[0102] 4)測定：分別精密吸取對照品混合溶液和供試品溶液各20yL，注入高效液相色 譜儀后進行測定；
[0103] 5)計算：理論塔板數(shù)按澳洲茄堿峰計算，應(yīng)不低于5000。記錄峰面積，采用外標(biāo)法 計算澳洲前堿、澳洲前邊堿的含量，如表1所示。
[0104] 實施例3
[0105] 采用超高效液相色譜法（UPLC)進行梯度洗脫測定復(fù)方龍葵消炎片中中的沒食子 酸、槲皮素、山柰素、澳洲茄堿、澳洲茄邊堿含量。
[0106] 本試驗中的超高效液相色譜法原理與與實施例2中的高效液相色譜法基本相同， 所改變地方有以下幾點：
[0107] (1)使用小顆粒、高性能微粒固定相。HPLC的色譜柱，如：常見十八烷基硅膠鍵合 柱，粒徑是5um，而UPLC色譜柱，達到3. 5um，甚至1. 7um，這樣孔徑更利于物質(zhì)分離。
[0108] (2)高壓輸液栗的使用。由于使用的色譜柱粒徑減小，使用時所產(chǎn)生的壓力也自然 成倍增大。故液相色譜的輸液栗也相應(yīng)改變成超高壓的輸液栗。
[0109] (3)高速采樣速度的靈敏檢測器。
[0110] (4)使用低擴散、低交叉污染自動進樣器。配備針內(nèi)進樣探頭和壓力輔助進樣技 術(shù)；
[0111] (5)儀器整體系統(tǒng)優(yōu)化設(shè)計。色譜工作站配備多種軟件平臺，實現(xiàn)超高效液相分析 方法與高效液相分析方法的自動轉(zhuǎn)換。
[0112] 超高效液相色譜法檢測復(fù)方龍葵消炎片的結(jié)果如表1所示。
[0113] 表1HPLC法和UPLC法測定復(fù)方龍葵消炎片中主要成分含量
[0114]
[0116] 對同批次樣品含量測定結(jié)果數(shù)據(jù)比較參見表1。從表1數(shù)據(jù)中，可看到高效液相色 譜法（HPLC)和超高效液相色譜法（UPLC)及兩種洗脫法測定復(fù)方龍葵消炎片中主要成分含 量結(jié)果基本一致。
[0117] 根據(jù)以上6批含量測定數(shù)據(jù)分析，不同批次復(fù)方龍葵消炎片質(zhì)量差異較大，主要 受中藥品種、產(chǎn)地、加工、制劑等因素影響造成?？赏ㄟ^指定高品質(zhì)中藥龍葵、天胡荽、猴耳 環(huán)品種及產(chǎn)地等，規(guī)范加工制劑過程，提高或穩(wěn)定復(fù)方龍葵消炎片中有效成分含量。澳洲茄 堿、澳洲茄邊堿具有抗癌、抗菌等生物活性，且在龍葵藥材中含量較高，可以作為評價龍葵 藥材質(zhì)量的指標(biāo)成分，同時，沒食子酸、槲皮素、山柰素在天胡荽和猴耳環(huán)中含量較高，可以 作為評價天胡荽和猴耳環(huán)質(zhì)量的指標(biāo)成分?？梢?guī)定本品每片含沒食子酸、槲皮素、山柰素、 澳洲前堿、澳洲前邊堿的含量分別應(yīng)不少于8mg、2mg、0. 2mg、1. 5mg、1. 5mg
[0118] 盡管本發(fā)明的實施方案已公開如上，但其并不僅僅限于說明書和實施方式中所列 運用，它完全可以被適用于各種適合本發(fā)明的領(lǐng)域，對于熟悉本領(lǐng)域的人員而言，可容易地 實現(xiàn)另外的修改，因此在不背離權(quán)利要求及等同范圍所限定的一般概念下，本發(fā)明并不限 于特定的細(xì)節(jié)和這里示出與描述的實施例。
【主權(quán)項】
1. 一種復(fù)方龍葵消炎片的高效液相色譜檢測方法，其特征在于，所述的復(fù)方龍葵消炎 片主要由龍葵、天胡荽、猴耳環(huán)制成，所述檢測方法包括采用高效液相色譜法檢測所述復(fù)方 龍葵消炎片中的沒食子酸、槲皮素、山柰素、澳洲茄堿、澳洲茄邊堿。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述復(fù)方龍葵消炎片的高效液相色譜檢測方法，其特征在于，采用 所述的檢測方法同時檢測復(fù)方龍葵消炎藥中的沒食子酸、槲皮素、山柰素的含量包括以下 步驟： 1) 色譜條件： 色譜柱：采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑； 流動相：甲醇和磷酸溶液的混合液，磷酸溶液的體積分?jǐn)?shù)為〇. 4%，甲醇和磷酸水的體 積比為55:45 ; 流速：lmL/min; 柱溫：25°C; 梯度波長檢測：〇~15min，檢測波長為270nm;15~30min，檢測波長為362nm; 2) 制備混合對照溶液：精密稱取沒食子酸對照品、槲皮素對照品、山奈素對照品適量， 加甲醇制成含沒食子酸〇. 5mg/mL，槲皮素lmg/mL、山奈素0. 5mg/mL的對照品混合溶液； 3) 制備供試品溶液：取本品粉末約2g，精密稱定，精密加入甲醇100ml，稱定重量，回 流提取lh，放冷，補足減失重量，過濾，精密量取濾液50mL，加鹽酸15mL，水浴回流加熱和水 解處理2h，過濾，濾液置IOOmL量瓶中，用少許甲醇洗滌，洗液并入同一量瓶內(nèi)，加甲醇至刻 度，搖勻，用0. 45nm微孔濾膜濾過，取其濾液； 4) 測定：分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各20yL，注入高效液相色譜儀后進 行測定； 5) 計算：理論塔板數(shù)按槲皮素峰計算，應(yīng)不低于5000。記錄峰面積，采用外標(biāo)法計算沒 食子酸、槲皮素、山柰素的含量。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述復(fù)方龍葵消炎片的檢測方法，其特征在于，采用所述的檢測方 法同時檢測復(fù)方龍葵消炎藥中的澳洲茄堿、澳洲茄邊堿含量包括以下步驟： 1) 色譜條件： 色譜柱：色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑； 流動相：乙腈和.即04溶液的混合液，Na2即04為2mol/L，乙腈和Na2HP04溶液的體積 比為39:61 ; 流速：lmL/min; 檢測波長：205nm; 柱溫：25°C; 2) 制備混合對照溶液：精密稱取澳洲茄堿對照品、澳洲茄邊堿對照品適量，加甲醇制 成含澳洲前堿lmg/mL、澳洲前邊堿lmg/mL的對照品混合溶液； 3) 制備供試品溶液：精密稱定復(fù)方龍葵消炎片粗粉2g，精密加入IOOmL甲醇，精密稱 定，回流提取lh，放冷，用甲醇補足減失的重量，搖勾，濾過，精密量取續(xù)濾液50mL，蒸干，加 1 %鹽酸溶液50mL溶解，蒸干，用少許甲醇洗滌，洗液并入IOmL量瓶內(nèi)，加甲醇至刻度，搖 勻，用0. 45nm微孔濾膜濾過，取其濾液； 4) 測定：分別精密吸取對照品混合溶液和供試品溶液各20yL，注入高效液相色譜儀 后進彳丁測定； 5)計算：理論塔板數(shù)按澳洲茄堿峰計算，應(yīng)不低于5000。記錄峰面積，采用外標(biāo)法計算 澳洲茄堿、澳洲茄邊堿的含量。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述復(fù)方龍葵消炎片的檢測方法，其特征在于，步驟1)所述的等梯 度波長檢測還可以采用等波長檢測，波長為254nm。5. 根據(jù)權(quán)利要求2所述復(fù)方龍葵消炎片的檢測方法，其特征在于，步驟1)所述的流動 相還可以是：流動相A為甲醇，流動相B為0. 4%磷酸溶液，進行梯度洗脫，所述梯度洗脫程 序如下，其中流動相比例均為體積百分比： 0~13min，流動相A為：2%，流動相B為：88% ; 13~14min，流動相A為：2%~52%，流動相B為：48%~88% ; 14~30min，流動相A為：52%，流動相B為：48% ; 30min以上，流動相A為：55%，流動相B為：45%。6. 根據(jù)權(quán)利要求2所述復(fù)方龍葵消炎片的檢測方法，其特征在于，步驟1)所述磷酸溶 液可以選用冰醋酸、甲酸、三氯乙酸中的任意一種物質(zhì)來代替。7. 根據(jù)權(quán)利要求3所述復(fù)方龍葵消炎片的檢測方法，其特征在于，步驟1)所述的流動 相還可以是：流動相A為乙腈，流動相B為1 %體積分?jǐn)?shù)磷酸溶液，進行梯度洗脫，所述梯度 洗脫程序如下，其中流動相比例均為體積百分比： 0~5min，流動相A為：22%，流動相B為：78% ; 5~20min，流動相A為：22%~25%，流動相B為：78%~75% ; 20~25min，流動相A為：25%，流動相B為：75% ; 25min以上，流動相A為：20%，流動相B為：80%。8. 根據(jù)權(quán)利要求3所述復(fù)方龍葵消炎片的檢測方法，其特征在于，步驟1)所述的 Na2HPO4可以選用氨水、二乙胺、三乙胺、NaH孑04和Na3P04中的任意一種物質(zhì)來代替。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種復(fù)方龍葵消炎片的高效液相色譜檢測方法，所述的復(fù)方龍葵消炎片主要由龍葵、天胡荽、猴耳環(huán)制成，主要檢測復(fù)方龍葵消炎片中的沒食子酸、槲皮素、山柰素、澳洲茄堿、澳洲茄邊堿的含量。本發(fā)明根據(jù)所述消炎片中沒食子酸、槲皮素、山柰素等酚酸類物質(zhì)和澳洲茄邊堿、澳洲茄堿等生物堿類物質(zhì)這兩類進行分步檢測，這種檢測方法檢測精確度和檢測速率高，并將其用于所述消炎片的含量測定，該方法保證所述消炎片質(zhì)量檢測標(biāo)準(zhǔn)的準(zhǔn)確性和先進性，可作為所述消炎片質(zhì)量控制的重要指標(biāo)。
【IPC分類】G01N30/06, G01N30/02
【公開號】CN105203673
【申請?zhí)枴緾N201510780966
【發(fā)明人】王捷, 蔣偉哲, 葉勇, 蘇志恒, 蔣敏捷, 黃增瓊
【申請人】廣西醫(yī)科大學(xué)制藥廠
【公開日】2015年12月30日
【申請日】2015年11月13日