一種單分散強磁性免疫納米微球及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種單分散強磁性免疫納米微球，所述單分散強磁性免疫納米微球的粒徑為5nm?5um。本發(fā)明還公開了一種單分散強磁性免疫納米微球的制備方法，包括以下步驟：步驟一、四氧化三鐵納米顆粒的制備；步驟二、單分散硅羥基磁性納米微球的制備；步驟三、單分散氨基化磁性納米微球的制備；步驟四、單分散強磁性免疫納米微球的制備。本發(fā)明的單分散強磁性免疫納米微球及其制備方法具有較好的超順磁性，磁含量高、分散性好、無團聚現象，形貌規(guī)則標準，粒徑統一可控，易功能化修飾等優(yōu)點。
【專利說明】
一種單分散強磁性免疫納米微球及其制備方法
技術領域
[0001 ]本發(fā)明涉及磁性納米材料技術領域，尤其涉及一種單分散強磁性免疫納米微球及其制備方法。
【背景技術】
[0002]隨著納米技術的發(fā)展，納米材料在生物學醫(yī)學領域應用越來越廣泛，尤其是由磁性微球和納米材料結合而成的磁性納米顆粒，因具有磁響應性、超順磁性及良好的生物相容性等優(yōu)點，在生物科技和生物醫(yī)學領域有較好的應用前景。
[0003]現有技術中，用于制備磁性納米微球的方法主要有包埋法、聚合法等，主要原理是將磁性納米微粒包裹在高分子微球中，由于磁性微粒表面需要包裹足夠的高分子，就導致其中的磁性納米微粒量少，而導致了整個磁性納米微粒的磁含量降低，非磁含量增加，往往團聚在一起難以實現單分散。這樣的磁性納米微球存在以下缺點:第一、由于其分散性差，易團聚，導致其比表面積變小，大大降低了實際應用效果；第二、由于其磁含量小，磁性較弱，通常在富集時需要幾十秒鐘時間甚至更久，在應用中會使操作時間大大延長，同時為了避免這問題太，不得不增大磁珠的體積或將多個磁珠連接在一起，卻又使得空間位阻變大、靈敏度降低、懸浮性變差;第三、現有技術的磁性納米微球在形狀規(guī)則程度、粒徑均一度、表面功能活性基團含量等方面效果往往不能滿足實際應用的需要。

【發(fā)明內容】

[0004]本發(fā)明旨在至少在一定程度上解決相關技術中的技術問題之一。
[0005]為此，本發(fā)明的一個目的在于提出一種磁含量高、無團聚現象，形貌規(guī)則標準，粒徑可控統一的單分散強磁性免疫納米微球及其制備方法。
[0006]根據本發(fā)明實施例的一種單分散強磁性免疫納米微球，所述單分散強磁性免疫納米微球的粒徑為5nm_5um。
[0007]根據本發(fā)明實施例的單分散強磁性免疫納米微球具有的詳細的獨立權利要求帶來的優(yōu)點。
[0008]另外，根據本發(fā)明上述實施例的單分散強磁性免疫納米微球的制備方法，包括以下步驟:
[0009]步驟一、四氧化三鐵納米顆粒的制備；
[0010]步驟二、單分散硅羥基磁性納米微球的制備；
[0011 ]步驟三、單分散氨基化磁性納米微球的制備；
[0012]步驟四、單分散強磁性免疫納米微球的制備。
[0013]根據本發(fā)明的一個示例，所述步驟一包括以下步驟:
[0014]S1、取濃度均為0.1?3mol/L的Fe3+的鹽溶液和Fe2+的鹽溶液，按體積比為1:1?10:1混合，取混合液lO-lOOmL，加入5-500mL含有0.1 %-10%乳化劑的水溶液中，充分混合均勻，得到混合液I;
[0015]S2、在混合液I中加入20 % -80 %的聚乙二醇-6000水溶液20_1 OOmL，得到混合液2 ；
[0016]S3、將混合液2加熱至20?50°C，同時緩慢滴加濃度為20%?75%的氨水稀釋液0.1?0.5毫升，保持溫度持續(xù)反應I?3小時，得到顆粒I;
[0017]S4、分別用無水乙醇和超純水各清洗3次顆粒I，將顆粒I進行磁分離技術，在65°C的溫度下干燥2小時，即得到了所述四氧化三鐵納米顆粒。
[0018]根據本發(fā)明的一個示例，所述步驟二包括以下步驟:
[0019]S1、將所述四氧化三鐵納米顆粒分散在含有I %_10%十二烷基苯磺酸鈉水溶液中，再加入20-200mL濃度為20%-80%的醇溶液中，充分混合均勻，得到混合液3;
[0020]S2、在混合液3中緩慢滴加5?30毫升濃度為0.1?lmol/1的四乙氧基硅烷溶液，反應I?10小時后再次加入濃度為0.1?0.5mol/l的氨水溶液調節(jié)PH值到8?12，得到混合液4；
[0021]S3、將混合液4繼續(xù)加熱到20?70°C持續(xù)反應3?5小時，反應結束后，得到顆粒2;
[0022]S4、將顆粒2進行磁分離技術出表面經過硅羥基修飾的顆粒，用超純水清洗3次，在65°C真空環(huán)境下干燥2小時，即得到單分散硅羥基磁性納米微球。
[0023 ]根據本發(fā)明的一個示例，所述步驟三包括以下步驟:
[0024]S1、將單分散硅羥基磁性納米微球分散在濃度為50?500毫升20 % -80 %的的乙醇溶液中，充分混合均勻，得到混合液5;
[0025]S2、在混合液5中加入10?100微升3-氨丙基三乙氧基硅烷或硅烷偶聯劑KH-550，使其在25?60°C的溫度下反應I?10小時，反應結束后，得到顆粒3;
[0026]S3、將顆粒3進行磁分離技術，用75 %的乙醇溶液清洗3次，在65 °C真空環(huán)境下干燥2小時，即得到單分散氨基化磁性納米微球。
[0027]根據本發(fā)明的一個示例，所述步驟四包括以下步驟:
[0028]S1、將單分散氨基化磁性納米微球分散在I?10毫升濃度為0.1?3mol/L的丁二酸酐溶液中，充分混合均勻，得到混合液6，使混合液6在通氮的條件下持續(xù)反應I?10小時，得到顆粒4，使顆粒4經過磁分離技術，待顆粒4完全吸附后，將含有顆粒4的混合液6的上清液去除;
[0029]S2、將上述顆粒4分散在I?10毫升濃度為0.1?lmol/L的嗎啉乙磺酸溶液中，充分分散后，加入I?10毫升濃度為0.1?lmol/L的N-羥基丁二酰亞胺，持續(xù)反應1-3小時，即得到顆粒5;
[0030]S3、將顆粒5在0.1?10毫升I3BS緩沖溶液中充分分散，得到混合液7，取I?20毫升混合液7與I?100微升待檢測物的相應抗體充分混合均勻，孵育I?5小時，得到顆粒5;
[0031]S4、將顆粒5經過磁分離技術，PBS溶液清洗2次，即得到單分散強磁性免疫納米微球。
[0032]根據本發(fā)明的一個示例，所述步驟四包括以下步驟:
[0033]S1、將單分散氨基化磁性納米微球分散在0.1-10毫升I3BS溶液中，加入0.1-10毫升質量分數為10%的戊二醛溶液，充分混合均勻，得到混合液8，讓混合液8持續(xù)反應I?3小時，即可得顆粒6;
[0034]S2、將顆粒6再次分散在0.1-10毫升I3BS溶液中，加入I?100微升待檢測物的相應抗體，進行孵育1-3小時，得到顆粒7;
[0035]S3、將顆粒7用PBS清洗2次后，加入到甘氨酸溶液中，使其混合反應，得到顆粒8，將顆粒8用PBS清洗2次后，再經過磁分離技術，既可以得到單分散強磁性免疫納米微球。
[0036]本發(fā)明的附加方面和優(yōu)點:
[0037]1.本發(fā)明制備的單分散強磁性免疫納米微球磁含量高，磁性強，普通磁鐵3-5秒即可實現快速富集，無需增大磁珠的體積或將多個磁珠連接在一起即可實現磁珠的快速分離，本發(fā)明制得的單分散強磁性免疫納米微球大大降低了空間位阻、大大提高了靈敏度；
[0038]2.單分散好，合成出的單分散強磁性免疫納米微球無團聚現象；
[0039]3.形貌規(guī)則，標準的球形；
[0040]4.單分散強磁性免疫納米微球粒徑分布窄，顆粒大小均一且粒徑可控；
[0041]5.生物相容性好，易功能化修飾，且含有豐富的活性基團；
[0042]6.懸浮性和穩(wěn)定性較好；
[0043]7.具有較好的超順磁性；
[0044]8.制備方法簡單，易于工業(yè)化大批量生產；
[0045]9.價格低廉，解決了市場上現有磁珠價格較高難易普及使用的問題，易于在實際應用中普及和推廣。
【附圖說明】
[0046]圖1是本發(fā)明的實施例的單分散強磁性免疫納米微球的四氧化三鐵納米顆粒的電鏡圖；
[0047]圖2是本發(fā)明的實施例的單分散強磁性免疫納米微球的電鏡圖；
【具體實施方式】
[0048]下面詳細描述本發(fā)明的實施例，所述實施例的示例在附圖中示出，其中自始至終相同或類似的標號表示相同或類似的元件或具有相同或類似功能的元件。下面通過參考附圖描述的實施例是示例性的，旨在用于解釋本發(fā)明，而不能理解為對本發(fā)明的限制。
[0049]本發(fā)明的一種單分散強磁性免疫納米微球，其粒徑為5nm-5um，形貌規(guī)則，標準的球形。
[0050]值得注意的是，本發(fā)明的單分散強磁性免疫納米微球不僅可以理解為步驟最后的最終產物，還可以包括任意一個中間步驟的任意一個中間產物。在本發(fā)明中，最終產物為單分散強磁性納米免疫微球，中間產物為四氧化三鐵納米顆粒、單分散硅羥基磁性納米微球和單分散氨基化磁性納米微球。本發(fā)明專利可以理解為包括這四種產物及該四種產物的制備方法。
[0051 ]本發(fā)明的一種單分散強磁性免疫納米微球的制備方法，包括以下步驟:
[0052]步驟一、四氧化三鐵納米顆粒的制備；
[0053]步驟二、單分散硅羥基磁性納米微球的制備；
[0054]步驟三、單分散氨基化磁性納米微球的制備；
[0055]步驟四、單分散強磁性免疫納米微球的制備。
[0056]具體地說，每個步驟詳細包括以下內容:
[0057]步驟一包括以下步驟:
[0058] S1、取濃度均為0.1?3mo 1/L的Fe3+的鹽溶液和Fe2+的鹽溶液，按體積比為1:1?10:1混合，取混合液lO-lOOmL，加入5-500mL含有0.1 %-10%乳化劑的水溶液中，充分混合均勻，得到混合液I;
[0059 ] S2、在混合液I中加入20 % -80 %的聚乙二醇-6000水溶液20_1 OOmL，得到混合液2 ；
[0060]S3、將混合液2加熱至20?50°C，同時緩慢滴加濃度為20%?75%的氨水稀釋液
0.1?0.5毫升，保持溫度持續(xù)反應I?3小時，得到顆粒I;
[0061]S4、分別用無水乙醇和超純水各清洗3次顆粒I，將顆粒I進行磁分離技術，在65°C的溫度下干燥2小時，即得到了所述四氧化三鐵納米顆粒。
[0062]步驟二包括以下步驟:
[0063]S1、將所述四氧化三鐵納米顆粒分散在含有I %_10%十二烷基苯磺酸鈉水溶液中，再加入20-200mL濃度為20%-80%的醇溶液中，充分混合均勻，得到混合液3;
[0064]S2、在混合液3中緩慢滴加5?30毫升濃度為0.1?lmol/1的四乙氧基硅烷溶液，反應I?10小時后再次加入濃度為0.1?0.5mol/l的氨水溶液調節(jié)PH值到8?12，得到混合液4；
[0065]S3、將混合液4繼續(xù)加熱到20?70°C持續(xù)反應3?5小時，反應結束后，得到顆粒2;
[0066]S4、將顆粒2進行磁分離技術出表面經過硅羥基修飾的顆粒，用超純水清洗3次，在65°C真空環(huán)境下干燥2小時，即得到單分散硅羥基磁性納米微球。
[0067]步驟三包括以下步驟:
[0068]S1、將單分散硅羥基磁性納米微球分散在濃度為50?500毫升20 % -80 %的的乙醇溶液中，充分混合均勻，得到混合液5;
[0069]S2、在混合液5中加入10?100微升3-氨丙基三乙氧基硅烷或硅烷偶聯劑KH-550，使其在25?60°C的溫度下反應I?10小時，反應結束后，得到顆粒3;
[0070]S3、將顆粒3進行磁分離技術，用75 %的乙醇溶液清洗3次，在65 °C真空環(huán)境下干燥2小時，即得到單分散氨基化磁性納米微球。
[0071]步驟四包括以下步驟:
[0072]S1、將單分散氨基化磁性納米微球分散在I?10毫升濃度為0.1?3mol/L的丁二酸酐溶液中，充分混合均勻，得到混合液6，使混合液6在通氮的條件下持續(xù)反應I?10小時，得到顆粒4，使顆粒4經過磁分離技術，待顆粒4完全吸附后，將含有顆粒4的混合液6的上清液去除;
[0073]S2、將上述顆粒4分散在I?10毫升濃度為0.1?lmol/L的嗎啉乙磺酸溶液中，充分分散后，加入I?10毫升濃度為0.1?lmol/L的N-羥基丁二酰亞胺，持續(xù)反應1-3小時，即得到顆粒5;
[0074]S3、將顆粒5在0.1?10毫升I3BS緩沖溶液中充分分散，得到混合液7，取I?20毫升混合液7與I?100微升待檢測物的相應抗體充分混合均勻，孵育I?5小時，得到顆粒5;
[0075]S4、將顆粒5經過磁分離技術，PBS溶液清洗2次，即得到單分散強磁性免疫納米微球。
[0076]步驟四還有另外一種方法，包括以下步驟:
[0077]S1、將單分散氨基化磁性納米微球分散在0.1-10毫升PBS溶液中，加入0.1-10毫升質量分數為10%的戊二醛溶液，充分混合均勻，得到混合液8，讓混合液8持續(xù)反應I?3小時，即可得顆粒6;
[0078]S2、將顆粒6再次分散在0.1-10毫升I3BS溶液中，加入I?100微升待檢測物的相應抗體，進行孵育1-3小時，得到顆粒7;
[0079]S3、將顆粒7用PBS清洗2次后，加入到甘氨酸溶液中，使其混合反應，得到顆粒8，將顆粒8用PBS清洗2次后，再經過磁分離技術，既可以得到單分散強磁性免疫納米微球。
[0080]實施例一:
[0081 ] 包括以下步驟:
[0082] S1、準確稱量8.94g硫酸鐵鹽和4.34g硫酸亞鐵鹽，溶解在加入0.25mL乳化劑的水溶液200mL中，充分混合均勻，得到混合液I;
[0083 ] S2、在混合液I中加入25 %聚乙二醇6000水溶液I OOmL，得到混合液2 ；
[0084]S3、將混合液2加熱至20°C，同時緩慢滴加濃度為20%的氨水稀釋液0.1毫升，保持溫度持續(xù)反應I小時，得到顆粒I;
[0085]S4、分別用無水乙醇和超純水各清洗3次顆粒I，將顆粒I進行磁分離技術，在65°C的溫度下干燥2小時，即得到了所述四氧化三鐵納米顆粒；
[0086]S5、將所述四氧化三鐵納米顆粒分散在含有3%的十二烷基苯磺酸鈉水溶液中，再加入10mL濃度為45 %的正乙醇和無水乙醇的混合液，充分混合均勻，得到混合液3;
[0087]S6、在混合液3中緩慢滴加5毫升濃度為0.lmol/1的四乙氧基硅烷溶液，反應I小時后再次加入濃度為0.lmol/1的氨水溶液調節(jié)PH值到8，得到混合液4;
[0088]S7、將混合液4繼續(xù)加熱到20 °C持續(xù)反應3小時，反應結束后，得到顆粒2 ；
[0089]S8、將顆粒2進行磁分離技術出表面經過硅羥基修飾的顆粒，用超純水清洗3次，在65°C真空環(huán)境下干燥2小時，即得到單分散硅羥基磁性納米微球；
[0090]S9、將單分散硅羥基磁性納米微球分散在50毫升的乙醇溶液中，充分混合均勻，得到混合液5;
[0091]S10、在混合液5中加入10微升3-氨丙基三乙氧基硅烷或硅烷偶聯劑KH-550，使其在25°C的溫度下反應I小時，反應結束后，得到顆粒3;
[0092]Sll、將顆粒3進行磁分離技術，無水乙醇清洗3次，在65°C真空環(huán)境下干燥2小時，即得到單分散氨基化磁性納米微球；
[0093]S12、將單分散氨基化磁性納米微球分散在I毫升0.5mol/L丁二酸酐溶液中，充分混合均勻，得到混合液6，使混合液6在通氮的條件下持續(xù)反應I小時，得到顆粒4，使顆粒4經過磁分離技術，待顆粒4完全吸附后，將含有顆粒4的混合液6的上清液去除；
[0094]S13、將上述顆粒4分散在10毫升濃度為0.5mol/L的嗎啉乙磺酸溶液中，充分分散后，加入10毫升濃度為0.5mol/L的N-羥基丁二酰亞胺，持續(xù)反應3小時，即得到顆粒5;
[0095]S14、將顆粒5在5mL PBS緩沖溶液中充分分散，得到混合液7，取I毫升混合液7與10微升待檢測物的相應抗體充分混合均勻，孵育I小時，得到顆粒5;
[0096]S15、將顆粒5經過磁分離技術，2mL PBS溶液洗2次，即得到單分散強磁性免疫納米微球。
[0097]實施例二:
[0098]S1、取物質量比均為3的Fe3+的鹽溶液和Fe2+的鹽溶液，按體積比1:1混合均勻，取10毫升加入到含有0.1 %的乳化劑的水溶液中，充分混合均勻，得到混合液I;
[0099]S2、在混合液I中加入20%的聚乙二醇6000水溶液20毫升，得到混合液2;
[0100]S3、將混合液2加熱至50 0C，同時緩慢滴加濃度為75 %的氨水稀釋液0.5毫升，保持溫度持續(xù)反應3小時，得到顆粒I;
[0101]S4、分別用無水乙醇和超純水各清洗3次顆粒I，將顆粒I進行磁分離技術，在65°C的溫度下干燥2小時，即得到了所述四氧化三鐵納米顆粒；
[0102]S5、將所述四氧化三鐵納米顆粒分散在含有I %的十二烷基苯磺酸鈉水溶液中，再加入20毫升20 %的正乙醇溶液，充分混合均勻，得到混合液3;
[0103]S6、在混合液3中緩慢滴加30毫升濃度為lmol/L的四乙氧基硅烷溶液，反應10小時后再次加入濃度為0.5mol/L的氨水溶液調節(jié)PH值到12，得到混合液4;
[0104]S7、將混合液4繼續(xù)加熱到70 °C持續(xù)反應5小時，反應結束后，得到顆粒2;
[0105]S8、將顆粒2進行磁分離技術出表面經過硅羥基修飾的顆粒，用超純水清洗3次，在65°C真空環(huán)境下干燥2小時，即得到單分散硅羥基磁性納米微球；
[0106]S9、將單分散硅羥基磁性納米微球分散在500毫升的20%的乙醇溶液中，充分混合均勻，得到混合液5;
[0107]S10、在混合液5中加入100微升3-氨丙基三乙氧基硅烷或硅烷偶聯劑KH-550，使其在60°C的溫度下反應10小時，反應結束后，得到顆粒3;
[0108]SI 1、將顆粒3進行磁分離技術，用75 %的乙醇溶液清洗3次，在65 °C真空環(huán)境下干燥2小時，即得到單分散氨基化磁性納米微球；
[0109]S12、將單分散氨基化磁性納米微球分散在I毫升濃度為0.lmol/L的丁二酸酐溶液中，充分混合均勻，得到混合液6，使混合液6在通氮的條件下持續(xù)反應I小時，得到顆粒4，使顆粒4經過磁分離技術，待顆粒4完全吸附后，將含有顆粒4的混合液6的上清液去除；
[0110]S13、將上述顆粒4分散在I毫升濃度為0.lmol/L的嗎啉乙磺酸溶液中，充分分散后，加入I毫升濃度為0.lmol/L的N-羥基丁二酰亞胺，持續(xù)反應I小時，即得到顆粒5;
[0111]S14、將顆粒5在0.1毫升I3BS緩沖溶液中充分分散，得到混合液7，取I毫升混合液7與I微升待檢測物的相應抗體充分混合均勻，孵育I小時，得到顆粒5;
[0112]S15、將顆粒5經過磁分離技術，PBS溶液清洗2次，即得到單分散強磁性免疫納米微球。
[0113]實施例三:
[0114]S1、取濃度均為0.lmol/L的Fe3+的鹽溶液和Fe2+的鹽溶液，按體積比為I: I混合，取混合液10mL，加入5mL含有0.1%乳化劑的水溶液中，充分混合均勻，得到混合液I ；
[0115]S2、在混合液I中加入20 %的聚乙二醇-6000水溶液20mL，得到混合液2 ；
[0116]S3、將混合液2加熱至20°C，同時緩慢滴加濃度為20%的氨水稀釋液0.1毫升，保持溫度持續(xù)反應I小時，得到顆粒I;
[0117]S4、分別用無水乙醇和超純水各清洗3次顆粒I，將顆粒I進行磁分離技術，在65°C的溫度下干燥2小時，即得到了所述四氧化三鐵納米顆粒；
[0118]S5、將所述四氧化三鐵納米顆粒分散在含有I %十二烷基苯磺酸鈉水溶液中，再加入20mL濃度為20%的醇溶液中，充分混合均勻，得到混合液3;
[0119]S6、在混合液3中緩慢滴加5毫升濃度為0.lmol/1的四乙氧基硅烷溶液，反應I小時后再次加入濃度為0.lmol/1的氨水溶液調節(jié)PH值到8，得到混合液4;
[0120]S7、將混合液4繼續(xù)加熱到20 °C持續(xù)反應3小時，反應結束后，得到顆粒2 ；
[0121 ] S8、將顆粒2進行磁分離技術出表面經過硅羥基修飾的顆粒，用超純水清洗3次，在65°C真空環(huán)境下干燥2小時，即得到單分散硅羥基磁性納米微球；
[0122]S9、將單分散硅羥基磁性納米微球分散在濃度為50毫升20%的乙醇溶液中，充分混合均勻，得到混合液5;
[0123]S10、在混合液5中加入10微升3-氨丙基三乙氧基硅烷或硅烷偶聯劑KH-550，使其在25°C的溫度下反應I小時，反應結束后，得到顆粒3;
[0124]SI 1、將顆粒3進行磁分離技術，用75 %的乙醇溶液清洗3次，在65 °C真空環(huán)境下干燥2小時，即得到單分散氨基化磁性納米微球；
[0125]S12、將單分散氨基化磁性納米微球分散在0.1毫升I3BS溶液中，加入0.1毫升質量分數為10 %的戊二醛溶液，充分混合均勻，得到混合液8，讓混合液8持續(xù)反應I小時，即可得顆粒6;
[0126]S13、將顆粒6再次分散在0.1毫升PBS溶液中，加入I微升待檢測物的相應抗體，進行孵育I小時，得到顆粒7;
[0127]S14、將顆粒7用PBS清洗2次后，加入到甘氨酸溶液中，使其混合反應，得到顆粒8，將顆粒8用PBS清洗2次后，再經過磁分離技術，既可以得到單分散強磁性免疫納米微球。
[0128]實施例四
[0129]S1、取濃度均為3mol/L的Fe3+的鹽溶液和Fe2+的鹽溶液，按體積比為10:1混合，取混合液10mL，加入500mL含有10%乳化劑的水溶液中，充分混合均勻，得到混合液I ；
[0130]S2、在混合液I中加入80%的聚乙二醇-6000水溶液100mL，得到混合液2 ；
[0131 ] S3、將混合液2加熱至50 0C，同時緩慢滴加濃度為75 %的氨水稀釋液0.5毫升，保持溫度持續(xù)反應3小時，得到顆粒I;
[0132]S4、分別用無水乙醇和超純水各清洗3次顆粒I，將顆粒I進行磁分離技術，在65°C的溫度下干燥2小時，即得到了所述四氧化三鐵納米顆粒；
[0133]S5、將所述四氧化三鐵納米顆粒分散在含有10%十二烷基苯磺酸鈉水溶液中，再加入200mL濃度為80%的醇溶液中，充分混合均勻，得到混合液3;
[0134]S6、在混合液3中緩慢滴加30毫升濃度為Imo I /I的四乙氧基硅烷溶液，反應1小時后再次加入濃度為0.5mol/l的氨水溶液調節(jié)PH值到12，得到混合液4;
[0135]S7、將混合液4繼續(xù)加熱到70 °C持續(xù)反應5小時，反應結束后，得到顆粒2;
[0136]S8、將顆粒2進行磁分離技術出表面經過硅羥基修飾的顆粒，用超純水清洗3次，在65°C真空環(huán)境下干燥2小時，即得到單分散硅羥基磁性納米微球；
[0137]S9、將單分散硅羥基磁性納米微球分散在濃度為500毫升80%的的乙醇溶液中，充分混合均勻，得到混合液5;
[0138]S10、在混合液5中加入100微升3-氨丙基三乙氧基硅烷或硅烷偶聯劑KH-550，使其在60°C的溫度下反應10小時，反應結束后，得到顆粒3;
[0139]SI 1、將顆粒3進行磁分離技術，用75 %的乙醇溶液清洗3次，在65 °C真空環(huán)境下干燥2小時，即得到單分散氨基化磁性納米微球；
[0140]S12、將單分散氨基化磁性納米微球分散在10毫升I3BS溶液中，加入10毫升質量分數為10%的戊二醛溶液，充分混合均勻，得到混合液8，讓混合液8持續(xù)反應3小時，即可得顆粒6;
[0141]S13、將顆粒6再次分散在10毫升PBS溶液中，加入100微升待檢測物的相應抗體，進行孵育3小時，得到顆粒7;
[0142]S14、將顆粒7用PBS清洗2次后，加入到甘氨酸溶液中，使其混合反應，得到顆粒8，將顆粒8用PBS清洗2次后，再經過磁分離技術，既可以得到單分散強磁性免疫納米微球。
[0143]在本說明書的描述中，參考術語“一個實施例”、“一個實施例或示例中。在本說明書中，對上述術語的示意性表述不必須針對的是相同的實施例或示例。而且，描述的具體特征、結構、材料或者特點可以些實施例”、“示例”、“具體示例”、或“一些示例”等的描述意指結合該實施例或示例描述的具體特征、結構、材料或者特點包含于本發(fā)明的至少在任一個或多個實施例或示例中以合適的方式結合。此外，在不相互矛盾的情況下，本領域的技術人員可以將本說明書中描述的不同實施例或以示例及不同實施例或示例的特征進行結合和組合。
[0144]盡管上面已經示出和描述了本發(fā)明的實施例，可以理解的是，上述實施例是示例性的，不能理解為對本發(fā)明的限制，本領域的普通技術人員在本發(fā)明的范圍內可以對上述實施例進行變化、修改、替換和變型。
【主權項】
1.一種單分散強磁性免疫納米微球，其特征在于，所述單分散強磁性免疫納米微球的粒徑為5nm_5um02.—種單分散強磁性免疫納米微球的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: 步驟一、四氧化三鐵納米顆粒的制備； 步驟二、單分散硅羥基磁性納米微球的制備； 步驟三、單分散氨基化磁性納米微球的制備； 步驟四、單分散強磁性免疫納米微球的制備。3.根據權利要求2所述的一種單分散強磁性免疫納米微球的制備方法，其特征在于，所述步驟一包括以下步驟: 51、取濃度均為0.1?3mol/L的Fe3+的鹽溶液和Fe2+的鹽溶液，按體積比為1:1?10:1混合，取混合液lO-lOOmL，加入5-500mL含有0.1 %_10%乳化劑的水溶液中，充分混合均勻，得到混合液I; 52、在混合液I中加入20%-80 %的聚乙二醇-6000水溶液20-1OOmL，得到混合液2 ； 53、將混合液2加熱至20?50°C，同時緩慢滴加濃度為20%?75%的氨水稀釋液0.1?0.5毫升，保持溫度持續(xù)反應I?3小時，得到顆粒I; 54、分別用無水乙醇和超純水各清洗3次顆粒I，將顆粒I進行磁分離技術，在65°C的溫度下干燥2小時，即得到了所述四氧化三鐵納米顆粒。4.根據權利要求2所述的一種單分散強磁性免疫納米微球的制備方法，其特征在于，所述步驟二包括以下步驟: 51、將所述四氧化三鐵納米顆粒分散在含有I%-10%十二烷基苯磺酸鈉水溶液中，再加入20-200mL濃度為20%-80%的醇溶液中，充分混合均勻，得到混合液3; 52、在混合液3中緩慢滴加5?30毫升濃度為0.1?lmol/1的四乙氧基硅烷溶液，反應I?10小時后再次加入濃度為0.1?0.5mol/l的氨水溶液調節(jié)PH值到8?12，得到混合液4; 53、將混合液4繼續(xù)加熱到20?700C持續(xù)反應3?5小時，反應結束后，得到顆粒2 ； 54、將顆粒2進行磁分離技術出表面經過硅羥基修飾的顆粒，用超純水清洗3次，在65°C真空環(huán)境下干燥2小時，即得到單分散硅羥基磁性納米微球。5.根據權利要求2所述的一種單分散強磁性免疫納米微球的制備方法，其特征在于，所述步驟三包括以下步驟: 51、將單分散硅羥基磁性納米微球分散在濃度為50?500毫升20% -80 %的的乙醇溶液中，充分混合均勻，得到混合液5; 52、在混合液5中加入10?100微升3-氨丙基三乙氧基硅烷或硅烷偶聯劑KH-550，使其在25?60°C的溫度下反應I?10小時，反應結束后，得到顆粒3; 53、將顆粒3進行磁分離技術，用75%的乙醇溶液清洗3次，在65°C真空環(huán)境下干燥2小時，即得到單分散氨基化磁性納米微球。6.根據權利要求2所述的一種單分散強磁性免疫納米微球的制備方法，其特征在于，所述步驟四包括以下步驟: S1、將單分散氨基化磁性納米微球分散在I?10毫升濃度為0.1?3mol/L的丁二酸酐溶液中，充分混合均勻，得到混合液6，使混合液6在通氮的條件下持續(xù)反應I?10小時，得到顆粒4，使顆粒4經過磁分離技術，待顆粒4完全吸附后，將含有顆粒4的混合液6的上清液去除； 52、將上述顆粒4分散在I?10毫升濃度為0.1?lmol/L的嗎啉乙磺酸溶液中，充分分散后，加入I?10毫升濃度為0.1?lmol/L的N-羥基丁二酰亞胺，持續(xù)反應1-3小時，即得到顆粒5; 53、將顆粒5在0.1?10毫升PBS緩沖溶液中充分分散，得到混合液7，取I?20毫升混合液7與I?100微升待檢測物的相應抗體充分混合均勻，孵育I?5小時，得到顆粒5; 54、將顆粒5經過磁分離技術，PBS溶液清洗2次，即得到單分散強磁性免疫納米微球。7.根據權利要求2所述的一種單分散強磁性免疫納米微球的制備方法，其特征在于，所述步驟四包括以下步驟: 51、將單分散氨基化磁性納米微球分散在0.1-10毫升I3BS溶液中，加入0.1-10毫升質量分數為10 %的戊二醛溶液，充分混合均勻，得到混合液8，讓混合液8持續(xù)反應I?3小時，即可得顆粒6; 52、將顆粒6再次分散在0.1-10毫升I3BS溶液中，加入I?100微升待檢測物的相應抗體，進行孵育1-3小時，得到顆粒7; 53、將顆粒7用PBS清洗2次后，加入到甘氨酸溶液中，使其混合反應，得到顆粒8，將顆粒8用PBS清洗2次后，再經過磁分離技術，既可以得到單分散強磁性免疫納米微球。8.根據權利要求2所述的一種單分散強磁性免疫納米微球的制備方法，其特征在于，所述單分散強磁性免疫納米微球的粒徑為5nm-5um09.根據權利要求4所述的一種單分散強磁性免疫納米微球的制備方法，其特征在于，所述醇溶液為異丙醇、乙醇、正己醇溶液中的一種或多種的混合物。10.根據權利要求7所述的一種單分散強磁性免疫納米微球的制備方法，其特征在于，所述待檢測物的相應抗體為任意一種可用所述單分散強磁性免疫納米微球檢測的致病菌的相對應的抗體。
【文檔編號】H01F1/01GK105869813SQ201610392204
【公開日】2016年8月17日
【申請日】2016年6月3日
【發(fā)明人】楊磊
【申請人】杭州卓立納米科技有限公司