專利名稱：：磁流體的制備方法和磁性殼聚糖微球的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明是關(guān)于磁流體的制備方法和種磁性殼聚糖微球的制備方法。
背景技術(shù)：
：殼聚糖是一種無毒且具有較好生物親和性的堿性多糖，殼聚糖已被廣泛應(yīng)用于固定化酶領(lǐng)域。固定化酶是指利用物理吸附或化學(xué)結(jié)合法將自由酶固定到載體上以提高酶的操作穩(wěn)定性和反復(fù)回收利用酶的技術(shù)。殼聚糖載體表面本身帶有正電，對酶蛋白具有一定的吸附作用，再加上利用二醛對殼聚糖載體進行表面處理后，造成殼聚糖載體表面攜帶大量醛基活化基團，這些醛基活化基團與酶蛋白表面的氨基共價結(jié)合，從而獲得固定化酶。這里，以戊二醛處理的殼聚糖為例將殼聚糖固定化酶的過程表示如下OHC(CH^CHO-NH2NH2—E-N==CH(CH2)3CHOCarrierCarrier-N==CH(CH2)3CH==N—Eearner其中，Carrier表示殼聚糖微球載體，E表示蛋白酶。為了使酶的回收更加便利，可以將殼聚糖載體制成磁性殼聚糖微球載體?？梢酝ㄟ^使殼聚糖微球含有磁性金屬或金屬氧化物(如鐵鈷鎳及其氧化物)而具有磁性。由于鐵磁體相對廉價且其納米顆粒制備技術(shù)比較成熟，所以通常使用鐵磁體來制備磁性殼聚糖微球。例如，任廣智、李振華和何炳林公開了一種磁性殼聚糖微球的制備方法，該方法主要包括(1)將400ml的二氯化鐵(0.123mol/L)-三氯化鐵溶液(0.103mol/L)與160ml濃度為5mol/L的氫氧化鈉溶液快速混合，劇烈攪拌10min，得到油狀的磁流體懸浮液，以懸液狀態(tài)保存；(2)在裝有電動攪拌裝置的250ml三口瓶中加入溶有一定量Span-80的甲苯和四氯化碳的混合溶劑，然后加入混有磁流體的殼聚糖乙酸溶液，調(diào)節(jié)攪拌速度，待水相均勻后加入一定量25%的戊二醛溶液作為交聯(lián)劑，在4(TC反應(yīng)60min;(3)反應(yīng)結(jié)束后，用磁鐵將微球分離出來，依次用蒸餾水、丙酮反復(fù)洗滌，6(TC真空干燥，得到磁性殼聚糖微球。(任廣智，李振華，何炳林.磁性殼聚糖微球用于脲激酶的固定化研究I.磁性殼聚糖微球的制備和表征.離子交換與吸附,2000,16(4):304-310)。使用該方法得到的磁流體的磁性殼聚糖微球不易于回收，并且使用該磁流體的磁性殼聚糖微球容易聚集，從而限制了磁性殼聚糖微球作為固定化酶載體的應(yīng)用。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的第一個目的是為了克服含有現(xiàn)有技術(shù)制備得到的磁流體的磁性殼聚糖微球存在不易回收以及容易聚集的缺點，提供一種使含有該磁流體的磁性殼聚糖微球易回收并且不易聚集的磁流體的制備方法。本發(fā)明的另一個目的是提供一種磁性殼聚糖微球的制備方法。本發(fā)明的發(fā)明人對現(xiàn)有的制備磁性殼聚糖微球的方法進行了細(xì)致的研究，發(fā)現(xiàn)影響磁性殼聚糖微球回收性能的主要因素是含有磁流體的磁性殼聚糖微球的磁強度較差；影響磁性殼聚糖微球聚集的主要因素是含有磁流體的磁性殼聚糖微球的矯頑力過高，從而導(dǎo)致磁性殼聚糖微球的聚集。所述矯頑力是指磁體對應(yīng)于磁通密度(磁化強度)為零時的磁場強度值，單位為安/米(A/m)。本發(fā)明提供了一種磁流體的制備方法，該方法包括在含有二價鐵離子和三價鐵離子的水溶液中加入過量的堿性水溶液；之后在保護氣體氣氛下進行沉淀反應(yīng)，分離沉淀反應(yīng)產(chǎn)物得到Fe304;將得到的Fe304和表面活性劑加入到載液中進行加熱，然后分離加熱產(chǎn)物，得到磁流體，其中，所述含有二價鐵離子和三價鐵離子的水溶液中，二價鐵離子與三價鐵離子的摩爾比為1.4-1.8:1。本發(fā)明還提供了一種磁性殼聚糖微球的制備方法，該方法包括將磁流體和殼聚糖分散到水和/或能與水混溶的溶劑中，得到第一懸浮液；之后將第一懸浮液、表面活性劑和有機溶劑混合均勻得到第二懸浮液；之后在第二懸浮液中加入交聯(lián)劑進行交聯(lián)反應(yīng)得到交聯(lián)產(chǎn)物；然后分離交聯(lián)產(chǎn)物得到磁性殼聚糖微球，其中，所述磁流體是通過本發(fā)明提供的方法得到的磁流體。本發(fā)明提供的方法在制備磁流體的過程中適當(dāng)?shù)卣{(diào)節(jié)所用二價鐵離子和三價鐵離子的比例，從而提高了含有通過本發(fā)明提供的方法制備得到的磁流體的磁性殼聚糖微球的磁強度，還能夠降低該磁性殼聚糖微球的矯頑力，克服了磁性殼聚糖微球不易回收以及容易聚集的缺點，從而使得到的磁性殼聚糖微球更適合用作固定化酶的載體。具體實施例方式本發(fā)明提供了一種磁流體的制備方法，該方法包括在含有二價鐵離子和三價鐵離子的水溶液中加入過量的堿性水溶液；之后在保護氣體氣氛下進行沉淀反應(yīng)，分離沉淀反應(yīng)產(chǎn)物得到Fe304;將得到的Fe304和表面活性劑加入到載液中進行加熱，然后分離加熱產(chǎn)物，得到磁流體，其中，所述含有二價鐵離子和三價鐵離子的水溶液中，二價鐵離子與三價鐵離子的摩爾比為1.4-1,8:1。本發(fā)明的發(fā)明人對現(xiàn)有的磁流體制備方法進行了細(xì)致的研究，發(fā)現(xiàn)在進行沉淀反應(yīng)時，二價鐵離子和三價鐵離子的摩爾比直接影響到得到的磁流體的性質(zhì)；并且本發(fā)明人意外的發(fā)現(xiàn)當(dāng)二價鐵離子與三價鐵離子的摩爾比為1.4-1.8:1時，既可以提高含有該方法得到的磁流體的磁性殼聚糖微球的磁強度，還能夠降低該磁性殼聚糖微球的矯頑力。為了進一步提高含有該方法得到的磁流體的磁性殼聚糖微球的磁強度7以及降低得到的磁性殼聚糖微球的矯頑力，優(yōu)選情況下，所述含有二價鐵離子和三價鐵離子的水溶液中，所述二價鐵離子與三價鐵離子的摩爾比為1.4-1.6:1，三價鐵離子的濃度為0.2-0.6摩爾/升。本發(fā)明中，為了使Fe2++2Fe3++80H——Fe304+4H20反應(yīng)進行的更加徹底，優(yōu)選情況下，使用過量的堿性水溶液，所述堿性水溶液的用量使反應(yīng)體系中，F(xiàn)^+與OH—的摩爾比為1:5-8。所述堿性水溶液沒有特別的限制，例如，可以選自氨、氫氧化鈉和氫氧化鉀的水溶液中的一種或幾種。根據(jù)本發(fā)明，在制備磁流體的過程中，所述表面活性劑以及載液的用量可以在很大范圍內(nèi)改變，優(yōu)選情況下，相對于100重量份的Fe304，所述表面活性劑的用量為500-1000重量份，所述載液的用量為1200-1800重量份；進一步優(yōu)選為，相對于100重量份的Fe304，所述表面活性劑的用量為600-900重量份，所述載液的用量為1400-1600重量份。本發(fā)明中，所述沉淀反應(yīng)的條件沒有特別的限制，例如，所述沉淀反應(yīng)的條件包括反應(yīng)溫度為60-80°C，反應(yīng)時間為50-80分鐘；優(yōu)選情況下，所述沉淀反應(yīng)的條件包括反應(yīng)溫度為65-70°C，反應(yīng)時間為55-65分鐘。優(yōu)選情況下，所述沉淀反應(yīng)在保護氣體氣氛下進行，所述保護氣體可以選自所述保護氣體為零族元素氣體和/或氮氣。本發(fā)明中，所述加熱的條件沒有特別的限制，例如，所述加熱的條件包括加熱的溫度為50-70°C，加熱的時間為50-80分鐘；優(yōu)選情況下，所述加熱的條件包括加熱的溫度為55-65°C，加熱的時間為55-65分鐘。根據(jù)本發(fā)明，所述表面活性劑沒有特別的限制，例如，所述表面活性劑可以選自聚乙二醇、失水山梨醇油酸酯、油酸和白油中的一種或幾種，優(yōu)選為失水山梨醇油酸酯。符合上述要求的表面活性劑可以通過商購得到，例如，廣州市成盛化學(xué)品有限公司生成的失水山梨醇油酸酯(Span-80)，濰坊中業(yè)化學(xué)有限公司生產(chǎn)的白油。8本發(fā)明屮，所述載液為本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知，例如，所述載液可以選自水、液體石蠟、甲苯和四氯化碳中的一種或幾種。符合上述要求的載液可以通過商購得到，例如，寧波市北倉海潤有限公司生產(chǎn)的液體石蠟。本發(fā)明提供的磁性殼聚糖微球的制備方法包括將磁流體和殼聚糖分散到水和/或能與水混溶的溶劑中，得到第一懸浮液；之后將第一懸浮液、表面活性劑和有機溶劑混合均勻得到第二懸浮液；之后在第二懸浮液中加入交聯(lián)劑進行交聯(lián)反應(yīng)得到交聯(lián)產(chǎn)物；然后分離交聯(lián)產(chǎn)物得到磁性殼聚糖微球，其中，所述磁流體是通過本發(fā)明提供的方法得到磁流體。根據(jù)本發(fā)明，所述能與水混溶的溶劑為本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知，例如，所述能與水混溶的溶劑優(yōu)選為乙酸和/或乙醇。所述表面活性劑為本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知，例如，所述表面活性劑可以選自聚乙二醇、失水山梨醇油酸酯油酸和白油中的一種或幾種，優(yōu)選為失水山梨醇油酸酯，符合上述要求的表面活性劑可以通過商購得到，例如，廣州市成盛化學(xué)品有限公司生成的失水山梨醇油酸酯(Span-80)。所述有機溶劑為本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知，例如，所述有機溶劑可以選自液體石蠟、甲苯和四氯化碳中的一種或幾種。本發(fā)明中，所述交聯(lián)劑沒有特別的限制，但優(yōu)選情況下，所述交聯(lián)劑可以選自丙二醛、丁二醛、戊二醛和己二醛中的一種或幾種，進一步優(yōu)選為戊二醛和/或丁二醛。根據(jù)本發(fā)明，所述殼聚糖、水和/或能與水混溶的溶劑、表面活性劑和交聯(lián)劑的用量可以在很大范圍內(nèi)改變；優(yōu)選情況下，相對于100重量份的磁流體，所述殼聚糖的用量為2-8重量份；水和/或能與水混溶的溶劑的用量為50-100重量份；表面活性劑的用量為50-100重量份，交聯(lián)劑的用量為1-2重量份；有機溶劑的用量為10-25重量份；進一步優(yōu)選為，相對于100重量份的磁流體，所述殼聚糖的用量為4-6重量份；水和/或能與水混溶的溶劑的用量為60-90重量份；表面活性劑的用量為60-90重量份，交聯(lián)劑的用量為1.2-1.6重量份；有機溶劑的用量為15-20重量份。本發(fā)明中，所述交聯(lián)反應(yīng)的條件沒有特別的限制，例如，所述交聯(lián)反應(yīng)的條件包括交聯(lián)的溫度為30-7(TC，交聯(lián)的時間為50-80分鐘；優(yōu)選情況下，所述交聯(lián)反應(yīng)的條件包括交聯(lián)的溫度為40-50°C，交聯(lián)的時間為55-65分鐘。下面通過實施例對本發(fā)明做進一步描述。實施例1本實施例用于說明本發(fā)明提供的磁流體的制備方法。(1)將0.36摩爾的二氯化鐵和0.2摩爾的三氯化鐵溶于1000毫升水中，得到水溶液；之后在該水溶液中加入320毫升的濃度為3.2摩爾/升的氫氧化鈉水溶液，得到混合液，該混合液中，F(xiàn)f與OH—的摩爾比為1:5;之后將該混合液移入裝有攪拌器(北京齊力達森儀器科技有限公司，RS-4A)、溫度計和冷凝管的2升四口燒瓶中水浴升溫并在氮氣氣氛下進行沉淀反應(yīng)，反應(yīng)的溫度為6(TC，反應(yīng)的時間為80分鐘，攪拌速度為500轉(zhuǎn)/分鐘；之后用磁鐵(磁強度為100emu/g)分離出得到的Fe304，并分別用IOO毫升去離子水洗滌3次，將得到的Fe304放入到真空干燥箱(北京永光明醫(yī)療儀器廠，51815235616)中干燥，干燥溫度為60°C，干燥時間為120分鐘，得到30克Fe304。(2)將10克歩驟(1)得到的Fe304、50克的聚乙二醇、IOO克的四氯化碳和20克的蒸餾水加入到500毫升的三口燒瓶中進行水浴加熱，加熱的溫度為5(TC，加熱的時間為80分鐘，之后用磁鐵(磁強度為100emu/g)分離出亮黑色漿狀磁流體粒子，并分別用100毫升去離子水洗滌3次，將得到的磁流體粒子放入到真空干燥箱(永光明醫(yī)療儀器廠，51815235616)中干燥，干燥溫度為6(TC，干燥時間為100分鐘，得到磁流體A1。10對比例1根據(jù)實施例1所述的方法制備參比磁流體CA1，不同的是二氯化鐵的用量為0.24摩爾。本實施例用于說明本發(fā)明提供的磁流體的制備方法。(1)將0.32摩爾的二氯化鐵和0.2摩爾的三氯化鐵溶于800毫升水中，得到水溶液；之后在該水溶液中加入500毫升的濃度為3.2摩爾/升的氫氧化鉀水溶液，得到混合液，該混合液中，F(xiàn)f與OH—的摩爾比為1:8;之后將該混合液移入裝有攪拌器(北京齊力達森儀器科技有限公司，RS-4A)、溫度計和冷凝管的2升四口燒瓶中水浴升溫并在氮氣氣氛下進行沉淀反應(yīng)，反應(yīng)的溫度為8(TC，反應(yīng)的時間為50分鐘，攪拌速度為500轉(zhuǎn)/分鐘；之后用磁鐵(磁強度為100emu/g)分離出得到的Fe304，并分別用100毫升去離子水洗滌3次，將得到的Fe304放入到真空干燥箱(北京永光明醫(yī)療儀器廠，51815235616)中干燥，干燥溫度為6(TC，干燥時間為60分鐘，得到28克Fe304。(2)將10克得到的Fe304、IOO克的油酸、160克的甲苯和20克水加入到500毫升的三口燒瓶中進行水浴加熱，加熱的溫度為70°C，加熱的時間為50分鐘，之后用磁鐵(磁強度為100emu/g)分離出亮黑色漿狀磁流體粒子，并分別用100毫升去離子水洗滌3次，將得到的磁流體粒子放入到真空干燥箱(北京永光明醫(yī)療儀器廠，51815235616)中干燥，干燥溫度為6(TC，干燥時間為70分鐘，得到磁流體A2。實施例3本實施例用于說明本發(fā)明提供的磁流體的制備方法。(1)將0.28摩爾的二氯化鐵和0.2摩爾的三氯化鐵溶于900毫升水中，得到水溶液；之后在該水溶液中加入374毫升的濃度為3.2摩爾/升的氫氧化鉀水溶液，得到混合液，該混合液中，F(xiàn)^+與OH—的摩爾比為1:6;之后將該混合液移入裝有攪拌器(北京齊力達森儀器科技有限公司，RS-4A)、溫度計和冷凝管的2升四口燒瓶中水浴升溫并在氦氣氣氛下進行沉淀反應(yīng)，反應(yīng)的溫度為65t:，反應(yīng)的時間為70分鐘，攪拌速度為500轉(zhuǎn)/分鐘；之后用磁鐵(磁強度為100emu/g)分離出得到的Fe304，并分別用IOO毫升去離子水洗滌3次，將得到的Fe304放入到真空干燥箱(北京永光明醫(yī)療儀器廠，51815235616)中干燥，干燥溫度為65"C，干燥時間為70分鐘，得到25克Fe304。(2)將10克步驟(1)得到的Fe304、90克的失水山梨醇油酸酯(南京古田化工有限公司，Span-80)、140克的液體石蠟(寧波市北倉海潤有限公司)和20克的蒸餾水加入到500毫升的三口燒瓶中進行水浴加熱，加熱的溫度為55'C，加熱的時間為70分鐘，之后用磁鐵(磁強度為100emu/g)分離出亮黑色漿狀磁流體粒子，并分別用100毫升去離子水洗滌3次，將得到的磁流體粒子放入到真空干燥箱(北京永光明醫(yī)療儀器廠，51815235616)中干燥，干燥溫度為6(TC，干燥時間為70分鐘，得到磁流體A3。實施例4本實施例用于說明本發(fā)明提供的磁流體的制備方法。(1)將0.3摩爾的二氯化鐵和0.2摩爾的三氯化鐵溶于1000毫升水中，得到水溶液；之后在該水溶液中加入440毫升的濃度為3.2摩爾/升的氫氧化鈉水溶液，得到混合液，該混合液中，F(xiàn)^+與OH—的摩爾比為1:7;之后將力達森儀器科技有限公司，RS-4A)、溫度計和冷凝管的升四口燒瓶中水浴升溫并在氮氣氣氛下進行沉淀反應(yīng)，反應(yīng)的溫度為65'C，反應(yīng)的時間為60分鐘，攪拌速度為500轉(zhuǎn)/分鐘；之后用磁鐵(磁強度為100emu/g)分離出得到的Fe304，并分別用100毫升去離子水洗滌3次，將得到的Fe304放入到真空干燥箱(北京永光明醫(yī)療儀器廠，51815235616)中干燥，干燥溫度為7(TC，千燥時間為60分鐘，得到26克Fe304。(2)將10克步驟(1)得到的Fe304、60克的白油(濰坊中業(yè)化學(xué)有限公司)、120克的四氯化碳和20克的蒸餾水加入到500毫升的三口燒瓶中進行水浴加熱，加熱的溫度為65°C，加熱的時間為60分鐘，之后用磁鐵(磁強度為100emu/g)分離出亮黑色漿狀磁流體粒子，并分別用IOO毫升去離子水洗滌3次，將得到的磁流體粒子放入到真空干燥箱(北京永光明醫(yī)療儀器廠，51815235616)中干燥，干燥溫度為60。C，干燥時間為60分鐘，得到磁流體A4。實施例5本實施例用于說明本發(fā)明提供的磁性殼聚糖微球的制備方法。將10克實施例1得到的磁流體Al和0.2克殼聚糖分散到10克的蒸餾水中，得到第一懸浮液；之后將第一懸浮液、IO克的失水山梨醇油酸酯(南京古田化工有限公司，Span-80)和1.2克四氯化碳混合均勻；然后加入0.1克的丙二醛并在6(TC下反應(yīng)70分鐘得到磁性殼聚糖微球懸浮液；之后用磁鐵(磁強度為100emu/g)從所述懸浮液中分離磁性殼聚糖微球，并分別用100毫升去離子水洗滌3次，將得到的磁流體粒子放入到真空干燥箱(北京永光明醫(yī)療儀器廠，51815235616)中干燥，干燥溫度為6(TC，干燥時間為70分鐘，得到磁性殼聚糖微球Bl。13對比例2根據(jù)與實施例5相同的方法制備參比磁性殼聚糖微球CB1，不同在于使用對比例1得到的參比磁流體CA1替代實施例1得到的磁流體Al。本實施例用于說明本發(fā)明提供的磁性殼聚糖微球的制備方法。將10克實施例2得到的磁流體A2和0.8克殼聚糖分散到5克的蒸餾水中，得到第一懸浮液；之后將第一懸浮液、5克的失水山梨醇油酸酯(南京古田化工有限公司，Span-80)和2.5克甲苯混合均勻；然后加入0.2克的丁二醛并在55t:下反應(yīng)80分鐘得到磁性殼聚糖微球懸浮液；之后用磁鐵(磁強度為100emu/g)從所述懸浮液中分離出磁性殼聚糖微球，并分別用100毫升去離子水洗滌3次，將得到的磁流體粒子放入到真空干燥箱(北京永光明醫(yī)療儀器廠，51815235616)中干燥，干燥溫度為60°C，干燥時間為60分鐘，得到磁性殼聚糖微球B2。實施例7本實施例用于說明本發(fā)明提供的磁性殼聚糖微球的制備方法。將10克實施例3得到的磁流體A3和0.6克殼聚糖分散到9克濃度為80重量％的乙酸中，得到第一懸浮液；之后將第一懸浮液、9克的失水山梨醇油酸酯(南京古田化工有限公司，Span-80)和2克四氯化碳混合均勻；然后加入0.16克的丙二醛并在65'C下反應(yīng)60分鐘得到磁性殼聚糖微球懸浮液；之后用磁鐵(磁強度為100emu/g)從所述懸浮液中分離磁性殼聚糖微球，并分別用100毫升去離子水洗滌3次，將得到的磁流體粒子放入到真空千燥箱(北京永光明醫(yī)療儀器廠，51815235616)中千燥，干燥溫度為65'C，千燥時間為65分鐘，得到磁性殼聚糖微球B3。14實施例8本實施例用于說明本發(fā)明提供的磁性殼聚糖微球的制備方法。將10克實施例4得到的磁流體A4和0.4克殼聚糖分散到6克的蒸餾水中，得到第一懸浮液；之后將第一懸浮液、6克的失水山梨醇油酸酯(南京古田化工有限公司，Span-80)和2克四氯化碳混合均勻；然后加入0.12克的戊二醛并在6(TC下反應(yīng)70分鐘得到磁性殼聚糖微球懸浮液；之后用磁鐵(磁強度為100emu/g)從所述懸浮液中分離磁性殼聚糖微球，并分別用100毫升去離子水洗滌3次，將得到的磁流體粒子放入到真空干燥箱(北京永光明醫(yī)療儀器廠，51815235616)中干燥，干燥溫度為65°C，千燥時間為70分鐘，得到磁性殼聚糖微球B4。實施例9-12按照ZBN24002-88標(biāo)準(zhǔn)，在振動磁強儀(美國QuantumDesign公司，NbTi)上分別檢測實施例5-8得到的磁性殼聚糖微球B1-B4的磁強度和矯頑力，結(jié)果如表l所示。對比例3根據(jù)實施例9-12所述的方法，檢測對比例2得到的參比磁性殼聚糖微球CB1的磁強度和矯頑力，結(jié)果如表1所示。15<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>從表l可以看出，相對于對比例2得到的參比磁性殼聚糖微球CB1，本發(fā)明實施例4-8到的磁性殼聚糖微球B1-B4的磁強度顯著的提高，并且矯頑力大幅度的下降，說明本發(fā)明提供的方法得到的磁流體既可以提高得到的含有該磁流體的磁性殼聚糖微球的磁強度，還能夠降低含有該磁流體的磁性殼聚糖微球的矯頑力，克服了現(xiàn)有的磁性殼聚糖微球不易回收以及容易聚集的缺點，從而使得到的磁性殼聚糖微球更適合用作固定化酶的載體。權(quán)利要求1、一種磁流體的制備方法，該方法包括在含有二價鐵離子和三價鐵離子的水溶液中加入過量的堿性水溶液；之后在保護氣體氣氛下進行沉淀反應(yīng)，分離沉淀反應(yīng)產(chǎn)物得到Fe3O4；將得到的Fe3O4和表面活性劑加入到載液中進行加熱，然后分離加熱產(chǎn)物，得到磁流體，其特征在于，所述含有二價鐵離子和三價鐵離子的水溶液中，二價鐵離子與三價鐵離子的摩爾比為1.4-1.81。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述含有二價鐵離子和三價鐵離子的水溶液中，二價鐵離子與三價鐵離子的摩爾比為1.4-1.6:1，三價鐵離子的濃度為0.2-0.6摩爾/升。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，相對于100重量份的Fe304，所述表面活性劑的用量為500-1000重量份，所述載液的用量為1200-1800重量份。4、根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中，相對于100重量份的Fe304，所述表面活性劑的用量為600-900重量份，所述載液的用量為1400-1600重量份。5、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述沉淀反應(yīng)的條件包括反應(yīng)溫度為60-8(TC，反應(yīng)時間為50-80分鐘，所述保護氣體為零族元素氣體和/6、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述加熱的條件包括加熱的溫度為50-70°C，加熱的時間為50-80分鐘。7、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述表面活性劑選自聚乙二醇、失水山梨醇油酸酯、油酸和白油中的一種或幾種；所述載液選自水、液體石蠟、甲苯和四氯化碳中的一種或幾種；所述堿性水溶液選自氨、氫氧化鈉和氫氧化鉀的水溶液中的一種或幾種。8、一種磁性殼聚糖微球的制備方法，該方法包括將磁流體和殼聚糖分散到水和/或能與水混溶的溶劑中，得到第一懸浮液；之后將第一懸浮液、表面活性劑和有機溶劑混合均勻得到第二懸浮液；之后在第二懸浮液中加入交聯(lián)劑進行交聯(lián)反應(yīng)得到交聯(lián)產(chǎn)物；然后分離交聯(lián)產(chǎn)物得到磁性殼聚糖微球，其特征在于，所述磁流體為通過權(quán)利要求1-7中任意一項所述的方法制備得到的磁流體。9、根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中，相對于100重量份的磁流體，所述殼聚糖的用量為2-8重量份，水和/或能與水混溶的溶劑的用量為50-100重量份，表面活性劑的用量為50-100重量份，交聯(lián)劑的用量為l-2重量份，有機溶劑的用量為10-25重量份。10、根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中，相對于100重量份的磁流體，所述殼聚糖的用量為4-6重量份；水和/或能與水混溶的溶劑的用量為60-90重量份，表面活性劑的用量為60-90重量份，交聯(lián)劑的用量為1.2-1.6重量份，有機溶劑的用量為15-20重量份。11、根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中，所述能與水混溶的溶劑為乙酸和/或乙醇，所述表面活性劑選自聚乙二醇、失水山梨醇油酸酯、油酸和白油中的一種或幾種，所述有機溶劑選自液體石蠟、甲苯和四氯化碳中的一種或幾種，所述交聯(lián)劑選自丙二醛、丁二醛、戊二醛和己二醛中的一種或兒種。12、根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中，所述交聯(lián)反應(yīng)的條件包括交聯(lián)反應(yīng)的溫度為30-70°C，交聯(lián)反應(yīng)的時間為50-80分鐘。全文摘要本發(fā)明提供了一種磁流體的制備方法，該方法包括在含有二價鐵離子和三價鐵離子的水溶液中加入過量的堿性水溶液；之后在保護氣體氣氛下進行沉淀反應(yīng)，分離沉淀反應(yīng)產(chǎn)物得到Fe₃O₄；將得到的Fe₃O₄和表面活性劑加入到載液中進行加熱，然后分離加熱產(chǎn)物，得到磁流體，其中，所述含有二價鐵離子和三價鐵離子的水溶液中，二價鐵離子與三價鐵離子的摩爾比為1.4-1.8∶1。本發(fā)明還提供了一種磁性殼聚糖微球的制備方法，該方法中所用的磁流體為通過本發(fā)明提供的方法得到的磁流體。含有本發(fā)明提供的方法得到的磁流體的磁性殼聚糖微球更適合用作固定化酶的載體。文檔編號H01F1/44GK101458985SQ200710195789公開日2009年6月17日申請日期2007年12月13日優(yōu)先權(quán)日2007年12月13日發(fā)明者祝學(xué)遠(yuǎn)申請人:比亞迪股份有限公司