專利名稱：唐氏綜合征檢測、分析方法及檢測中所用芯片的制備方法
唐氏綜合征檢測、分析方法及檢測中所用芯片的制備方法技術領域：
本發(fā)明屬于生物醫(yī)學研究及臨床應用領域，具體涉及一步檢測法在唐氏綜 合征檢測、分析方法中的應用及檢測中所用芯片的制備方法。背景技術：
唐氏綜合征又稱21三體綜合征，是常見的染色體異常病之一，發(fā) 病率約為1 /750。目前，對于唐氏綜合征的檢測采用的是對母體血清 中兩項標志物一曱胎蛋白(AFP)和絨毛膜促性腺激素(HCG)的指標進 行篩查，通過對AFP和HCG的定量測定和數(shù)據(jù)結果分析，計算出唐氏綜 合征的危險系數(shù)。
早在20多年前就開始出現(xiàn)了產(chǎn)前篩查的方法，從那以后得到逐步發(fā)展。直 到20世紀80年代初，母親的年齡和病史是可提供進行唐氏綜合征篩查的唯一 方法。這一狀況自20世紀80年代中期開始發(fā)生了改變，當時Cuckle證明，把 母親的血清AFP和HCG與母親年齡結合起來，可以從實質上提高檢測結果的準 確率。
目前，在唐氏檢測方法中，對母體血清中AFP和HCG這兩個指標進行檢 測的主要方法是ELISA板檢測法。ELISA板檢測法檢測的基礎是抗原或抗體的 固相化及抗原或抗體的酶標記。結合在固相載體-ELISA板表面上的AFP和HCG 的抗原或抗體仍保持其免疫學活性，酶標記反應物的抗原或抗體既保留其免疫 學活性，又保留酶的活性。在測定時，首先，將待檢測標本與固相載體-ELISA 板表面上的AFP和HCG的抗原或抗體起反應；其次，用洗滌的方法使固相載體 -ELISA板上形成的AFP和HCG抗原抗體復合物與液體中的其他物質分開；最后， 加入酶標記的抗原或抗體，也通過反應而結合在固相載體-ELISA板上。此時固 相載體上的酶量與待檢測標本中受檢物質的量呈一定的比例。加入底物后，底 物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質的量直接相關，可根據(jù) 呈色的深淺進行定性或定量分析。
ELISA板檢測存在的缺陷在于對需要檢測的母體血清中AFP和HCG這兩項 指標必須分兩次進行才企測。操:作過程中必須對AFP和HCG這兩個項目按不同比 例分別稀釋血清，這樣就使操作過程復雜繁瑣，在對母體血清中AFP和HCG這兩個項目進行檢測過程中需要進行重復性檢測，逸就導妖了檢測過程需要耗費
大量時間。檢測一人份就需要耗時6小時、同時檢測IO人份耗時8小時、同時 檢測20人份耗時10小時，這樣就影響了檢測的效率，而且每次必須自己配置 標準品并制定標準曲線再通過標準曲線進行計算得出檢測結果，不能對檢測結 果中AFP和HCG這兩個檢測項目同時實現(xiàn)聯(lián)合定量分析，對于一僉測結果也不能 實現(xiàn)精確的判斷。
發(fā)明內容
為了解決現(xiàn)有技術中的存在的檢測效率低并且不能實現(xiàn)對AFP和HCG這兩 個檢測項目進行同時聯(lián)合定量檢測的問題，本發(fā)明提供了一種運用一步檢測法 結合唐氏綜合征;險測方法。
為了解決現(xiàn)有技術中的存在的檢測效率低、不能對4全測結果中AFP和HCG 這兩個檢測項目實現(xiàn)聯(lián)合定量分析并對檢測結果進行準確判斷的問題，本發(fā)明 提供了 一種對唐氏綜合征檢測結果的分析方法。
為了配合唐氏綜合征檢測方法的進行，本發(fā)明提供了一種唐氏綜合征檢測 中所用芯片的制備方法。
本發(fā)明解決第一個技術問題所采用的方案是提供一種唐氏綜合征檢測方 法，該方法包括步驟第一步、將待檢測標本與酶結合物混合，形成甲胎蛋白 -甲胎蛋白酶標抗體復合物和絨毛膜促性腺激素-絨毛膜促性腺激素酶標 抗體復合物；第二步、將第一步中所述甲胎蛋白-甲胎蛋白酶標抗體復合物和 絨毛膜促性腺激素-絨毛膜促性腺激素酶標抗體復合物滴加到檢測芯片上， 進行反應；第三步、將底物滴加到所述第二步已完成反應的芯片上，進行顯色 處理。
根據(jù)本發(fā)明的一優(yōu)選實施例上述第二步又包括子步驟首先、用洗滌液 潤洗所述檢測芯片；其次、將甲胎蛋白-曱胎蛋白酶標抗體復合物和絨毛膜 促性腺激素-絨毛膜促性腺激素酶標抗體復合物滴加到檢測芯片上，進行反 應；最后、用洗滌液洗滌上一步反應完成后的芯片，去除未與所述芯片上甲胎 蛋白抗體和絨毛膜促性腺激素抗體相結合的物質。
根據(jù)本發(fā)明的一優(yōu)選實施例所述3000ml洗滌液中包括硼酸鹽緩沖液 950ml-1200ml、吐溫-20 (原倍)38 ml-42ml和去離子水1700ml-2050ml。
根據(jù)本發(fā)明的一優(yōu)選實施例所述酶結合物通過酶標抗體稀釋液稀釋甲胎 蛋白抗體酶標抗體原液和絨毛膜促性&長激素抗體酶標抗體原液制成，稀釋后 使得曱胎蛋白定量化檢測范圍為10—150ng/ml、絨毛膜促性腺激素定量化檢測范圍為l一12ug/ml。
根據(jù)本發(fā)明的一優(yōu)選實施例所述500mL酶標抗體稀釋液配制包括含有 0. 14 - 0. 16M磷酸鹽緩沖液(PH7. 4 ) 500 ml、小牛血清白蛋白20. 00 g - 30. OOg、 濃度為1%-5%石克柳汞5 ml。
根據(jù)本發(fā)明的一優(yōu)選實施例所述底物包括底物A和底物B，通過所述底物 A與所述底物B液以15: 1的比例混合而成；其中，所述底物A包括0. 2mo1/1 三羥曱基氨基甲烷鹽酸鹽緩沖液與0. 003g/ml l-萘酚溶液，通過940 - 960: 55-65的體積配比，充分攪拌，混合均勻制成；所述底物B中過氧化氫在滅菌水 中的終濃度為0. 15% —0. 25°/。，并攪拌均勻。
本發(fā)明解決第二個技術問題所采用的方案是提供一種唐氏檢測結果分析 方法，該方法包括步驟第一步、進行所述芯片上信息的采集、分析；第二步、 輸入待檢測孕婦檢測所需數(shù)據(jù)；第三步、根據(jù)公式
Risk = Risk—A伊Risk—Hcg *——^——計算唐氏檢測風險數(shù)值。
Risk—Age
根據(jù)本發(fā)明一優(yōu)選實施例所述第二步中待檢測孕婦檢測所需數(shù)據(jù)指標包 括末次月經(jīng)時間、孕婦年齡、孕周、胎數(shù)、孕婦體重和既往病史。
根據(jù)本發(fā)明一優(yōu)選實施例所迷第三步中
， 一1*( afjj-mean — a^>*0.74 )
曱胎蛋白風險Risk一Afp-^5j^A
a/2*;t *std — afp
1 *f afp-mean — a^p ) * e 5 L std —a印 J
1*( licg-niean —1，c,2 08丫 a 2 、std Vicg J
絨毛膜促性腺激素風險Risk一Hcg:^承d
V^^*std—hcg
1 " hcg-mean — hcg 、
2 L std hcg 乂
年齡風險<formula>formula see original document page 6</formula>本發(fā)明解決第三個技術問題所采用的方案是提供一種檢測中所用芯片的制 備方法，該方法包括步驟第一步、將所述芯片上的膜面用去離子水浸泡5-10 分鐘,取出晾干；第二步、將曱胎蛋白抗體和絨毛膜促性腺激素抗體用磷酸鹽緩沖液稀釋到l. Omg/ml;第三步、通過點樣裝置將所述第二步稀釋后的甲胎 蛋白抗體和絨毛膜促性腺激素抗體固定在經(jīng)所述處理后的所述膜面上；第四 步、將所述芯片膜組裝成芯片使用。
本發(fā)明的有益效果是與傳統(tǒng)檢測方法比較，避免了對孕婦血清中項目指 標的連續(xù)反復檢測，實現(xiàn)了AFP、 HCG兩種項目指標的一次性檢測完成，大大縮 短檢驗和分析的時間，在保障檢測準確性的同時，提高了臨床檢驗的效率；檢 測結果采取數(shù)據(jù)化顯示，定性、半定量和定量相結合，并且具備強大的數(shù)據(jù)儲 存和調用統(tǒng)計功能，操作高度自動化，簡便快速，10-20分鐘可以完成檢測， 顯著的提高了檢測效率，并且可方便進行單人份操作。

圖l.是本發(fā)明唐氏綜合征檢測、分析方法及檢測中所用芯片的制備方法中 唐氏綜合征檢測所用芯片制備方法流程圖。 圖2.是唐氏綜合征^f企測方法流程圖。 圖3.是唐氏綜合征檢測結果分析過程流程圖。 圖4.是AFP理想檢測曲線圖。 圖5.是HCG理想檢測曲線圖。
圖6.是根據(jù)實驗得到的AFP、 HCG實驗結果數(shù)據(jù)圖。
圖7.是根據(jù)實驗得到的AFP檢測曲線圖。
圖8.是根據(jù)實驗得到的HCG檢測曲線圖。
圖9.是芯片閱讀分析裝置數(shù)據(jù)庫存儲的AFP標準曲線檢測數(shù)據(jù)圖。
圖10.芯片閱讀分析裝置數(shù)據(jù)庫存儲的AFP標準曲線圖。
圖ll.AFP檢測曲線方程驗證數(shù)據(jù)圖。
圖12.芯片閱讀分析裝置數(shù)據(jù)庫存儲的HCG標準曲線^r測數(shù)據(jù)圖。 圖13.芯片閱讀分析裝置數(shù)據(jù)庫存儲的HCG標準曲線圖。 圖14. HCG檢測曲線方程驗證數(shù)據(jù)圖。 圖15.底物反應原理圖。
具體實施方式
下面結合附圖和實施例對本實用新型進一步說明。
請參閱圖l，本發(fā)明唐氏綜合征檢測、分析方法及檢測中所用芯片的制備方法 中唐氏綜合征檢測所用芯片制備方法流程圖。如圖1所示，唐氏綜合征檢測所用 芯片制備方法包括步驟首先、將制備檢測芯片時所用的芯片反應膜-NC膜用 去離子水浸泡5-10分鐘，浸泡好撈出晾干。根據(jù)生產(chǎn)芯片的規(guī)格型號，在裁膜 機上進行剪裁；其次、將AFP單克隆抗體和HCG單克隆抗體分別按抗體給定的濃度用磷酸鹽(PBS)稀釋液稀釋到l. Omg/ral;再;吏、將稀釋好的AFP單克隆抗體 和HCG單克隆抗體放入市場上購買的芯片點樣裝置，將AFP單克隆抗體和HCG單克 隆抗體點到NC膜上并進行固定，將抗體固定在NC膜上后，采用含O. 1%-0. 5W、牛 血清白蛋白(BSA)的封閉液進行封閉處理；最后、將經(jīng)過固定抗體前、后處理 過的NC膜片按順序裝配到殼體內，整個芯片由殼體、NC膜片、吸水材料組成。
在運用唐氏綜合征檢測芯片進行唐氏檢測的過程，可以參閱圖2,本發(fā)明唐 氏綜合征檢測、分析方法及檢測中所用芯片的制備方法中唐氏綜合征檢測方法 流程圖。如圖2所示，該檢測方法包括步驟
第一、將待檢測標本與酶結合物進行混合，使待檢測標本-孕婦血清中的 待^r物質AFP與HCG同各自相對應的酶標抗體充分結合，形成AFP—AFP酶標抗 體復合物和HCG—HCG酶標抗體復合物。在待檢測標本與酶結合物混合過程中， 通過酶標抗體稀釋液稀釋AFP和HCG兩種酶標抗體原液，稀釋后使得對AFP定 量化檢測范圍為10—150ng/ml、 HCG定量化檢測范圍為l一12ug/ml。 其中酶標抗體稀釋液的配置包括PBS、 BSA、硫柳汞，例如，在本實施例中，酉己 置5 00mL酶標抗體稀釋液，需要O. 15MPBS ( PH7. 4 ) 500 ml、 25.00 g BSA、濃 度為1%-5。/。的碌u柳汞5 mL。其中，0.15M PBS ( PH7. 4 )溶液的配制包括通過 將0. 24 g KH2P04、 2. 90 g Na2HP04 . 12H20、 8. 00 g NaCl和0. 20 g KC1，加去 離子水定容至1000mL,用HC1溶液調PH值至7. 4左右后再用500mL試劑瓶分裝， 高壓滅菌25min。
第二步、將第一步中待檢測標本與酶結合物的混合體滴加到檢測芯片的檢 測窗口內，該混合體在下滲的過程中會同檢測芯片上的AFP抗體和HCG抗體充 分接觸，并發(fā)生如下反應AFP—AFP酶標抗體復合物同4全測芯片上的AFP抗體 結合，形成AFP固相抗抗體一AFP—AFP酶標抗體復合物；HCG—HCG酶標抗體復 合物同沖企測芯片上的HCG抗體結合，形成HCG固相抗抗體一HCG—HCG酶標抗體。 為了達到更好的反應效果，在進行反應前應用洗滌液潤洗固定有AFP抗體和HCG 抗體的NC膜面，反應完成后，用洗滌液再次清洗所述NC膜面，去除未與所述 NC膜上抗體相結合的物質。此時檢測芯片上帶有的酶量與標本中受檢物質的量 呈一定的相關。生物芯片所用的洗滌液包括硼酸鹽緩沖液(TBE )、吐溫-20 (Tween-20)和去離子水。各成分的配比例如在本實施例中3000ml洗滌液各 成分的含量為硼酸鹽緩沖液1000ml、 Tween-20 (原倍)40ml和去離子水 1960ml,上述物質經(jīng)充分混合攪拌10min，分裝后置于4。C環(huán)境下保存。其中TBE緩沖液的配制過程包括稱量54g TrisBase，倒入r000ifll燒杯；稱量27. 5克 硼酸，倒入1000ml燒杯；往1000ml燒杯中加入800ml去離子水，通過磁力攪拌 器攪拌5分鐘，使得TrisBase和硼酸充分溶解到去離子水中；再加入10ml0.， 乙二胺四乙酸納(EDTA)溶液；將上述混合溶液再倒入1000 ml量筒通過去離 子水定容至1000ml,利用磁力攪拌器攪拌；最后、將溶解混合均勻后的液體倒入 1 OOOml磨口瓶，即可蓋上瓶蓋備用。EDTA溶液配制過程包括第 一步、稱量46. 5 3g 乙二胺四乙酸二鈉，倒入500ml燒杯；第二步、往燒杯中加入200ml去離子水， 通過^f茲力拌器進行攪拌使得乙二胺四乙酸二鈉溶解到去離子水中；第三步、填 加NaOH將上步中經(jīng)過混合后溶液的PH值調至8. 0;第四步、溶解混勻后液體倒 入500 ml量筒內通過去離子水將上述混合溶液定容至250ml;第五步、定容后 液體倒回500ml燒杯,磁力攪拌器攪拌；第六步、將第五步中混勻均勻的液體倒 入500ral刻度瓶，蓋緊瓶蓋；最后，將EDTA溶液放置于4°C—8°C的環(huán)境下存放 備用。
唐氏綜合征檢測方法中的最后一步是將酶催化底物滴加到已完成反應的芯 片上，進行顯色處理，根據(jù)顏色反應的程度進行待檢物質AFP與HCG的定量分 析。底物的反應原理圖可以參閱圖15,如圖15所示，其中l(wèi)-萘酚為供氫體， HA為受氫體，在辣根過氧化物酶(HRP )的催化作用下兩者迅速發(fā)生氧化還原 反應，使檢測芯片的NC膜上固定的抗體點表面上產(chǎn)生大量的藍紫色的1-萘酚多 聚體沉淀。顏色反應的程度反映檢測芯片上辣根過氧化物酶(HRP)量的多少， 而檢測芯片的NC膜上帶有的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的相關，因此就 可以達到定性或定量分析的目的。在上述底物反應的過程中所用到的底物包括 底物A和底物B，所述底物是通過將所述底物A與所述底物B液以15: 1的 比例混合而成。其中，底物A的成分包括Tris-HC1緩沖液和l-萘酚，各成 分的配比為0. 2molA Tris-HC1 (PH7. 4)緩沖液與0. 003g/ml 1-萘酚溶液的體 積配比為950: 60。在本實施例中，在配置底物A時，釆用在0. 2mol/l Tris-1IC1 (P1I7. 4)緩沖液950ml中填加0. 003g/ml 1-萘酚溶液60ml經(jīng)充分攪拌混勻,分 裝后置于4t:環(huán)境下避光保存，即可獲得底物A。其中底物A的組分中0. 2mol/l Tris-HC1 ,. 4)緩沖液的配制方法是通過在12. 14 g的Tris-base中填加去 離子水約450 ml,經(jīng)過攪拌混勻后，加入高濃度HC1將液體的PH值調至7. 4, 再攪拌均勻，倒入500ml量筒中，用去離子水定容到500ml,倒回燒杯內攪拌均 勻后4保存?zhèn)溆谩?. 003g/mll-萘酚的配制方法是通過在0. 15 g的1-萘酚中用 乙醇定容至50ml,液體混合均勻后將液體置于4。C的避光環(huán)境下密閉保存?zhèn)溆谩５孜顱的成分包括HA和滅菌水，各成分配比為HA在滅菌水中的終濃度為 0.15% —O. 25%。制備方法，在本實施例中采用將濃度在30%的H202 450jil-750 用滅菌水定容到90ml，待攪拌混勻后，可以將溶液分裝到4。C環(huán)境下，進 行保存。
相對于常規(guī)的芯片檢測方法，本發(fā)明采取的是 一 步檢測法的新模式對 AFP和HCG進行檢測。即將AFP、 HCG的標記抗體直接與待測標本混合， 期間通過 一 步法來提高檢測靈敏度。
采用一步法檢測模式兩者的理想檢測曲線，其中AFP理想曲線如 圖4所示、HCG理想曲線如圖5所示。
實驗中用到的試劑包括酶標稀釋液；酶標抗體；固定有AFP、 HCG 單抗的芯片；洗滌液；底物；PBS和標準品。實驗的操作步驟包括 首先、用PBS將AFP標準品分梯度分別稀釋成10 ng/ml、 20 ng/ml、 30 ng/ml、 4G ng/ml、 80 ng/ml和160 ng/ml;用PBS將HCG標準品 分別稀釋成lug/ml、 1.5ug/ml、 2ug/ml、 2. 5ug/ml、 4ug/ml和5ug/ml。其次、 將酶標抗體濃度稀釋至使用濃度；最后、按一步法同時進行檢測。上 述實驗得到的AFP、 HCG實驗結果數(shù)據(jù)可以參閱圖6。針對上述實驗數(shù)據(jù)得出 如圖7所示的AFP ;f金測曲線圖和如圖8所示HCG檢測曲線圖。 通過上面附圖可以看出實驗結果與理論推導的結果是吻合的。 在本發(fā)明中采取了 一步檢測法的新模式對母體血清中的AFP和 HCG的含量進行纟全測。將HCG、 AFP的標記抗體直接與4寺測標本混合， 將這樣的反應模式運用到唐氏綜合征檢測中，可以明顯的提高檢測的 效率。
對于芯片反應結果的分析過程可以參閱圖3本發(fā)明唐氏綜合征檢測、分析 方法及檢測中所用芯片的制備方法中唐氏綜合征檢測結果分析過程流程圖。如 圖3所示，該檢測方法包括步驟首先、將需要分析的芯片放入芯片閱讀分析 裝置中，通過芯片閱讀裝置開始進行芯片上數(shù)據(jù)信息的采集并進行分析，得到 生物芯片上AFP和HCG的灰度值，再與芯片閱讀分析裝置數(shù)據(jù)庫存儲的標準曲 線參數(shù)，通過標準曲線方程進行計算，得到標本的濃度值。
芯片閱讀分析裝置數(shù)據(jù)庫存儲的標準曲線的制作過程包括首先、用PBS ^夸AFP的才示準品分另'J稀釋成10 ng/ml、 20 ng/ml 、 30 ng/ml、 40 ng/ml、 60 ng/ml 、 80 ng/tnl、 120ng/ml 、 160 ng/ml。用陰性血清將HCG才示準品分另寸稀釋成0. 5 ug/ml 、 lug/ml 、 2 ug/ml 3ug/ml、 4ug/ml、 6 ug/ml、 8 ug/ml、 12 ug/ml;其次、將酶標抗體濃度稀釋至最佳使 用濃度，按一步法進行檢測。檢測完成后讀值，檢測結果數(shù)據(jù)值可以 參閱圖9芯片閱讀分析裝置數(shù)據(jù)庫存儲的AFP標準曲線檢測數(shù)據(jù)圖。根據(jù)如圖 9所示的檢測數(shù)值，得到如圖10所示的芯片閱讀分析裝置數(shù)據(jù)庫存儲的AFP標 準曲線圖，該圖的曲線方程為Y=L 0079X-5. 9804 (方程中X代表灰度值， Y代表AFP濃度)。
對方程進行驗證，取前期實驗中所做的結果經(jīng)計算對比，結果可 以參閱如圖11所示的AFP檢測曲線方程驗證數(shù)據(jù)圖。由圖11可以看 到該AFP曲線方程公式能準確的計算出血清中所含AFP的含量。
HCG用陰性血清稀釋后檢測結果數(shù)據(jù)可以參閱圖U,根據(jù)檢測數(shù)值， 得到芯片閱讀分析裝置數(shù)據(jù)庫存儲的HCG標準曲線，如圖13所示，該曲線的 方程為Y = 45. 54e °。衡(方程中X代表灰度值，Y代表HCG濃度)。隨機 抽取試劑盒檢測過的孕婦血清，即為已知HCG濃度的血清，用芯片進 行檢測驗證，所得數(shù)據(jù)結果經(jīng)計算對比可得如圖14所示的HCG標準曲 線方程驗證數(shù)據(jù)圖。通過該圖中數(shù)據(jù)可見，該HCG標準曲線方程公式也 能準確的計算出血清中所含HCG的含量。
檢測標本中AFP和HCG濃度的換算；將待測標本通過芯片閱讀裝置進行檢 測，根據(jù)芯片閱讀裝置凄t據(jù)庫內存儲的標準曲線，系統(tǒng)軟件會自動計算出檢測 標本中AFP和HCG的含量。同時，檢測標本中AFP和HCG的濃度值會被記錄并 判斷是否影響芯片閱讀裝置的數(shù)據(jù)庫。如有影響，則將新的數(shù)據(jù)補充到原數(shù)據(jù) 庫內，該次的檢測結果便可以作為下一次檢測的比對數(shù)據(jù)庫資料，影響下一次 的檢測結果。如沒有影響，則仍繼續(xù)用原來數(shù)據(jù)庫內存儲的數(shù)據(jù)資料。在得到 標本的濃度值后，芯片閱讀裝置的系統(tǒng)軟件會把濃度值與芯片閱讀裝置數(shù)據(jù)庫 中存儲的數(shù)據(jù)進行比較得到該待檢測標本中AFP和HCG兩指標的中位數(shù)，再 把該中位數(shù)代入計算公式中計算，得到風險值AFP和HCG兩個指標的風險數(shù)值。 同樣，待檢測標本中AFP和HCG兩指標的中位數(shù)及每一次檢測過程的中位值也 會被記錄下來，并自動生成分布圖，作為下一次檢測的比對數(shù)據(jù)庫資料。
然后，芯片閱讀分析裝置的軟件系統(tǒng)會提示檢測人員輸入待檢測孕婦的相 關信息，這些信息包括末次月經(jīng)時間、孕婦年齡、孕周、胎數(shù)和孕婦體重等信息
根據(jù)風險值AFP和HCG這兩個指標的計算計算出AFP的風險值和HCG的風 險值。AFP風險值和HCG風險值的計算公式為
<formula>formula see original document page 12</formula>Afp風險的計算公式為Risk—Afp-^^d-afp
V^* ;r * std 一 a*
afp-mean — af^、 承 2 、ski— a p 乂
1 / hcg-mean — hcg*2 08 )
2 Lstd —Iicg 」
Hcg風險的計算公式為RiSk—HCg=^*Std-hcg
1 J licg-mean 一hcg ) *e H std一hcg 乂
V2*;r *stdhcg
年齡風險指標的計算公式為Risk—Age《=6327=(。 95)，因為，芯片閱
讀分析裝置對待檢測芯片分析的過程，是根據(jù)中國正常人群妊娠中期(孕14-20 周)婦女血清標本中AFP、 HCG含量數(shù)據(jù)庫，計算AFP和HCG的正常人群中位數(shù)。 在定量分析計算出標本AFP、 HCG實際含量后，綜合孕婦末次月經(jīng)時間、孕婦年 齡、孕周、胎數(shù)和孕婦體重和既往病史等信息得到唐氏綜合征的危險系數(shù)的。
唐氏綜合征檢測結果分析過程的最后一步是設備會針對采集到的芯片信 息，結合待檢測孕婦的相關信息對唐氏風險根據(jù)公式
Risk = Risk—A伊Risk—Hcg*~~^~~ ，進行計算，得到最終的唐氏風險，并判斷結果。
Risk—Age
唐氏綜合征危險系數(shù)的臨界值為1 /27 5 ,當芯片閱讀裝置最后計算出來 的危險系數(shù)大于該臨界值，系統(tǒng)會建議受檢者做產(chǎn)前診斷，如抽取羊
水，做羊水細胞培養(yǎng)染色體核型分析等；當危險系數(shù)小于臨界值，則 胎兒為唐氏綜合征的危險較小，可以繼續(xù)妊娠。
上述的詳細描述僅是示范性描述，本領域技術人員在不脫離本發(fā)明所保護 的范圍和精神的情況下，可根據(jù)不同的實際需要設計出各種實施方式。
權利要求
1. 一種唐氏綜合征檢測方法，其特征在于所述唐氏綜合征檢測的方法包括步驟a1.將待檢測標本與酶結合物混合，形成甲胎蛋白-甲胎蛋白酶標抗體復合物和絨毛膜促性腺激素-絨毛膜促性腺激素酶標抗體復合物；a2.將a1步所述甲胎蛋白-甲胎蛋白酶標抗體復合物和絨毛膜促性腺激素-絨毛膜促性腺激素酶標抗體復合物滴加到檢測芯片上，進行反應；a3.將底物滴加到所述a2已完成反應的芯片上，進行顯色處理。
2. 根據(jù)權利要求1所述的唐氏綜合征檢測方法，其特征在于所述a2步 又包括子步驟a21.用洗滌液潤洗所述^r測芯片；a22.將曱胎蛋白-曱胎蛋白酶標抗體復合物和絨毛膜促性腺激素-絨 毛膜促性腺激素酶標抗體復合物滴加到檢測芯片上，進行反應；a23.用洗滌液洗滌所述a22步反應完成后的芯片，去除未與所述芯片上甲 胎蛋白抗體和絨毛膜促性腺激素抗體相結合的物質。
3.根據(jù)權利要求2所述的唐氏綜合征檢測方法，其特征在于所述3000ml洗滌液中包括硼酸鹽緩沖液950ml-l200ml、吐溫-20 (原倍)38 nil-"ml 和去離子水170(M-2050ml。
4. 根據(jù)權利要求1所述的唐氏綜合征檢測方法，其特征在于所述酶結合 物通過酶標抗體稀釋液稀釋曱胎蛋白酶標抗體原液和絨毛膜促性腺激素酶 標抗體原液制成，稀釋后使得甲胎蛋白定量化檢測范圍為10—150ng/ml、 絨毛膜促性腺激素定量化檢測范圍為l一12ug/ml。
5. 根據(jù)權利要求4所述的唐氏綜合征檢測方法，其特征在于所述酶標抗 體稀釋液500mL的量配制包括含有0. 14 — 0. 16M磷酸鹽緩沖液(PH7. 4 )500 ml、 小牛血清白蛋白5.00 g-10. 00g、濃度為1%-5°/ 硫柳汞5 ffll。
6. 根據(jù)權利要求1所述的唐氏綜合征檢測方法，其特征在于所述底物包 括底物A和底物B,通過所述底物A與所述底物B液以15: 1的比例混合而 成；其中，所述底物A包括0. 2rao1/1三羥甲基氨基曱烷鹽酸鹽緩沖液與 0. 003g/ml 1-萘酚溶液，通過940 - 960: 55-65的體積配比，充分攪拌，混合 均勻制成；所述底物B中過氧化氫在滅菌水中的終濃度為0.15% —O. 25%,并攪 拌均勻。
7. —種唐氏綜合征檢測結果分析方法，其特征在于所述唐氏綜合征檢測結果分析包括步驟bl.對反應完成后的所述芯片上信息的采集、分析； b2.輸入待檢測孕婦檢測所需數(shù)據(jù)指標；b3.根據(jù)公式<formula>formula see original document page 3</formula>計算唐氏檢測風險數(shù)值。
8. 根據(jù)權利要求7所述的唐氏檢測結果分析方法，其特征在于所述b2 步中待檢測孕婦檢測所需數(shù)據(jù)指標包括末次月經(jīng)時間、孕婦年齡、孕周、胎數(shù)、 孕婦體重和既往病史。
9. 根據(jù)權利要求7所述的唐氏4企測結果分析方法，其特征在于所述b3中曱胎蛋白風險<formula>formula see original document page 3</formula>絨毛膜促性腺激素風險<formula>formula see original document page 3</formula>年齡風險<formula>formula see original document page 3</formula>°
10. —種唐氏綜合征檢測中所用芯片的制備方法，其特征在于所述芯片的制備方法包括步驟cl.將所述芯片上的膜面用去離子水浸泡5-10分鐘，取出晾干； c2.將甲胎蛋白抗體和絨毛膜促性腺激素抗體用磷酸鹽緩沖液稀釋到 1. Omg/ml;c3.通過點樣裝置將所述c2步稀釋后的曱胎蛋白抗體和絨毛膜促性腺激 素抗體固定在經(jīng)所述c 1處理后的所述膜面上； c4.將所述芯片膜組裝成芯片使用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一步檢測法在唐氏綜合征檢測、分析方法中的應用及檢測中所用芯片的制備方法。是通過將待檢測標本與酶結合物相混合，再將此混合物與檢測芯片上的甲胎蛋白抗體和絨毛膜促性腺激素抗體進行反應，通過添加辣根過氧化物酶催化底物實現(xiàn)顯示反應，并通過芯片閱讀裝置對芯片反應結果進行數(shù)據(jù)采集、分析的一種唐氏綜合征的檢測方法。該方法與傳統(tǒng)檢測方法比較，避免了對孕婦血清中各項目指標的連續(xù)反復檢測，實現(xiàn)了多種項目指標的一次性檢測完成，大大縮短檢驗和分析的時間，在保障檢測準確性的同時，提高了臨床檢驗的效率。
文檔編號G06F19/00GK101285837SQ20071007400
公開日2008年10月15日 申請日期2007年4月10日 優(yōu)先權日2007年4月10日
發(fā)明者吳玲智, 王小明, 王榮娥, 許元峰, 謝德康, 黃列波 申請人:深圳欣康基因數(shù)碼科技有限公司