一種測(cè)定胱抑素c的試劑盒及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種測(cè)定胱抑素C的試劑盒及其制備方法，包括彼此獨(dú)立的試劑R1和試劑R2雙液體組分組成試劑盒：試劑R1：緩沖液、無機(jī)鹽離子、加速劑、穩(wěn)定劑、防腐劑，試劑R2：緩沖液、穩(wěn)定劑、助懸劑、表面活性劑、聚氧丙烯聚氧乙烯共聚物、防腐劑、膠乳包被抗人胱抑素C抗體，制備方法為：按照組分含量配制好試劑；將待測(cè)樣本與試劑R1和試劑R2混合，使其充分反應(yīng)；用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定反應(yīng)后的吸光度差值；根據(jù)吸光度變化值計(jì)算出樣本中的胱抑素C的濃度。本發(fā)明具有準(zhǔn)確度高等優(yōu)點(diǎn)。
【專利說明】
一種測(cè)定胱抑素 C的試劑盒及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)及生物化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體來說是一種測(cè)定胱抑素 C的試劑盒及 其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 胱抑素 C(Cys-C)，是一種半胱氨酸蛋白酶抑制劑，也被稱為γ -微量蛋白及γ -后 球蛋白，廣泛存在于各種組織的有核細(xì)胞和體液中，是一種低分子量、堿性非糖化蛋白質(zhì)， 分子量為13.3KD，由122個(gè)氨基酸殘基組成，可由機(jī)體所有有核細(xì)胞產(chǎn)生，產(chǎn)生率恒定，循環(huán) 中的胱抑素 C僅經(jīng)腎小球?yàn)V過而被清除，是一種反映腎小球?yàn)V過率變化的內(nèi)源性標(biāo)志物，并 在近曲小管重吸收，但重吸收后被完全代謝分解，不返回血液，因此，其血中濃度由腎小球 濾過決定，而不依賴任何外來因素，如性別、年齡、飲食的影響，是一種反映腎小球?yàn)V過率變 化的理想同源性標(biāo)志物。
[0003] 正常情況下，胱抑素 C(Cys-C)在血清和血漿中的濃度為0.51_1.09mg/L，當(dāng)腎功能 受損時(shí)，胱抑素 C(Cys-C)在血液中的濃度隨腎小球?yàn)V過率變化而變化，腎衰時(shí)，腎小球?yàn)V 過率下降，Cys-C在血液中濃度可增加10多倍;若腎小球?yàn)V過率正常，而腎小管功能失常時(shí)， 會(huì)阻礙Cys-C在腎小管吸收并迅速分解，使尿中的濃度增加100多倍。
[0004] 目前臨床檢測(cè)胱抑素 C的主要方法有酶聯(lián)免疫吸附法、膠體金法，酶聯(lián)免疫吸附 法操作復(fù)雜、耗時(shí)長(zhǎng)，且對(duì)操作者有一定的專業(yè)技能要求，且無法定量檢測(cè)，膠體金法只能 定性檢測(cè)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是為了克服操作復(fù)雜且不能定量檢測(cè)的缺陷，而提供 一種測(cè)定胱抑素 C的試劑盒及其制備方法。
[0006] 本發(fā)明解決上述技術(shù)問題提供的技術(shù)方案是:本發(fā)明公開了一種測(cè)定胱抑素 C的 試劑盒，包括彼此獨(dú)立的試劑R1和試劑R2雙液體組分組成試劑盒，包括的成分及相應(yīng)含量 為： 試劑R1: 緩沖液 40~180 mmol/L 無機(jī)鹽離子 5CK100 mmol/L 加速劑 5~20 g/L 穩(wěn)定劑 5~15 g/L 防腐劑 0.4~1.2 g/L 其溶劑為純化水 試劑R2: 緩沖液 40~180 mmol/L 穩(wěn)定劑 10~30 g/L 助懸劑 5~35 mmol/L 表面活性劑 0.5~2.0 mL/L 聚氧丙烯聚氧乙烯共聚物 0.2~1.2 g/L 防腐劑 0.4~1.2 g/L 膠乳包被抗人胱抑素 C抗體0.5~3.0 g/L 其溶劑為純化水。
[0007] 作為優(yōu)選，本發(fā)明公開了一種測(cè)定胱抑素 C的試劑盒，包括彼此獨(dú)立的試劑R1和試 劑R2雙液體組分組成試劑盒，包括的成分及相應(yīng)含量為： 試劑R1: 緩沖液 110 mmol/L 無機(jī)鹽離子 70 mmol/L 加速劑 12 g/L 穩(wěn)定劑 10 g/L 防腐劑 0.8 g/L 其溶劑為純化水 試劑R2: 緩沖液 110 mmol/L 穩(wěn)定劑 20 g/L 助懸劑 20 mmol/L 表面活性劑 1.5 mL/L 聚氧丙烯聚氧乙烯共聚物 0.7 g/L 防腐劑 0.8 g/L 膠乳包被抗人胱抑素 C抗體2.0 g/L 其溶劑為純化水。
[0008] 作為優(yōu)選，所述的試劑R1中，所述的緩沖液采用MES緩沖液、MOPS緩沖液、M0PS0緩 沖液、HEPES緩沖液、Tri s緩沖液、磷酸鹽緩沖液中的一種或多種的組合，所述的無機(jī)鹽離子 采用氯化鈉、氯化鉀、氯化鎂、硫酸鎂中的一種或多種的組合，所述的加速劑采用聚乙二醇-2000、聚乙二醇-6000、聚乙二醇-8000、聚乙烯吡咯烷酮中的一種或多種的組合，所述的穩(wěn) 定劑采用牛血清白蛋白、甘露糖、山梨醇、乙二胺四乙酸二鈉、果糖中的一種或多種的組合， 所述的防腐劑采用苯酚、苯甲酸鈉、疊氮鈉中的一種或多種的組合。
[0009] 作為優(yōu)選，所述的試劑R2中，所述的緩沖液采用MES緩沖液、MOPS緩沖液、M0PS0緩 沖液、HEPES緩沖液、Tris緩沖液、磷酸鹽緩沖液中的一種或多種的組合，所述的穩(wěn)定劑采用 牛血清白蛋白、甘露糖、山梨醇、乙二胺四乙酸二鈉、果糖中的一種或多種的組合，所述的助 懸劑采用阿拉伯膠、海藻酸鈉、膠體二氧化硅、甘油中的一種或多種組合而成，所述的表面 活性劑采用曲拉通X-100,所述的防腐劑采用苯酚、苯甲酸鈉、疊氮鈉中的一種或多種的組 合。 作為優(yōu)選，所述的試劑R2中，所述的膠乳包被抗人胱抑素 C抗體的制備方法為：用50 mmol/L的MES緩沖液將粒徑為30~200nm的聚苯乙烯微球稀釋成為所含的聚苯乙烯微球的質(zhì) 量濃度為1.5%的溶液，然后每毫升溶液中加入0.8 mg的1 -乙基-3-( 3-二甲基胺丙基)碳化 二亞胺鹽酸鹽，在20°C~37°C的條件下反應(yīng)2小時(shí)，使用離心機(jī)，在20000 rpm/min的轉(zhuǎn)速下 離心30分鐘，去上清，然后將沉淀懸浮于50 mmol/L的MES緩沖液中，超聲分散，再使用離心 機(jī)，在20000 rpm/min的轉(zhuǎn)速下離心30分鐘，去上清，再將沉淀懸浮于50 mmol/L的MES緩沖 液中，使得溶液中的聚苯乙烯微球的最終質(zhì)量濃度為3.0%，超聲分散，然后邊分散邊加入等 體積的含8mg/ml的抗人胱抑素 C抗體的MES緩沖液，混合攪拌，在20°〇37 °C的條件下反應(yīng)2 小時(shí)，直至溶液中的聚苯乙烯微球的最終質(zhì)量濃度為1.5%為止，加入牛血清白蛋白，使得牛 血清白蛋白的最終濃度為10 g/L為止，在4°C條件下封閉12~18小時(shí)，即可制備得到膠乳包 被抗人胱抑素 C抗體。
[0010]作為優(yōu)選，所述的抗人胱抑素 C抗體為含有能與人胱抑素 C特異性結(jié)合的Fab功能 部位的完整抗體或抗體片段。
[0011] 作為優(yōu)選，本發(fā)明還公開了上述測(cè)定胱抑素 C的試劑盒的制備方法和使用方法，包 括以下步驟： (a) 按照下列組分含量配制好試劑： 本發(fā)明公開了一種測(cè)定胱抑素 C的試劑盒，包括彼此獨(dú)立的試劑R1和試劑R2雙液體組 分組成試劑盒，包括的成分及相應(yīng)含量為： 試劑R1: 緩沖液 40~180 mmol/L 無機(jī)鹽離子 50~100 mmol/L 加速劑 5~20 g/L 穩(wěn)定劑 5~15 g/L 防腐劑 0.4~1.2 g/L 其溶劑為純化水 試劑R2: 緩沖液 40~180 mmol/L 穩(wěn)定劑 10~30 g/L 助懸劑 5~35 mmol/L 表面活性劑 0.5~2.0 mL/L 聚氧丙烯聚氧乙烯共聚物 0.2~1.2 g/L 防腐劑 0.4~1.2 g/L 膠乳包被抗人胱抑素 C抗體0.5~3.0 g/L 其溶劑為純化水； (b) 將待測(cè)樣本與試劑R1和試劑R2混合，使其充分反應(yīng)； (c) 用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定反應(yīng)后的吸光度差值； (d) 根據(jù)吸光度變化值計(jì)算出樣本中的胱抑素 C的濃度。
[0012] 作為優(yōu)選，步驟(b)中，所述的試劑R1與試劑R2的體積比為9:2。
[0013] 作為優(yōu)選，步驟(b)中，所述的待測(cè)樣本與試劑R1和試劑R2的總體積的體積比在1: 5到1:100之間。
[0014] 本發(fā)明的檢測(cè)原理是:樣品中胱抑素 C可與試劑中相應(yīng)的特異性抗-Cys-C抗體結(jié) 合形成抗原-抗體復(fù)合物，產(chǎn)生一定池度，該池度高低在一定抗體存在時(shí)與抗原的含量成正 比，在一定波長(zhǎng)下測(cè)定濁度并通過多點(diǎn)定標(biāo)曲線可進(jìn)行胱抑素 C的定量測(cè)定。
式中：△ At以空白管吸光度作對(duì)照的樣品管吸光度值 ΔAs以空白管吸光度作對(duì)照的校準(zhǔn)管吸光度值 Cs校準(zhǔn)液中Cys-C的濃度 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益優(yōu)點(diǎn)：本發(fā)明在試劑R2中添加了甘油作為助懸 劑，在表面活性劑的作用下，使得膠乳包被抗人胱抑素 C抗體可均勻懸浮于試劑R2中，同時(shí) 在試劑R2中添加了聚氧丙烯聚氧乙烯共聚物，該共聚物可使膠乳顆粒之間不相互聚集，大 大提高了試劑R2的穩(wěn)定性和抗體的效價(jià)，在加入樣本后參與反應(yīng)時(shí)，在試劑R1中加速劑的 作用下，可迅速與膠乳包被抗人胱抑素 C抗體發(fā)生反應(yīng)，因膠乳包被抗人胱抑素 C抗體懸浮 分散均勻，即使在較低的濃度下，也可迅速發(fā)生反應(yīng)，使得試劑的檢測(cè)靈敏度也進(jìn)一步提 高，檢測(cè)的準(zhǔn)確度也就大大提高，而且操作方便。
【具體實(shí)施方式】
[0016]以下結(jié)合具體實(shí)施例進(jìn)一步說明，但本發(fā)明并不僅限于這些實(shí)施例。
[0017] 實(shí)施例1 本發(fā)明的試劑盒包括彼此獨(dú)立的試劑R1和試劑R2雙液體組分，其中 試劑R1: Tris緩沖液 110 mmol/L 氯化鉀 70 mmol/L 聚乙二醇-6000 12 g/L 牛血清白蛋白 10 g/L 苯酚 0.8 g/L 其溶劑為純化水 試劑R2: MES緩沖液 110 mmol/L 甘露糖 20 g/L 海藻酸鈉 20 mmol/L 曲拉通X-100 1.5 mL/L 聚氧丙烯聚氧乙烯共聚物 0.7 g/L 苯酚 0.8 g/L 膠乳包被抗人胱抑素 C抗體2.0 g/L 其溶劑為純化水。
[0018] 實(shí)施例2 本發(fā)明的試劑盒包括彼此獨(dú)立的試劑R1和試劑R2雙液體組分，其中 試劑R1: MOPS緩沖液 40 mmol/L 氯化鈉 100 mmol/L 聚乙二醇-8000 20 g/L 山梨醇 5 g/L 苯甲酸鈉 0.4 g/L 其溶劑為純化水 試劑R2: MOPS緩沖液 180 mmol/L 牛血清白蛋白 10 g/L 海藻酸鈉 35 mmol/L 曲拉通X-100 0.5 mL/L 聚氧丙烯聚氧乙烯共聚物 1.2 g/L 疊氮鈉 0.4 g/L 膠乳包被抗人胱抑素 C抗體3.0 g/L 其溶劑為純化水。 實(shí)施例3 試劑盒的制備和使用方法 1、 膠乳包被抗人胱抑素 C抗體的制備：用50 mmol/L的MES緩沖液將粒徑為120nm的聚苯 乙烯微球稀釋成為所含的聚苯乙烯微球的質(zhì)量濃度為1.5%的溶液，然后每毫升溶液中加入 0.8 mg的1-乙基-3-(3-二甲基胺丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽，在25°C的條件下反應(yīng)2小時(shí)，使 用離心機(jī)，在20000 rpm/min的轉(zhuǎn)速下離心30分鐘，去上清，然后將沉淀懸浮于50 mmol/L的 MES緩沖液中，超聲分散，再使用離心機(jī)，在20000 rpm/min的轉(zhuǎn)速下離心30分鐘，去上清，再 將沉淀懸浮于50 mmol/L的MES緩沖液中，使得溶液中的聚苯乙烯微球的最終質(zhì)量濃度為 3.0%，超聲分散，然后邊分散邊加入等體積的含8mg/ml的抗人胱抑素 C抗體的MES緩沖液，混 合攪拌，在25 °C的條件下反應(yīng)2小時(shí)，直至溶液中的聚苯乙烯微球的最終質(zhì)量濃度為1.5%為 止，加入牛血清白蛋白，使得牛血清白蛋白的最終濃度為10 g/L為止，在4°C條件下封閉15 小時(shí)，即可制備得到膠乳包被抗人胱抑素 C抗體； 2、 按照下列組分含量配制好試劑： 試劑R1: Tris緩沖液 110 mmol/L 氯化鉀 70 mmol/L 聚乙二醇-6000 12 g/L 牛血清白蛋白 10 g/L 苯酚 0.8 g/L 其溶劑為純化水 試劑R2: MES緩沖液 110 mmol/L 甘露糖 20 g/L 海藻酸鈉 20 mmol/L 曲拉通X-100 1.5 mL/L 聚氧丙烯聚氧乙烯共聚物 0.7 g/L 苯酚 0.8 g/L 膠乳包被抗人胱抑素 C抗體2.0 g/L 其溶劑為純化水； 3、 全自動(dòng)生化分析儀參數(shù)設(shè)置 (a) 檢測(cè)溫度:37°C; (b) 檢測(cè)波長(zhǎng):主波長(zhǎng)546nm，副波長(zhǎng)800nm; (c) 反應(yīng)時(shí)間：10min，其中，孵育時(shí)間5min，加入試劑R2后立即測(cè)定讀取吸光度 Al，5min后讀取吸光度A2,計(jì)算吸光度變化ΔΑ = A2-A1 ; (d) 反應(yīng)方向：正反應(yīng)； 4、 檢測(cè)步驟 (a) 取225μ1試劑R1與3μ1待測(cè)樣本混勻； (b) 將混勻后的溶液在37°C的條件下孵育5min; (c) 加入50μ1試劑R2,立即測(cè)定讀取吸光度Al，5min后讀取吸光度A2,計(jì)算吸光度變化 ΔΑ = A2-A1; (d) 根據(jù)樣本中胱抑素 C(Cys-C)活性1計(jì)算出樣本中的胱 抑素 C的濃度。
[0019] 實(shí)施例4 試劑盒的制備和使用方法 1、 膠乳包被抗人胱抑素 C抗體的制備：用50 mmol/L的MES緩沖液將粒徑為70nm的聚苯 乙烯微球稀釋成為所含的聚苯乙烯微球的質(zhì)量濃度為1.5%的溶液，然后每毫升溶液中加入 0.8 mg的1-乙基-3-(3-二甲基胺丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽，在25°C的條件下反應(yīng)2小時(shí)，使 用離心機(jī)，在20000 rpm/min的轉(zhuǎn)速下離心30分鐘，去上清，然后將沉淀懸浮于50 mmol/L的 MES緩沖液中，超聲分散，再使用離心機(jī)，在20000 rpm/min的轉(zhuǎn)速下離心30分鐘，去上清，再 將沉淀懸浮于50 mmol/L的MES緩沖液中，使得溶液中的聚苯乙烯微球的最終質(zhì)量濃度為 3.0%，超聲分散，然后邊分散邊加入等體積的含8mg/ml的抗人胱抑素 C抗體的MES緩沖液，混 合攪拌，在25 °C的條件下反應(yīng)2小時(shí)，直至溶液中的聚苯乙烯微球的最終質(zhì)量濃度為1.5%為 止，加入牛血清白蛋白，使得牛血清白蛋白的最終濃度為10 g/L為止，在4°C條件下封閉15 小時(shí)，即可制備得到膠乳包被抗人胱抑素 C抗體； 2、 按照下列組分含量配制好試劑： 試劑R1: MOPS緩沖液 40 mmol/L 氯化鈉 100 mmol/L 聚乙二醇-8000 20 g/L 山梨醇 5 g/L 苯甲酸鈉 0.4 g/L 其溶劑為純化水 試劑R2: MOPS緩沖液 180 mmol/L 牛血清白蛋白 10 g/L 海藻酸鈉 35 mmol/L 曲拉通X-100 0.5 mL/L 聚氧丙烯聚氧乙烯共聚物 1.2 g/L 疊氮鈉 0.4 g/L 膠乳包被抗人胱抑素 C抗體3.0 g/L 其溶劑為純化水； 3、 全自動(dòng)生化分析儀參數(shù)設(shè)置 (a) 檢測(cè)溫度:37°C; (b) 檢測(cè)波長(zhǎng):主波長(zhǎng)546nm，副波長(zhǎng)800nm; (c) 反應(yīng)時(shí)間：10min，其中，孵育時(shí)間5min，加入試劑R2后立即測(cè)定讀取吸光度 Al，5min后讀取吸光度A2,計(jì)算吸光度變化ΔΑ = A2-A1 ; (d) 反應(yīng)方向：正反應(yīng)； 4、 檢測(cè)步驟 (a) 取225μ1試劑R1與3μ1待測(cè)樣本混勻； (b) 將混勻后的溶液在37°C的條件下孵育5min;
(c) 加入50μ1試劑R2,立即測(cè)定讀取吸光度Al，5min后讀取吸光度A2,計(jì)算吸光度變化 ΔΑ = A2-A1; (d) 根據(jù)樣本中胱抑素 C(Cys-C)活性 計(jì)算出樣本中的胱 抑素 C的濃度。
[0020] 表1為實(shí)施例1所制得的測(cè)定胱抑素 C的試劑盒以及實(shí)施例2所制得的測(cè)定胱抑素 C 的試劑盒分別對(duì)質(zhì)控品1進(jìn)行測(cè)定的結(jié)果，其中質(zhì)控品1中的胱抑素 C的濃度為1.00 mg/L， 測(cè)定結(jié)果見表1:
由表1可知，本發(fā)明所制得的測(cè)定胱抑素 C的試劑盒對(duì)質(zhì)控品1的測(cè)定結(jié)果偏差較小，因 此測(cè)定準(zhǔn)確度高，而且實(shí)施例1為最優(yōu)的選擇。
[0021] 表2為實(shí)施例1所制得的測(cè)定胱抑素 C的試劑盒以及實(shí)施例2所制得的測(cè)定胱抑素 C的試 劑盒分別對(duì)質(zhì)控品2進(jìn)行測(cè)定的結(jié)果，其中質(zhì)控品2中的胱抑素 C的濃度為2.40 mg/L，測(cè)定 結(jié)果見表2:
由表2可知，本發(fā)明所制得的測(cè)定胱抑素 C的試劑盒對(duì)質(zhì)控品2的測(cè)定結(jié)果偏差較小，因 此測(cè)定準(zhǔn)確度高，而且實(shí)施例1為最優(yōu)的選擇。
[0022] 表3為實(shí)施例3所制得的測(cè)定胱抑素 C的試劑盒對(duì)同一待測(cè)樣本進(jìn)行的多次反復(fù)測(cè) 定以及實(shí)施例4所制得的測(cè)定胱抑素 C的試劑盒對(duì)同一待測(cè)樣本進(jìn)行的多次反復(fù)測(cè)定，對(duì)所 得的結(jié)果進(jìn)行SD和CV的計(jì)算，結(jié)果如下：
由表3可知本發(fā)明所制得的測(cè)定胱抑素 C的試劑盒的精密度比較好，而且由表1可知，實(shí) 施例3為最優(yōu)的選擇。
[0023] 上述實(shí)施例僅例示性說明本發(fā)明的原理及其功效，而非用于限制本發(fā)明。任何熟 悉此技術(shù)的人士皆可在不違背本發(fā)明的精神及范疇下，對(duì)上述實(shí)施例進(jìn)行修飾或改變。因 此，舉凡所屬技術(shù)領(lǐng)域中具有通常知識(shí)者在未脫離本發(fā)明所揭示的精神與技術(shù)思想下所完 成的一切等效修飾或改變，仍應(yīng)由本發(fā)明的權(quán)利要求所涵蓋。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種測(cè)定胱抑素 C的試劑盒，其特征在于:包括彼此獨(dú)立的試劑R1和試劑R2雙液體組 分組成試劑盒，包括的成分及相應(yīng)含量為： 試劑R1: 緩沖液 40~180 mmol/L 無機(jī)鹽離子 50~100 mmol/L 加速劑 5~20 g/L 穩(wěn)定劑 5~15 g/L 防腐劑 0.4~1.2 g/L 其溶劑為純化水 試劑R2: 緩沖液 40~180 mmol/L 穩(wěn)定劑 10~30 g/L 助懸劑 5~35 mmol/L 表面活性劑 0.5~2.0 mL/L 聚氧丙烯聚氧乙烯共聚物 0.2~1.2 g/L 防腐劑 0.4~1.2 g/L 膠乳包被抗人胱抑素 C抗體 0.5~3.0 g/L 其溶劑為純化水。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種測(cè)定胱抑素 C的試劑盒，其特征在于:包括彼此獨(dú)立的試 劑R1和試劑R2雙液體組分組成試劑盒，包括的成分及相應(yīng)含量為： 試劑R1: 緩沖液 110 mmol/L 無機(jī)鹽離子 70 mmol/L 加速劑 12 g/L 穩(wěn)定劑 10 g/L 防腐劑 0.8 g/L 其溶劑為純化水 試劑R2: 緩沖液 110 mmol/L 穩(wěn)定劑 20 g/L 助懸劑 20 mmol/L 表面活性劑 1.5 mL/L 聚氧丙烯聚氧乙烯共聚物 0.7 g/L 防腐劑 0.8 g/L 膠乳包被抗人胱抑素C抗體 2.0 g/L 其溶劑為純化水。3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種測(cè)定胱抑素 C的試劑盒，其特征在于:所述的試劑R1 中，所述的緩沖液采用MES緩沖液、MOPS緩沖液、M0PS0緩沖液、HEPES緩沖液、Tris緩沖液、磷 酸鹽緩沖液中的一種或多種的組合，所述的無機(jī)鹽離子采用氯化鈉、氯化鉀、氯化鎂、硫酸 鎂中的一種或多種的組合，所述的加速劑采用聚乙二醇-2000、聚乙二醇-6000、聚乙二醇-8000、聚乙烯吡咯烷酮中的一種或多種的組合，所述的穩(wěn)定劑采用牛血清白蛋白、甘露糖、 山梨醇、乙二胺四乙酸二鈉、果糖中的一種或多種的組合，所述的防腐劑采用苯酚、苯甲酸 鈉、疊氮鈉中的一種或多種的組合。4. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種測(cè)定胱抑素 C的試劑盒，其特征在于:所述的試劑R2 中，所述的緩沖液采用MES緩沖液、MOPS緩沖液、MOPSO緩沖液、HEPES緩沖液、Tris緩沖液、磷 酸鹽緩沖液中的一種或多種的組合，所述的穩(wěn)定劑采用牛血清白蛋白、甘露糖、山梨醇、乙 二胺四乙酸二鈉、果糖中的一種或多種的組合，所述的助懸劑采用阿拉伯膠、海藻酸鈉、膠 體二氧化硅、甘油中的一種或多種組合而成，所述的表面活性劑采用曲拉通X-100,所述的 防腐劑采用苯酚、苯甲酸鈉、疊氮鈉中的一種或多種的組合。5. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種測(cè)定胱抑素 C的試劑盒，其特征在于:所述的試劑R2 中，所述的膠乳包被抗人胱抑素 C抗體的制備方法為：用50 mmol/L的MES緩沖液將粒徑為30 ~200nm的聚苯乙烯微球稀釋成為所含的聚苯乙烯微球的質(zhì)量濃度為1.5%的溶液，然后每毫 升溶液中加入0.8 mg的1-乙基-3-(3-二甲基胺丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽，在20°C~37°C的 條件下反應(yīng)2小時(shí)，使用離心機(jī)，在20000 rpm/min的轉(zhuǎn)速下離心30分鐘，去上清，然后將沉 淀懸浮于50 mmol/L的MES緩沖液中，超聲分散，再使用離心機(jī)，在20000 rpm/min的轉(zhuǎn)速下 離心30分鐘，去上清，再將沉淀懸浮于50 mmol/L的MES緩沖液中，使得溶液中的聚苯乙烯微 球的最終質(zhì)量濃度為3.0%，超聲分散，然后邊分散邊加入等體積的含8mg/ml的抗人胱抑素 C 抗體的MES緩沖液，混合攪拌，在20 °037 °C的條件下反應(yīng)2小時(shí)，直至溶液中的聚苯乙烯微 球的最終質(zhì)量濃度為1.5%為止，加入牛血清白蛋白，使得牛血清白蛋白的最終濃度為10 g/ L為止，在4°C條件下封閉12~18小時(shí)，即可制備得到膠乳包被抗人胱抑素 C抗體。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種測(cè)定胱抑素 C的試劑盒，其特征在于:所述的抗人胱抑素 C 抗體為含有能與人胱抑素 C特異性結(jié)合的Fab功能部位的完整抗體或抗體片段。7. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種測(cè)定胱抑素 C的試劑盒的制備方法和使用方法，其特 征在于:包括以下步驟： (a)按照下列組分含量配制好試劑： 本發(fā)明公開了一種測(cè)定胱抑素 C的試劑盒，包括彼此獨(dú)立的試劑R1和試劑R2雙液體組 分組成試劑盒，包括的成分及相應(yīng)含量為： 試劑R1: 緩沖液 40~180 mmol/L 無機(jī)鹽離子 50~100 mmol/L 加速劑 5~20 g/L 穩(wěn)定劑 5~15 g/L 防腐劑 0.4~1.2 g/L 其溶劑為純化水 試劑R2: 緩沖液 40~180 mmol/L 穩(wěn)定劑 10~30 g/L 助懸劑 5~35 mmol/L 表面活性劑 0.5~2.0 mL/L 聚氧丙烯聚氧乙烯共聚物 0.2~1.2 g/L 防腐劑 0.4~1.2 g/L 膠乳包被抗人胱抑素C抗體 0.5~3.0 g/L 其溶劑為純化水； (b) 將待測(cè)樣本與試劑R1和試劑R2混合，使其充分反應(yīng)； (c) 用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定反應(yīng)后的吸光度差值； (d) 根據(jù)吸光度變化值計(jì)算出樣本中的胱抑素 C的濃度。8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種測(cè)定胱抑素 C的試劑盒的制備方法和使用方法，其特征在 于:步驟(b )中，所述的試劑R1與試劑R2的體積比為9:2。9. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種測(cè)定胱抑素 C的試劑盒的制備方法和使用方法，其特征在 于:步驟(b)中，所述的待測(cè)樣本與試劑R1和試劑R2的總體積的體積比在1:5到1:100之間。
【文檔編號(hào)】G01N21/31GK106093426SQ201610376097
【公開日】2016年11月9日
【申請(qǐng)日】2016年5月31日
【發(fā)明人】蔡曉輝, 莊慶華, 吳錚, 徐運(yùn)
【申請(qǐng)人】安徽伊普諾康生物技術(shù)股份有限公司