wǎng)功能，則引發(fā)細 胞的自發(fā)性死亡程序，最終誘導細胞凋亡。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激發(fā)生后可通過IRE1、PERK和ATF6三個 重要蛋白誘導三種不同的信號途徑來介導UPR。而正確的蛋白折疊和轉(zhuǎn)錄后修飾需要大量 的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分子伴侶蛋白的參與，比如GRP78、f丐連接蛋白（calnexin)、f丐網(wǎng)蛋白 (calreticulin，CALR)和蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶(protein disulfide isomerases，PDI)等。
[0005] X盒連接蛋白l(X-box binding protein-1，XBP1)，以活化形式XBPls來激活目的 基因的表達，其功能非常龐雜。它一方面促進細胞適應環(huán)境在缺氧條件下生存和增殖，另一 方面誘導蛋白折疊、ER相關(guān)蛋白降解(ERAD)、蛋白易位和蛋白分泌來減輕ERS。在一些研究 中也發(fā)現(xiàn)，ERS激活有助于對抗腫瘤。特別是對抗腸道腫瘤的發(fā)生方面，XBP1具有保護作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 發(fā)明人在研究胃癌的過程中，發(fā)現(xiàn)胃癌患者的胃癌組織樣本中XBP1的表達受到顯 著抑制。在該發(fā)現(xiàn)的基礎(chǔ)上，本發(fā)明提供了一種基于XBP1和XBPls表達水平的檢測胃癌組織 的試劑盒，包含以下試劑：用于檢測XBP1和XBPls的蛋白水平的蛋白質(zhì)檢測試劑組和用于檢 測XBP1和XBP1 s的mRNA水平的核酸檢測試劑組；
[0007] 所述蛋白質(zhì)檢測試劑組包含抗XBP1抗體;所述核酸檢測試劑組包含檢測引物組；
[0008] 所述XBP1的蛋白質(zhì)序列如SEQ ID N0:1所示，所述XBP1的cDNA編碼序列如SEQ ID NO: 2所示；
[0009] 所述XBPls的蛋白質(zhì)序列如SEQ ID N0:3所示，所述XBPls的cDNA編碼序列如SEQ ID NO:4所示。
[0010] 進一步地，所述蛋白質(zhì)檢測試劑組中還包含針對所述抗XBP1抗體的具有顯示標志 物的二抗、與所述顯示標志物對應的顯示系統(tǒng)。所述顯示標志物可為辣根過氧化物酶，所述 顯示系統(tǒng)可為DAB顯示系統(tǒng)或ECL顯示系統(tǒng)。
[0011] 進一步地，所述蛋白質(zhì)檢測試劑組中還包含上樣量標度，例如β-actin，以保證上 樣量相同。
[0012] 進一步地，所述檢測引物對由如SEQ ID N0:5所示序列的引物1、如SEQ ID N0:6所 示序列的引物2、如SEQ ID NO:7所示序列的引物3和如SEQ ID NO:8所示序列的引物4組成。 其中，，所述引物1與所述引物2用于檢測所述XBP1的mRNA水平，所述引物3和所述引物4用于 檢測所述XBP1 s的mRNA水平。
[0013] 進一步地，所述核酸檢測試劑組還包含逆轉(zhuǎn)錄酶及其緩沖液、熒光探針、dNTP、RNA 酶抑制劑。
[0014] 使用本發(fā)明，可有效地甄別正常組織和胃癌組織，既可用于科研工作中，也有助于 胃癌早期診斷。
【附圖說明】
[0015] 圖1為使用本發(fā)明的試劑盒檢測正常組織和胃癌組織中的XBP1以及XBPls蛋白含 量的Westren blot圖；
[0016] 圖2為使用本發(fā)明的試劑盒檢測正常組織和胃癌組織中的XBP1 mRNA水平的統(tǒng)計 圖。
[0017]圖3為使用本發(fā)明的試劑盒檢測正常組織和胃癌組織中的XBPls mRNA水平的統(tǒng)計 圖。
【具體實施方式】
[0018]以下結(jié)合實施例和附圖對本發(fā)明的原理和特征進行描述，所舉實例只用于解釋本 發(fā)明，并非用于限定本發(fā)明的范圍。
[0019] 發(fā)明人在研究胃癌的過程中對ESR蛋白例如CALR、PDIA3、H)IA6和GRP94進行了檢 測，發(fā)現(xiàn)在胃癌組織中以上蛋白質(zhì)的表達均呈不同程度的升高，通過進而研究ERS相關(guān)蛋白 的信號通路上的因子，發(fā)明人意為地發(fā)現(xiàn)，XPB1和XPBls的mRNA水平和蛋白質(zhì)水平在胃癌組 織中都顯示出顯著降低，這提示，XPB1和XPBls的表達水平可用于鑒別胃癌組織和正常胃部 組織。
[0020] 實施例1基于XBP1和XPBls表達水平的檢測胃癌組織的試劑盒
[0021] 本實施例的試劑盒包含以下試劑：
[0022] 1)用于檢測XBP 1和XPB1 s的蛋白水平的蛋白質(zhì)檢測試劑組，包含抗XBP 1抗體 (abcam3715，Abcam)、抗XPBls抗體（）、辣根過氧化物酶標記的二抗、DAB顯示系統(tǒng)、抗β-actin抗體；
[0023] 2)用于檢測XBP1和XPBls mRNA水平的核酸檢測試劑組，包含如SEQ ID N0:5所示 序列的引物1、如SEQ ID NO :6所示序列的引物2、如SEQ ID NO :7所示序列的引物3和如SEQ ID N0:8所示序列的引物4,以及逆轉(zhuǎn)錄酶M-MLV及其緩沖液、熒光探針SYBR-Green I、dNTP、 RNA酶抑制劑。
[0024] 實施例2Western blot測定XBP1和XPBls的表達
[0025]從正常組織和胃癌組織中提取總蛋白，進行SDS-PAGE電泳。使用蛋白質(zhì)檢測試劑 組，按照常規(guī)的Western blot法，對總蛋白中的XBP1和XPBls分別用抗XBP1抗體和抗XPBls 抗體進行染色，結(jié)果如圖1所示，胃癌組織(T泳道）中XBP1和XPBls的蛋白含量顯著低于正常 組織(N泳道）。
[0026] 實施例3
[0027]從正常組織和胃癌組織中提取總RNA，使用核酸檢測試劑組，按照常規(guī)的一步式 RT-PCR法，用引物1和引物2檢測總RNA中的XBP1 mRNA的含量，用引物3和引物4檢測總RNA中 的XBP1 s mRNA的含量。結(jié)果如圖2和圖3所示，胃癌組織中XBP1和XPB1 s的mRNA水平遠低于正 常組織。
[0028]以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和 原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。












【主權(quán)項】
1. 一種基于XBP1和XBPls表達水平的檢測胃癌組織的試劑盒，其特征在于，包含以下試 劑：用于檢測XBP1和XBP1 s的蛋白水平的蛋白質(zhì)檢測試劑組和用于檢測XBP1和XBP1 s的mRNA 水平的核酸檢測試劑組； 所述蛋白質(zhì)檢測試劑組包含抗XBP1抗體;所述核酸檢測試劑組包含檢測引物組； 所述XBP1的蛋白質(zhì)序列如SEQ ID N0:1所示，所述XBP1的cDNA編碼序列如SEQ ID N0:2 所示； 所述XBPls的蛋白質(zhì)序列如SEQ ID N0:3所示，所述XBPls的cDNA編碼序列如SEQ ID NO: 4所示。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測胃癌組織的試劑盒，其特征在于，所述蛋白質(zhì)檢測試劑組 中還包含針對所述抗XBP1抗體的具有顯示標志物的二抗、與所述顯示標志物對應的顯示系 統(tǒng)。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測胃癌組織的試劑盒，其特征在于，所述顯示標志物為辣根 過氧化物酶。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測胃癌組織的試劑盒，其特征在于，所述顯示系統(tǒng)為DAB顯 示系統(tǒng)或ECL顯示系統(tǒng)。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測胃癌組織的試劑盒，其特征在于，所述蛋白質(zhì)檢測試劑組 中還包含上樣量標度。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的檢測胃癌組織的試劑盒，其特征在于，所述上樣量標度為抗β-actin抗體。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測胃癌組織的試劑盒，其特征在于，所述檢測引物組由如 SEQ ID NO:5所示序列的引物1、如SEQ ID NO:6所示序列的引物2、如SEQ ID NO:7所示序列 的引物3和如SEQ ID NO:8所示序列的引物4組成。8. 根據(jù)權(quán)利要求1-7中任一項所述的檢測胃癌組織的試劑盒，其特征在于，所述核酸檢 測試劑組還包含逆轉(zhuǎn)錄酶及其緩沖液、熒光探針、dNTP、RNA酶抑制劑。
【文檔編號】G01N33/574GK106093393SQ201610387223
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年6月2日 公開號201610387223.7, CN 106093393 A, CN 106093393A, CN 201610387223, CN-A-106093393, CN106093393 A, CN106093393A, CN201610387223, CN201610387223.7
【發(fā)明人】田梗, 王濱, 姜文國, 米佳, 李旭日, 楊春華, 劉芳
【申請人】濱州醫(yī)學院