欧美在线观看视频网站,亚洲熟妇色自偷自拍另类,啪啪伊人网,中文字幕第13亚洲另类,中文成人久久久久影院免费观看 ,精品人妻人人做人人爽,亚洲a视频

檢測前列腺癌相關(guān)融合基因的膠體金試紙的制作方法

文檔序號(hào):8731177閱讀:702來源:國知局
檢測前列腺癌相關(guān)融合基因的膠體金試紙的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本實(shí)用新型涉及檢測前列腺癌相關(guān)融合基因的膠體金試紙,屬于醫(yī)學(xué)生物技術(shù)領(lǐng) 域。
【背景技術(shù)】
[0002] 前列腺癌(prostatecancer,PCa)位居男性好發(fā)腫瘤中第一位,在男性腫瘤死亡 率中位居第二。隨著我們國家人口老齡化,PCa的發(fā)病率正逐年上升,成為威脅我國男性健 康的公共問題。
[0003] 基因融合是染色體重排導(dǎo)致的兩個(gè)基因的融合,常見于腫瘤中。TMPRSS2-ERG基因 融合是前列腺癌中最常出現(xiàn)的基因融合類型。TMPRSS2-ERG融合基因是在PCa中特異存在 的,在血漿、前列腺液和尿液中檢測這種DNA重組可用來篩查PCa。
[0004] 目前檢測TMPRSS2-ERG融合基因的方法包括熒光原位雜交(FISH)、RT-PCR檢測和 測序技術(shù)。FISH方法耗時(shí)并且技術(shù)要求高,RT-PCR容易受到RNA降解影響檢測敏感性,而 測序技術(shù)因價(jià)格昂貴尚未普及。因此有必要開發(fā)一種容易操作、價(jià)格適中、檢測敏感性高的 檢測試劑。 【實(shí)用新型內(nèi)容】
[0005] 本實(shí)用新型要解決的技術(shù)問題是提供檢測前列腺癌相關(guān)融合基因的膠體金試紙。
[0006] 為實(shí)現(xiàn)上述目的,本實(shí)用新型采用以下設(shè)計(jì)方案:
[0007] -種檢測前列腺癌相關(guān)融合基因的膠體金試紙,由載體、硝酸纖維膜、膠體金結(jié)合 物墊、樣品墊和吸收墊組成,其中硝酸纖維膜上設(shè)有對照線和檢測線,硝酸纖維膜的一端設(shè) 有膠體金結(jié)合物墊和樣品墊,另一端設(shè)有吸收墊。
[0008] 所述膠體金結(jié)合物墊為紅色膠體金標(biāo)記TMPRSS2-ERG融合蛋白單克隆抗體的膠 體金結(jié)合物墊。
[0009] 所述單克隆抗體為雜交瘤細(xì)胞株4F2,CGMCCNo. 7051表達(dá)的單克隆抗體。
[0010] 本實(shí)用新型選擇TMPRSS2-ERG融合基因表達(dá)蛋白序列作為抗原,采用雜交瘤技 術(shù),以該抗原免疫小鼠,對雜交瘤細(xì)胞表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行篩選和驗(yàn)證,得到表達(dá)強(qiáng)特異性的單 克隆抗體的細(xì)胞株??乖鞍踪徸园痊斕厣镝t(yī)藥(上海)有限公司。蛋白名稱: TMPRSS2-ERGPCa融合基因表達(dá)的dERG((N-terminaltruncatedERG)(切除頂端的ERG 蛋白))蛋白;種屬:Homosapiens;蛋白定位:PCa上皮細(xì)胞;NCBINumber:ACA81385. 1〇
[0011] 雜交瘤細(xì)胞株4F2,保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心,地 址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào),保藏日期2012年12月24日,名稱為雜交瘤細(xì) 胞,保藏號(hào)為CGMCCNo. 7051。該細(xì)胞株表達(dá)抗TMPRSS2-ERG融合基因表達(dá)的dERG蛋白 ((N-terminaltruncatedERG)(切除頂端的ERG蛋白))的單克隆抗體。
[0012] 膠體金標(biāo)記單克隆抗體為本領(lǐng)域常規(guī)方法:將1 %氯金酸30ml、2%檸檬酸三鈉 18ml、雙蒸水720混合加熱,加入膠體金,加入單克隆抗體包被,離心,得到膠體金標(biāo)記的單 克隆抗體;用吸水玻璃纖維紙吸收膠體金包被的單克隆抗體并干燥,既可用于制備。
[0013] 所述對照線為包被羊抗鼠IgG多克隆抗體。
[0014] 所述檢測線為包被合成抗原。(TMPRSS2-ERG截短的多肽,委托Abmart合成)
[0015] 所述樣品墊為玻璃纖維材質(zhì)。
[0016] 所述吸收墊為棉漿板。
[0017] 本實(shí)用新型基于膠體金的免疫層析原理,使用競爭法:
[0018] 當(dāng)待測物中有被測的抗原物質(zhì)(即TMPRSS2-ERG融合蛋白)時(shí),待測物中的抗原 物質(zhì)就會(huì)與標(biāo)記膠體金的融合蛋白單克隆抗體形成Ag-Ab-Au(抗原-抗體-膠體金)復(fù)合 物,復(fù)合物在虹吸作用下沿硝酸纖維素膜向上層析,不與包被在硝酸纖維素膜上的合成融 合蛋白免疫原結(jié)合,僅會(huì)在對照線處出現(xiàn)一條色帶(C線),結(jié)果為陽性,說明被檢測的樣品 中含有融合蛋白。
[0019]當(dāng)待測物質(zhì)中沒有被測的抗原物質(zhì)時(shí),標(biāo)記膠體金的融合蛋白單克隆抗體就會(huì)與 包被在硝酸纖維素膜上的融合蛋白合成免疫原結(jié)合,形成Ag-Ab-Au復(fù)合物,此時(shí)檢測線處 可看到一條明顯色帶(T線,檢測線),因此當(dāng)檢測試紙上可看到兩條線(C線和T線)時(shí),結(jié) 果為陰性,說明被檢測的樣品未含融合蛋白。
[0020] 基于膠體金免疫層析法原理,使用競爭法。重組抗原包被于硝酸纖維素膜的檢測 線21位置,抗體包被于對照線22位置。檢測時(shí)樣本中的抗原與膠體金標(biāo)記的抗體結(jié)合,混 合物在虹吸作用下沿硝酸纖維素膜向上層析,與膜上檢測線21的重組抗原發(fā)生與抗體競 爭反應(yīng),根據(jù)競爭法原理,T線位置不會(huì)形成紅色條帶,相反陰性樣本則會(huì)在T線位置形成 紅色條帶。無論樣本抗原存在與否,混合物在沿膜向上層析到達(dá)對照線C線位置時(shí),均會(huì)出 現(xiàn)紅色條帶,此紅色條帶表示樣本量充分,流動(dòng)正確且試劑有效。
[0021] 膠體金試紙的使用方法:
[0022] 1.備檢樣品、試紙條及其他所用器材在使用前均應(yīng)平衡至室溫(20_25°C);
[0023] 2.除去試劑盒外包裝,標(biāo)明備件樣品和對照品,試紙條應(yīng)在1小時(shí)內(nèi)使用,尤其是 在溫度高于30°C或者濕度很高的環(huán)境中應(yīng)盡快使用。
[0024] 3.吸取50微升的樣品,滴加于試紙條加樣處,平放在桌面后計(jì)時(shí)。
[0025] 4.推薦在加樣后5-8分鐘內(nèi)讀取結(jié)果,8分鐘后讀取結(jié)果無效。
[0026] 檢驗(yàn)結(jié)果的解釋
[0027] 1.陽性:僅在對照線22 (C線)出現(xiàn)一條紅色條帶,初步檢測結(jié)果為待測樣本中待 檢成分為陽性。
[0028] 2.陰性:在檢測線21(T線)及對照線22(C線)各出現(xiàn)一條紅色條帶,初步檢測 結(jié)果為待測樣本中待檢成分為陰性,建議進(jìn)行其他方法檢測。
[0029] 3?無效:對照線22 (C線)無條帶出現(xiàn)。
[0030] 本實(shí)用新型的優(yōu)點(diǎn)是:本實(shí)用新型提供了一種檢測前列腺癌相關(guān)融合蛋白的膠體 金試紙,該試紙結(jié)構(gòu)簡單,使用方便,敏感性高,特異性強(qiáng),價(jià)格低廉,能夠快速檢測出前列 腺癌相關(guān)TMPRSS2-ERG融合基因的表達(dá)產(chǎn)物。
[0031] 以下結(jié)合附圖和【具體實(shí)施方式】詳細(xì)說明本實(shí)用新型的設(shè)計(jì)方案,并不以此限定本 實(shí)用新型的實(shí)施范圍。
【附圖說明】
[0032] 圖1為膠體金試紙的結(jié)構(gòu)示意圖
【具體實(shí)施方式】
[0033] 實(shí)施例1 :制備和篩選雜交瘤細(xì)胞株
[0034] 一 .材料
[0035] 細(xì)胞株:RWPE_1,PC3, LNcap,Vcap,購于ATCC
[0036] R1881 :人工合成的雄激素類似物,用于誘導(dǎo)融合基因TMPRSS2-ERG的高表達(dá)。 lOOyMR1881配制:稱取0. 284mgR1881,溶于10mLDMS0,lmL槍頭反復(fù)吹打至溶解,分裝于 1. 5mLEP管,-20°C保存,使用終濃度為10-100nM。
[0037] 主要抗體:ERG抗體購自Abeam公司,山羊抗小鼠IgG-HRP和山羊抗
當(dāng)前第1頁1 2 
網(wǎng)友詢問留言 已有0條留言
  • 還沒有人留言評論。精彩留言會(huì)獲得點(diǎn)贊!
1
武安市| 封丘县| 从江县| 故城县| 镇坪县| 四会市| 松桃| 亳州市| 宾川县| 石景山区| 清远市| 双峰县| 西宁市| 大关县| 蓬莱市| 化德县| 杭锦后旗| 宁河县| 巫溪县| 鄂尔多斯市| 大冶市| 乐安县| 雷波县| 曲周县| 平凉市| 武鸣县| 红原县| 东安县| 山西省| 丹凤县| 滨州市| 鄂托克前旗| 修水县| 军事| 翁源县| 南投县| 乌苏市| 房产| 潢川县| 福建省| 沿河|