類風(fēng)濕因子雙抗體夾心elisa試劑盒的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實(shí)用新型涉及醫(yī)療檢測儀器技術(shù)領(lǐng)域，主要涉及風(fēng)濕或類風(fēng)濕醫(yī)療檢測儀器，具體涉及類風(fēng)濕因子雙抗體夾心ELISA試劑盒。
【背景技術(shù)】
[0002]類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎是一個(gè)累及周圍關(guān)節(jié)為主的系統(tǒng)性炎癥性自身免疫性疾病，其特征性病理改變是關(guān)節(jié)滑膜的慢性炎癥，滑膜增生形成絨毛狀突起，侵犯關(guān)節(jié)軟骨、軟骨下骨、韌帶和肌腱等，造成關(guān)節(jié)軟骨、骨和關(guān)節(jié)囊等破壞，最終導(dǎo)致關(guān)節(jié)畸形和功能喪失。
[0003]類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)是一種常見的以慢性多關(guān)節(jié)性炎癥為主要癥狀的系統(tǒng)性自身免疫疾病。類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎病程長、多復(fù)發(fā)，對(duì)組織的損傷不可逆，給患者帶來極大痛苦。該疾病早期癥狀復(fù)雜多樣且不典型，給臨床診斷帶來困難，進(jìn)而延誤治療導(dǎo)致病情進(jìn)展，嚴(yán)重危害患者健康和影響生活質(zhì)量。
[0004]目前對(duì)RA的診斷主要依靠臨床癥狀和血清學(xué)檢查。目前常用的血清學(xué)指標(biāo)為類風(fēng)濕因子(rheumatoid factor，RF)，RA可分為IgM、IgA、IgG、IgD、IgE五型，是類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎血清中針對(duì)IgG Fc片段上抗原表位的一類自身抗體。RF是目前類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎診治中最常用的一個(gè)臨床檢測指標(biāo)，它具有較高的敏感性，但特異性較差。
[0005]臨床檢測類風(fēng)濕因子的常見方法包括免疫印跡法、間接凝集反應(yīng)和酶聯(lián)免疫吸附法，簡稱ELISA法(Enzyme-linked Tmmuno Sorbent Assay)。免疫印跡法是將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上，然后利用抗體進(jìn)行檢測。對(duì)已知表達(dá)蛋白，可用相應(yīng)抗體作為一抗進(jìn)行檢測，對(duì)新基因的表達(dá)產(chǎn)物，可通過融合部分的抗體檢測。間接凝集反應(yīng)是將可溶性抗原先吸附適當(dāng)大小的顆粒性載體的表面，然后與相應(yīng)抗體作用，在適合的電解質(zhì)存在條件下，出現(xiàn)特異性凝集現(xiàn)象，稱間接凝集反應(yīng)或被動(dòng)凝集反應(yīng)。ELISA法的原理是將抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性，將酶標(biāo)抗原或抗體與固體載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)，加入酶反應(yīng)的底物，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，再根據(jù)顏色的深淺來定性或定量分析，是目前最常用的手段。
【實(shí)用新型內(nèi)容】
[0006]本發(fā)明人發(fā)現(xiàn):在RA患者血清或滑膜液中IgG型RF的出現(xiàn)與患者的滑膜炎、血管炎和關(guān)節(jié)的癥狀密切相關(guān)，此類RF常伴隨高滴度的IgM型RF在同一 RA患者血清或滑膜液中出現(xiàn)。在正常人及非RA患者中很難檢測出IgG型RF。此外，IgG型RF在關(guān)節(jié)軟骨表面的沉積可激活補(bǔ)體引起關(guān)節(jié)的炎性損傷，因此滑膜液中檢測出IgG型RF比血清中檢出IgM型RF更具病理意義。
[0007]S卩，本實(shí)用新型解決的技術(shù)問題是:現(xiàn)有ELISA試劑盒多以血清中RF為測試指標(biāo)，若想針對(duì)滑膜炎、血管炎或關(guān)節(jié)癥狀的患者定量檢測IgG型RF，需針對(duì)血清進(jìn)行純化，以消除IgM型RF的干擾，操作復(fù)雜，成本較高，且檢測結(jié)果準(zhǔn)確率低；此外，滑膜液的表面張力比血清大，傳統(tǒng)的試劑盒中酶聯(lián)板的反應(yīng)槽為圓柱形，不利于滑膜液與孔壁包覆的抗體進(jìn)行有效接觸。
[0008]S卩，本實(shí)用新型的目的是:提供一種ELISA試劑盒，以滑膜液為檢測對(duì)象，針對(duì)性檢測滑膜液中IgG型RF，提高準(zhǔn)確性，避免IgG型RF在關(guān)節(jié)軟骨表面的沉積而導(dǎo)致關(guān)節(jié)的炎性損傷。
[0009]針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)，本實(shí)用新型提供一種類風(fēng)濕因子雙抗體夾心ELISA試劑盒，針對(duì)滑膜液表面張力比血清大的特點(diǎn)，本實(shí)用新型將試劑盒中酶聯(lián)板的反應(yīng)槽設(shè)計(jì)成腰鼓形，槽底和槽口的直徑小于中間部分。
[0010]具體來說，針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本實(shí)用新型提供了如下技術(shù)方案:
[0011]—種類風(fēng)濕因子雙抗體夾心ELISA試劑盒，包括設(shè)置有凹槽的盒體1，其特征在于，所述盒體內(nèi)設(shè)置有酶聯(lián)板2、封板膜3和放置于凹槽上的試劑瓶4 ;
[0012]所述酶聯(lián)板包括基板和設(shè)置于基板上的包被有抗IgG型RF抗體的反應(yīng)槽21 ;所述反應(yīng)槽為腰鼓狀結(jié)構(gòu)，槽底和槽口的直徑小于中間部分的直徑。
[0013]優(yōu)選的，上述試劑盒中，所述反應(yīng)槽槽底和槽口的直徑相同，為2_5mm，中間部分直徑比兩端大0.5_2mm。
[0014]優(yōu)選的，上述試劑盒中，所述反應(yīng)槽的數(shù)量為25-96個(gè)。
[0015]優(yōu)選的，上述試劑盒中，所述反應(yīng)槽的數(shù)量為25個(gè)、50個(gè)或75個(gè)。
[0016]優(yōu)選的，上述試劑盒中，所述試劑瓶包括稀釋液瓶、洗滌液瓶、酶標(biāo)抗體瓶、底物液瓶和終止液瓶。
[0017]優(yōu)選的，上述試劑盒中，所述試劑瓶還包括輔助劑瓶或封閉液瓶。
[0018]優(yōu)選的，上述試劑盒中，所述試劑瓶還包括用來承裝滑膜液的樣品管5。
[0019]優(yōu)選的，上述試劑盒中，所述底物液瓶包括第一顯色液瓶和第二顯色液瓶。
[0020]優(yōu)選的，上述試劑盒中，所述稀釋液瓶的容積為10mL?20mL，酶標(biāo)抗體瓶的容積為10mL?20mL，終止液瓶的容積為100_300mL。
[0021]優(yōu)選的，上述試劑盒中，所述第一顯色液瓶的容積為50_100mL，第二顯色液瓶的容積為 50-100mL。
[0022]優(yōu)選的，上述試劑盒中，所述樣品管的容積為60_120mL。
[0023]此外，本實(shí)用新型所述類風(fēng)濕因子雙抗體夾心ELISA試劑盒也可用于風(fēng)濕類疾病的治療。
[0024]本實(shí)用新型的機(jī)理為:在酶聯(lián)板中包被的IgG為抗IgG型RF抗體，可以與IgG型RF結(jié)合。將滑膜液樣本加入反應(yīng)槽中，樣品中的IgG型RF與Ig G結(jié)合，形成抗原抗體復(fù)合物；將酶標(biāo)抗體加入反應(yīng)槽中，與上述抗原抗體復(fù)合物結(jié)合，形成抗體-抗原-抗體雙抗體夾心結(jié)構(gòu)，再加入底物液，使其在酶催化作用下變成有色產(chǎn)物，進(jìn)而用酶標(biāo)儀檢測IgG型RF濃度。
[0025]本實(shí)用新型的有益效果是:1)生物酶催化效率高，間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果，使測定方法達(dá)到很高的靈敏度。2)抗原無需進(jìn)行純化，抗體專一性高。3)用本實(shí)用新型所述試劑盒對(duì)滑膜液中IgG型RF進(jìn)行檢測，針對(duì)性強(qiáng)，準(zhǔn)確率高。
【附圖說明】
[0026]圖1為【具體實(shí)施方式】中所述類風(fēng)濕因子雙抗體夾心ELISA試劑盒的結(jié)構(gòu)圖，其中，1為盒體，2為酶聯(lián)板，4為試劑瓶，5為樣品管。
[0027]圖2為實(shí)施例一所述酶聯(lián)板與封板膜貼合后的透視圖，其中，3為封板膜，21為反應(yīng)槽。
[0028]圖3為實(shí)施例一所述ELISA試劑盒內(nèi)部結(jié)構(gòu)的俯視圖，其中，12為酶聯(lián)板槽，13為用于放置終止液瓶的凹槽，14為用于放置稀釋液瓶的凹槽，15為用于放置洗滌液瓶的凹槽，16為用于放置樣品管的凹槽。
【具體實(shí)施方式】
[0029]鑒于目前沒有ELISA試劑盒針對(duì)滑膜液中IgG型RF含量進(jìn)行檢測，本實(shí)用新型提供一種類風(fēng)濕因子雙抗體夾心ELISA試劑盒，針對(duì)滑膜液設(shè)計(jì)，可更加準(zhǔn)確地檢測滑膜液中IgG型RF含量。
[0030]一種優(yōu)選的實(shí)施方式中，本實(shí)用新型所述ELISA試劑盒的操作流程如下:
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