豬藍耳病毒抗體檢測卡的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實用新型涉及一種檢測卡，特別是涉及一種用于快速定量檢測豬血清中豬藍耳病毒抗體的檢測卡。
【背景技術(shù)】
[0002]豬藍耳病又稱豬繁殖與呼吸綜合征(Porcine reproductive and respiratorysyndrome，PRRS)自二十世紀八十年代末期開始流行，1992年國際獸醫(yī)局正式命名，主要感染豬，尤其是母豬，該病嚴重影響其生殖功能，臨床主要特征為流產(chǎn)，產(chǎn)死胎、木乃伊胎、弱胎，呼吸困難，在發(fā)病過程中會出現(xiàn)短暫性的兩耳皮膚紫紺，故又稱為藍耳病。豬藍耳病是由豬藍耳病毒收起以妊娠母豬繁殖及各種年齡豬，特別是仔豬的呼吸道疾病為特征的一種嚴重的傳染性疫病，并已遍布全世界主要養(yǎng)豬國家和地區(qū)，成為威脅養(yǎng)豬業(yè)健康發(fā)展的主要疫病之一。
[0003]疫苗為控制疫病的重要手段之一，日常監(jiān)測疫苗產(chǎn)生抗體就被人們給予了更高的期望。對于養(yǎng)殖場來說，豬群的日常監(jiān)測是選擇疫苗、評估免疫程序合理性、掌握豬群健康狀態(tài)的重要手段，同時也可從側(cè)面反映豬場管理是否合理，也是適時注射疫苗的主要依據(jù)。
[0004]市面上有豬藍耳病毒抗體膠體金快速檢測卡，通過對樣品的檢測，即可粗略判斷豬體內(nèi)是豬藍耳抗體含量，獸醫(yī)根據(jù)檢測結(jié)果判斷是否需要注射豬藍耳疫苗。
[0005]同樣市場上也大量使用檢測豬藍耳抗體酶標試劑盒，S卩ELISA酶標試劑盒，ELISA試劑盒需要酶標儀、溫育反應(yīng)條件、洗板條件，操作工作環(huán)境和專業(yè)技術(shù)人員，另外檢測樣本還需要復(fù)雜的前處理，如采集血液，分離血清等;而快速膠體金雖然檢測方便，不需專業(yè)技術(shù)人員和工作環(huán)境，但其檢測的靈敏度低，且只能定性，檢測范圍窄。而本實用新型專利的目的就是克服以上兩類試劑盒的各自缺點，通過簡單的操作，現(xiàn)場快速、準確、高靈敏地定量(半定量)分析，實現(xiàn)在養(yǎng)豬現(xiàn)場檢測。
【實用新型內(nèi)容】
[0006]本實用新型的目的就是提供一種豬藍耳病毒抗體檢測卡，能完全解決上述現(xiàn)有技術(shù)的不足之處。
[0007]本實用新型的目的通過下述技術(shù)方案來實現(xiàn):
[0008]—種豬藍耳病毒抗體檢測卡，包括裝配在外殼內(nèi)的檢測卡本體，所述檢測卡本體包括底板，在底板上依次設(shè)置樣品墊、標記墊、硝酸纖維素膜和吸水紙，所述硝酸纖維素膜上包被豬藍耳抗原為檢測線，包被羊抗雞抗體為質(zhì)控線，在外殼上對應(yīng)樣品墊開設(shè)加樣孔，對應(yīng)硝酸纖維素膜上的檢測線和質(zhì)控線開設(shè)視窗孔。
[0009]作為優(yōu)選，所述底板為PVC底板，在PVC底板上從左至右依次粘貼樣品墊、標記墊、硝酸纖維素膜和吸水紙，且樣品墊的右端搭在標記墊的左端上，標記墊的右端搭在硝酸纖維素膜的左端上，吸水紙左端搭在硝酸纖維素膜的右端上。
[0010]作為優(yōu)選，所述標記墊由載體基層和標記物組成，標記物為載體基層上噴涂鑭系熒光檢測微球和鑭系熒光質(zhì)控微球形成的一層膜，且檢測微球為標記有豬藍耳抗原的微球，質(zhì)控微球為標記有雞IgY或兔IgG的質(zhì)控微球。
[0011]作為優(yōu)選，所述硝酸纖維素膜上的檢測線和標記墊上采用的豬藍耳抗原均為滅活豬藍耳病毒抗原、豬藍耳疫苗或豬藍耳重組結(jié)構(gòu)蛋白M蛋白、N蛋白和GP5;所述硝酸纖維素膜上質(zhì)控線采用的羊抗雞抗體為羊抗雞IgY的IgG或者羊抗兔lgG。
[0012]作為優(yōu)選，所述檢測微球和質(zhì)控微球均為表面帶有羥基或氨基的硅膠微球或聚苯乙烯微球。
[0013]作為優(yōu)選，所述標記在生物原料上的鑭系熒光微球的鑭系熒光是指鑭系元素Eu、Sm或Tb與β— 二酮配基產(chǎn)生的熒光。其發(fā)光效率高、吸收光譜寬、發(fā)射光譜很窄、斯特克斯位移寬，使其熒光光譜分析的靈敏度很高。
[0014]作為優(yōu)選，所述樣品墊為檢測血清或血漿的樣品墊，或者為檢測全血的樣品墊。
[0015]作為優(yōu)選，本檢測卡利用豬血樣品中豬藍耳病毒抗體、豬藍耳病毒抗原的標記物和硝酸纖維素膜上包被豬藍耳病毒抗原通過雙抗原夾心法來檢測豬血樣本中豬藍耳病毒抗體。
[0016]作為優(yōu)選，本檢測卡為定量層析檢測卡，它是通過檢測儀檢測層析后檢測卡的檢測線和質(zhì)控線發(fā)出的熒光信號，然后根據(jù)此批檢測卡的IC卡儲存的標準曲線，再由檢測線和質(zhì)控線的熒光信號從標準曲線計算出待檢物的濃度。
[0017]名詞解釋:
[0018]羊抗雞IgY的IgG:羊抗雞IgY的免疫球蛋白G;
[0019]羊抗兔IgG:羊抗兔IgG的免疫球蛋白G;
[0020]雞IgY:雞卵黃抗體；
[0021]兔IgG:兔免疫球蛋白G;
[0022]抗豬RBC:抗豬紅細胞表面蛋白抗體。
[0023]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本實用新型的有益效果在于:靈敏度高，檢測的批內(nèi)差及批間差小，有較好的重復(fù)性，性能穩(wěn)定，既可檢測全血樣本，也可以檢測血清和血漿樣本，與BVDV(牛病毒性腹瀉病毒)、BDV邊界病毒、PRRSV(豬生殖與呼吸綜合征病毒)、PCV豬圓環(huán)病毒、PPV(豬細小病毒)、PRV(豬輪狀病毒)等抗體沒有交叉反應(yīng)。可實現(xiàn)豬藍耳病毒抗體現(xiàn)場快速檢測，具有較高的實用價值。
【附圖說明】
[0024]圖1是本實用新型的結(jié)構(gòu)不意圖；
[0025]圖2是圖1中檢測卡本體的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0026]圖3是圖2的俯視圖；
[0027]圖4是豬藍耳病毒抗體檢測標準曲線。
【具體實施方式】
[0028]下面結(jié)合具體實施例和附圖對本實用新型作進一步的說明。
[0029]如圖1至圖4所示，一種豬藍耳病毒抗體檢測卡，包括裝配在外殼10內(nèi)的檢測卡本體，所述檢測卡本體包括PVC底板I，在PVC底板I上從左至右依次粘貼樣品墊2、標記墊3、硝酸纖維素膜4和吸水紙5，且樣品墊2的右端搭在標記墊3的左端上，標記墊3的右端搭在硝酸纖維素膜4的左端上，吸水紙5左端搭在硝酸纖維素膜4的右端上。所述硝酸纖維素膜4上包被豬藍耳抗原為檢測線6，包被羊抗雞抗體為質(zhì)控線7。在外殼10上對應(yīng)樣品墊2開設(shè)加樣孔11，對應(yīng)硝酸纖維素膜4上的檢測線6和質(zhì)控線7開設(shè)視窗孔12。
[0030]所述硝酸纖維素膜4上質(zhì)控線7采用的羊抗雞抗體為羊抗雞IgY的IgG或者羊抗兔IgG0
[0031 ]所述標記墊3由載體基層和標記物組成，標記物為載體基層上噴涂鑭系熒光檢測微球和鑭系熒光質(zhì)控微球形成的一層膜，且檢測微球為標記有豬藍耳抗原的微球，質(zhì)控微球為標記有雞IgY或兔IgG的質(zhì)控微球。所述檢測微球和質(zhì)控微球均為表面帶有羥基或氨基的娃膠微球或聚苯乙稀微球。并且，檢測微球和質(zhì)控微球的粒徑均為50?500nm。
[0032]所述硝酸纖維素膜4上的檢測線6和標記墊3上采用的豬藍耳抗原均為滅活豬藍耳病毒抗原、豬藍耳疫苗或豬藍耳重組結(jié)構(gòu)蛋白M蛋白、N蛋白和GP5。