抗核抗體六項(xiàng)聯(lián)合免疫層析定性檢測試紙條的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實(shí)用新型屬于免疫檢測領(lǐng)域，具體涉及一種高靈敏度抗核抗體六項(xiàng)聯(lián)合免疫層析定性檢測試紙條。
【背景技術(shù)】
[0002]自身免疫性疾病(Autoimmune Diseases，AID)是泛指機(jī)體免疫效應(yīng)細(xì)胞或免疫效應(yīng)分子，針對自身組織或細(xì)胞出現(xiàn)異常免疫應(yīng)答反應(yīng)，導(dǎo)致組織損壞或功能障礙的疾病，是一類發(fā)病率高，可侵襲全身系統(tǒng)，嚴(yán)重危害人類健康的、致殘率、致死率高的疾病。該類疾病特點(diǎn)為血液中存在自身抗體和(或)致敏的淋巴細(xì)胞；組織器官損傷和功能障礙范圍取決于自身抗原分布；患者以女性較多見，發(fā)病率隨年齡的增長而增高；多數(shù)原發(fā)病病因不清，常呈現(xiàn)遺傳傾向性；病程慢性迀延和反復(fù)發(fā)作，甚至成為終身痼疾；免疫抑制藥物治療有一定療效。
[0003]在AID疾病的各種檢測項(xiàng)目中，由于抗核抗體(ANA)與AID密切相關(guān)，是自身免疫反應(yīng)的重要靶位，因此抗核抗體檢測在AID疾病中一直處于重要位置，是臨床上一項(xiàng)極其重要的篩選試驗(yàn)。隨著人們認(rèn)識的不斷加深，抗核抗體(Antinuclear antibody,ANA)的定義已由原來傳統(tǒng)的針對細(xì)胞核擴(kuò)展到現(xiàn)在的整個細(xì)胞，指抗細(xì)胞內(nèi)所有抗原成分的自身抗體的總稱。目前已發(fā)現(xiàn)了具有不同臨床意義的三十多種ANA，常見的如抗dsDNA抗體和抗Sm抗體是系統(tǒng)性紅斑狼瘡的標(biāo)志性抗體，而抗SS-A(Ro)抗體和抗SS-B(La)抗體則多出現(xiàn)于干燥綜合癥患者等。臨床上ANA的檢測，實(shí)際是指總抗核抗體檢測。ANA陽性的疾病很多，常見的AID疾病中，系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者的ANA的陽性率約為90-100%，干燥綜合癥患者陽性率約60-80%，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者的ANA陽性率為30-50%。由于ANA在AID疾病出現(xiàn)明顯臨床癥狀之前就可存在，且病情穩(wěn)定后其滴度逐漸下降，因此ANA的檢測對于AID疾病的早期篩查、診斷和鑒別診斷、疾病活動度的判斷及治療效果的觀察和指導(dǎo)臨床用藥等方面具有重要的意義。
[0004]目前常用的檢測方法主要有兩種，即是作為檢測“金標(biāo)準(zhǔn)”的首選方法-間接免疫熒光法(IIF)和ELISA法。IIF法一直是臨床常規(guī)的篩選試驗(yàn)，盡管該方法檢測靈敏度高，但是需要手工操作和顯微鏡觀察，影響因素較多，尤其是經(jīng)驗(yàn)不豐富者容易判斷錯誤，而且因?yàn)椴僮鲿r間長，臨床上常采用批量檢測，因而也常出現(xiàn)一周或二周才出一次報(bào)告的情況，不利于疾病的早期診斷。EILSA法，因可進(jìn)行半定量檢測，臨床經(jīng)常根據(jù)其濃度的變化判定病人的好轉(zhuǎn)與否，從而制定下一步的治療方案，因此在臨床也得到了廣泛的使用。由于ELISA方法也是批量檢測，因此也存在標(biāo)本量少時不能極時出結(jié)果，開包裝的試劑盒放置時間長易影響檢測結(jié)果從而影響臨床診治的缺點(diǎn)。AID疾病的臨床診斷路徑，通常是先進(jìn)行ANA篩查，如果陰性且無明顯臨床癥狀基本可排除AID，反之，ANA陽性的患者則需要進(jìn)一步進(jìn)行靶抗體的確認(rèn)實(shí)驗(yàn)，從而進(jìn)一步的確定疾病的種類。但I(xiàn)IF法和EILSA法，均存在出報(bào)告時間長，導(dǎo)致病人等待結(jié)果時間長，耽誤病人的即時就醫(yī)，從而影響疾病診治情況。
[0005]針對上述臨床存在之問題，在當(dāng)今檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)發(fā)展提出的P0CT(Point Of CareTesting)，即即時檢驗(yàn)新領(lǐng)域背景下，致力于開發(fā)一種新的檢測試劑即熒光免疫層析快速檢測試劑盒，使用小型熒光免疫分析儀進(jìn)行檢測，花費(fèi)時間在15分鐘左右，因此簡單、便捷，標(biāo)本即到即檢，既能解決病人等待時間長之問題，又能解決臨床醫(yī)生執(zhí)行自身免疫性疾病臨床診斷的路徑問題，可以在臨床推廣使用，以提高自身免疫疾病的診治水平。
[0006]抗52-kD Ro/SSA抗體，抗rRNP抗體，抗Jo_l抗體，抗SmDl抗體，抗Scl_70抗體，抗SSB-La抗體是臨床常見的幾種自身免疫性疾病的標(biāo)志性抗體，六項(xiàng)聯(lián)合檢測可以用于自身免疫性疾病的鋪助診斷。
【實(shí)用新型內(nèi)容】
[0007]本實(shí)用新型的目的，在于提供一種抗核抗體六項(xiàng)聯(lián)合免疫層析定性檢測試紙條，其基于間接法、熒光免疫側(cè)向?qū)游龊蜕锼?鏈霉親和素放大系統(tǒng)，提供高靈敏度抗核抗體六項(xiàng)聯(lián)合免疫層析定性檢測試紙條。使用本實(shí)用新型時，提高了檢測靈敏度和檢測穩(wěn)定性，降低了非特異性結(jié)合，聯(lián)合檢測大幅度提高檢測的準(zhǔn)確性和便利性，檢測時間在15分鐘左右，大大提尚了診斷效率。
[0008]本實(shí)用新型解決其技術(shù)問題的解決方案是:抗核抗體六項(xiàng)聯(lián)合免疫層析定性檢測試紙條，其包括底板，所述底板上依次設(shè)有樣品墊、熒光標(biāo)記物結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，所述吸水墊和熒光標(biāo)記物結(jié)合墊分別交疊壓在硝酸纖維素膜的兩端后在硝酸纖維素膜的表面形成檢測區(qū)，所述樣品墊交疊壓在熒光標(biāo)記物結(jié)合墊上，所述熒光標(biāo)記物結(jié)合墊上固定有生物素標(biāo)記的鼠抗人IgG多克隆抗體和鏈霉親和素標(biāo)記的熒光蛋白；所述檢測區(qū)內(nèi)的硝酸纖維素膜上固定有識別抗52-kD Ro/SSA抗體的第一檢測線、識別抗rRNP抗體的第二檢測線、識別抗Jo-Ι抗體的第三檢測線、識別抗SmDl抗體的第四檢測線、識別抗Sc 1-70抗體的第五檢測線、識別抗SSB-La抗體的第六檢測線和羊抗鼠IgG多克隆抗體構(gòu)成的質(zhì)控線。
[0009]作為上述技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)，所述熒光標(biāo)記物結(jié)合墊包括層疊的第一熒光標(biāo)記物結(jié)合墊和第二熒光標(biāo)記物結(jié)合墊，所述第一熒光標(biāo)記物結(jié)合墊的一端墊在樣品墊的下方，所述第二熒光標(biāo)記物結(jié)合墊交疊壓在硝酸纖維素膜的一端。
[0010]作為上述技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)，所述第一熒光標(biāo)記物結(jié)合墊中插入樣品墊下方的一端設(shè)有定位條，所述樣品墊的下端面設(shè)有能容納定位條的定位槽。
[0011]作為上述技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)，還包括卡殼，所述底板、樣品墊、熒光標(biāo)記物結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊均置于卡殼內(nèi)，所述卡殼殼面上對應(yīng)于硝酸纖維膜的位置設(shè)有觀察窗，卡殼殼面上對應(yīng)于樣品墊的位置設(shè)有加樣孔。
[0012]作為上述技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)，所述觀察窗為長方形孔。
[0013]作為上述技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)，所述熒光蛋白可以是綠色熒光蛋白、藻膽蛋白中的一種。
[0014]作為上述技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)，所述樣品墊為經(jīng)表面活性劑緩沖液浸泡處理后干燥的玻璃纖維構(gòu)件。
[0015]作為上述技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)，所述底板為聚苯乙烯構(gòu)件或者聚乙烯構(gòu)件。
[0016]作為上述技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)，所述卡殼包括塑料上殼和塑料下殼，所述塑料上殼扣合塑料下殼上后形成卡殼。
[0017]本實(shí)用新型與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下優(yōu)點(diǎn):
[0018](1)本實(shí)用新型將熒光蛋白作為標(biāo)記物，此標(biāo)記物穩(wěn)定性良好，有利于提高檢測穩(wěn)定性。
[0019](2)本實(shí)用新型通過利用“鏈霉親和素-生物素放大系統(tǒng)”，提高檢測靈敏度，降低非特異性結(jié)合，有利于提高試劑盒性能。
[0020](3)利用本實(shí)用新型進(jìn)行樣品的檢測時間在15分鐘左右，極大地提高了檢測效率。
[0021](4)本實(shí)用新型可通過熒光免疫分析儀對結(jié)果進(jìn)行判讀，可實(shí)現(xiàn)自動化，減少主觀因素的影響，提供便利、快速、可靠的診斷結(jié)果。
[0022](5)本實(shí)用新型卡殼設(shè)有樣品進(jìn)入的加樣孔和供觀測結(jié)果的觀察窗，根據(jù)分析儀器判定結(jié)果，準(zhǔn)確可靠。
[0023](6)本實(shí)用新型制作方便，體積小、便于攜帶。
[0024](7)本實(shí)用新型檢測成本較低。
[0025](8)本實(shí)用新型可批量生產(chǎn)，適用于臨床快速診斷和現(xiàn)場快速診斷；易于保存，有利于基層單位推廣。
[0026](9)本實(shí)用新型采用聯(lián)合檢測，一條檢測條同時檢測六項(xiàng)，檢測更加方便。
【附圖說明】
[0027]為了更清楚地說明本實(shí)用新型實(shí)施例中的技術(shù)方案，下面將對實(shí)施例描述中所需要使用的附圖作簡單說明。顯然，所描述的附圖只是本實(shí)用新型的一部分實(shí)施例，而不是全部實(shí)施例，本領(lǐng)域的技術(shù)人員在不付出創(chuàng)造性勞動的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他設(shè)計(jì)方案和附圖。
[0028]圖1是本實(shí)用新型實(shí)施例一的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0029]圖2是本實(shí)用新型實(shí)施例二的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0030]圖3是本實(shí)用新型實(shí)施例三的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0031]圖4是本實(shí)用新型實(shí)施例四的結(jié)構(gòu)示意圖。
【具體實(shí)施方式】
[0032]以下將結(jié)合實(shí)施例和附圖對本實(shí)用新型的構(gòu)思、具體結(jié)構(gòu)及產(chǎn)生的技術(shù)效果進(jìn)行清楚、完整地描述，以充分地理解本實(shí)用新型的目的、特征和效果。顯然，所描述的實(shí)施例只是本實(shí)用新型的一部分實(shí)施例，而不是全部實(shí)施例，基于本實(shí)用新型的實(shí)施例，本領(lǐng)域的技術(shù)人員在不付出創(chuàng)造性勞動的前提下所獲得的其他實(shí)施例，均屬于本實(shí)用新型保護(hù)的范圍。另外，文中所提到的所有聯(lián)接/連接關(guān)系，并非單指構(gòu)件直接相接，而是指可根據(jù)具體實(shí)施情況，通過添加或減少聯(lián)接輔件，來組成更優(yōu)的聯(lián)接結(jié)構(gòu)。
[0033]參照圖1，抗SSB-La抗體免疫層析定量檢測試紙