間充質(zhì)干細(xì)胞衍生液及其制備方法和在化妝品中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種護(hù)膚品及其制備方法和應(yīng)用，特別涉及一種間充質(zhì)干細(xì)胞衍生液及其制備方法和在化妝品中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]進(jìn)入21世紀(jì)以來，隨著國家的不斷發(fā)展，社會(huì)的不斷進(jìn)步，人們生活水平的提高及對(duì)自身美的追求，人們尤其是女性對(duì)于日常生活護(hù)膚美容愈加重視，而目前市場(chǎng)上的化妝品產(chǎn)品魚龍混雜，良莠不齊，消費(fèi)者難以鑒別。
[0003]很多精細(xì)化工護(hù)膚品含有鉛汞、乙醇、著色劑及礦物油等對(duì)人體肌膚有害的物質(zhì)，消費(fèi)者每天在使用這些護(hù)膚品的同時(shí)，不知不覺對(duì)自身皮膚造成了一定的損害，嚴(yán)重的還會(huì)造成皮炎及感染問題。而且現(xiàn)有市場(chǎng)出售的化妝品，大多是通過植物成分提取或精細(xì)化工制作工藝加工而成，其產(chǎn)品中的大分子物質(zhì)不易被皮膚吸收，造成皮膚的額外負(fù)擔(dān)。另外由于技術(shù)瓶頸和產(chǎn)能原因，目前階段的化妝品產(chǎn)品基本都不具有生物活性，不能從根本上改善表皮細(xì)胞的生存環(huán)境和新陳代謝，對(duì)于外界因素造成的皮膚損害沒有修復(fù)作用，尤其不適宜皮膚敏感或孕婦使用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]為了克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，本發(fā)明提供了一種間充質(zhì)干細(xì)胞衍生液及其制備方法和在化妝品中的應(yīng)用。該間充質(zhì)干細(xì)胞衍生液保濕效果好；能明顯減少細(xì)紋、提高皮膚光滑度；改善皮膚彈性；改善皮膚泛紅、脫皮和炎癥的狀況，減少皮膚過敏的發(fā)生；其制備方法簡(jiǎn)單，可以進(jìn)行大規(guī)模推廣形成產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)加工
[0005]—種間充質(zhì)干細(xì)胞衍生液的制備方法，包括以下步驟:
[0006](I)使用間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基對(duì)胎盤脂肪組織來源的間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，收集細(xì)胞培養(yǎng)液；
[0007](2)向步驟(I)所得細(xì)胞培養(yǎng)液中加入1-3丙二醇、透明質(zhì)酸鈉和蜂王漿，即得間充質(zhì)干細(xì)胞衍生液。
[0008]—種間充質(zhì)干細(xì)胞衍生液的制備方法，還優(yōu)選的向步驟⑴所得細(xì)胞培養(yǎng)液中加入生長(zhǎng)因子、谷胱甘肽、海藻糖和殼寡糖。
[0009]—種間充質(zhì)干細(xì)胞衍生液的制備方法，在所述間充質(zhì)干細(xì)胞衍生液中:1-3丙二醇的濃度為50-100g/L ;透明質(zhì)酸鈉的濃度為5-10mg/L ;蜂王漿的濃度為3?6mg/L。
[0010]—種間充質(zhì)干細(xì)胞衍生液的制備方法，其中所述生長(zhǎng)因子包括:干細(xì)胞生長(zhǎng)因子、拮抗黑色素生長(zhǎng)因子和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，在間充質(zhì)干細(xì)胞衍生液中:干細(xì)胞生長(zhǎng)因子的濃度為0.5?2mg/L、拮抗黑色素生長(zhǎng)因子的濃度為3?5mg/L、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的濃度為I?3mg/L ;谷胱甘肽的濃度為2?8mg/L ;海藻糖的濃度為4?6mg/L ;殼寡糖的濃度為2 ?8mg/L0
[0011]一種間充質(zhì)干細(xì)胞衍生液的制備方法，在間充質(zhì)干細(xì)胞衍生液中:優(yōu)選的使1-3丙二醇的濃度為100g/L、透明質(zhì)酸鈉的濃度為8mg/L、蜂王漿的濃度為5mg/L、干細(xì)胞生長(zhǎng)因子的濃度為1.5mg/L、拮抗黑色素生長(zhǎng)因子的濃度為4mg/L、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的濃度為2mg/L、谷胱甘肽的濃度為5mg/L、海藻糖的濃度為5mg/L、殼寡糖的濃度為4mg/L。殼寡糖又叫低聚殼聚糖，是將殼聚糖經(jīng)降解得到的一種聚合度在2?20之間寡糖產(chǎn)品，分子量< 3200Da，是水溶性較好、功能作用大、生物活性高的低分子量產(chǎn)品。
[0012]—種間充質(zhì)干細(xì)胞衍生液的制備方法，其中所述間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基即通過商業(yè)渠道可獲得的適合脂肪組織來源間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基即可，如:德國promocell公司的、產(chǎn)品名稱為間充質(zhì)干細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基。該培養(yǎng)基是為脂肪組織來源的人類間充質(zhì)干細(xì)胞設(shè)計(jì)的，可以支持人類間充質(zhì)干細(xì)胞的擴(kuò)增，但不會(huì)出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基中觀察到的細(xì)胞被誘導(dǎo)導(dǎo)致提早衰老和分化的現(xiàn)象，該培養(yǎng)基沒有任何動(dòng)物源性成分，除了人來源的人類血清白蛋白。
[0013]—種間充質(zhì)干細(xì)胞衍生液的制備方法，其中所述胎盤脂肪組織來源的間充質(zhì)干細(xì)胞是通過以下方式獲得的:(I)沖洗胎盤組織，優(yōu)選使用含有紅霉素的硫酸鹽緩沖液沖洗胎盤組織；(2)將胎盤組織處理成小塊后，優(yōu)選I?2_3的小塊，再將真皮脂肪層面朝下平鋪于培養(yǎng)皿中，加入中性蛋白酶II，18_24h后除去表皮，得到預(yù)處理好的胎盤脂肪組織來源的間充質(zhì)干細(xì)胞。將胎盤組織剪成小塊可以得到最好的存活率。
[0014]—種間充質(zhì)干細(xì)胞衍生液的制備方法，其中所述對(duì)胎盤脂肪組織來源的間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)包括原代培養(yǎng)，優(yōu)選的還包括傳代培養(yǎng)以獲得更多的細(xì)胞培養(yǎng)液，所述原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)可以采用現(xiàn)有技術(shù)中的常規(guī)方法，如:在間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基中加入青霉素和鏈霉素，使其濃度均為1001]/1111，在37°(:、3-5% CO2的條件下進(jìn)行培養(yǎng)，每2_5天更換一次間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)液；當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合狀態(tài)時(shí)傳代，傳代時(shí)用0.25%的胰酶消化3-5分鐘，使細(xì)胞脫離瓶壁，將細(xì)胞懸浮液離心棄上清，細(xì)胞稀釋2-3倍進(jìn)行傳代培養(yǎng)，在37°C、3-5% CO2的條件下進(jìn)行傳代培養(yǎng)時(shí)，每一代優(yōu)選培養(yǎng)14天。
[0015]—種間充質(zhì)干細(xì)胞衍生液的制備方法，其中步驟⑴中所述收集細(xì)胞培養(yǎng)液優(yōu)選收集傳代至3-7代的細(xì)胞培養(yǎng)液。當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)至3?7代時(shí)，其產(chǎn)生的對(duì)皮膚有利的活性蛋白分子達(dá)到最大峰值，但是傳代次數(shù)超過7代時(shí)會(huì)產(chǎn)生對(duì)皮膚組織不利的的代謝產(chǎn)物，因此獲取傳代至3?7代的細(xì)胞培養(yǎng)液是最合適的。
[0016]—種間充質(zhì)干細(xì)胞衍生液的制備方法，其中所述胎盤優(yōu)選來源于人。
[0017]一種通過上述制備方法獲得的間充質(zhì)干細(xì)胞衍生液。
[0018]—種上述間充質(zhì)干細(xì)胞衍生液在化妝品中的應(yīng)用。
[0019]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果:
[0020]1、本發(fā)明間充質(zhì)干細(xì)胞衍生液能夠起到促進(jìn)皮膚上皮細(xì)胞分裂增殖、抗輻射抗氧化及去自由基等作用的護(hù)膚效果；長(zhǎng)效保濕效果好；能明顯減少細(xì)紋、提高皮膚光滑度，使用8周后試驗(yàn)組的平均最深皺紋深度減少16 %，平均皺紋深度減少9 %，平均皺紋總數(shù)量減少10% ;改善皮膚彈性，使用28天后試驗(yàn)組的平均皮膚彈性值增加了 21% ;改善皮膚泛紅狀況；且本發(fā)明間充質(zhì)干細(xì)胞衍生液未出現(xiàn)不良反應(yīng)，在美容護(hù)膚品市場(chǎng)上具有良好的發(fā)展空間；
[0021]2、本發(fā)明間充質(zhì)干細(xì)胞衍生液擺脫了傳統(tǒng)的植物成分萃取和精細(xì)化工生產(chǎn)工藝，采用細(xì)胞工程的方法、通過培養(yǎng)人胎盤脂肪組織來源的間充質(zhì)干細(xì)胞獲得含有親人體皮膚的有益活性蛋白分子的間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)液，將所得細(xì)胞培養(yǎng)液作為整個(gè)產(chǎn)品充質(zhì)干細(xì)胞衍生液的基礎(chǔ)配方，而且間充質(zhì)干細(xì)胞衍生液中不添加化工添加物，如:乙醇、鉛汞、著色劑、礦物油等致敏毒素，最大程度保證了產(chǎn)品持續(xù)使用的安全性；
[0022]3、本發(fā)明在間充質(zhì)干細(xì)胞衍生液中加入1-3丙二醇和蜂王漿，可以提高皮膚組織的抗氧化能力、修復(fù)光照引發(fā)的肌膚老化現(xiàn)象、提高皮膚真皮層組織細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的分裂增殖力；本發(fā)明在間充質(zhì)干細(xì)胞衍生液中加入了干生長(zhǎng)因子、拮抗黑色素生長(zhǎng)因子、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，這幾種生長(zhǎng)因子具有促進(jìn)皮膚重金屬離子毒素排除、強(qiáng)化皮膚屏障防御機(jī)能、對(duì)抗自由基抗氧化的功效；其中的活性因子包括干細(xì)胞生長(zhǎng)因子，拮抗黑色素生長(zhǎng)因子及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，對(duì)于皮膚的美白補(bǔ)水修復(fù)具有更好的效果。本發(fā)明還特別添加海藻糖，其能夠促進(jìn)皮膚內(nèi)在膠原及彈性纖維產(chǎn)生、加強(qiáng)皮膚角質(zhì)層細(xì)胞對(duì)外界環(huán)境的防御機(jī)能；本發(fā)明間充質(zhì)干細(xì)胞衍生液中的各種配方成分互相協(xié)同，得以實(shí)現(xiàn)其最佳的皮膚保養(yǎng)效果；
[0023]4、本發(fā)明間充質(zhì)干細(xì)胞衍生液的制備方法簡(jiǎn)單，可以進(jìn)行大規(guī)模推廣形成產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)加工。
【附圖說明】
[0024]圖1為實(shí)施例4中進(jìn)行改善皮膚彈性效果測(cè)試時(shí)，試驗(yàn)前后試驗(yàn)組和對(duì)照組志愿者皮膚彈性值的數(shù)據(jù)圖；
[0025]圖2為實(shí)施例4中進(jìn)行改善皮膚泛紅狀況測(cè)試時(shí)，志愿者使用本發(fā)明產(chǎn)品前后的皮膚圖片。
【具體實(shí)施方式】
[0026]下面結(jié)合附圖，對(duì)本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】進(jìn)行詳細(xì)描述，但應(yīng)當(dāng)理解本發(fā)明的保護(hù)范圍并不受【具體實(shí)施方式】的限制。
[0027]以下實(shí)施例使用的間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基是德國promocell公司的、名稱為間充質(zhì)干細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基的產(chǎn)品；以下實(shí)施例中的人胎盤脂肪組織來源的間充質(zhì)干細(xì)胞是通過以下方式獲得的:沖洗人胎盤組織后將其剪成Imm3小塊，將該組織的真皮脂肪層面朝下平鋪于培養(yǎng)皿中，加入DispaseII (中性蛋白酶)24h后，除去表皮，得到預(yù)處理好的胎盤脂肪組織來源的間充質(zhì)干細(xì)胞；以下實(shí)施例中的原代培養(yǎng)為在37°C、3% CO2的條件下進(jìn)行培養(yǎng)，每2天更換一次間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)液，當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合狀態(tài)時(shí)傳代；以下實(shí)施例中的傳代培養(yǎng)為:傳代時(shí)用0.25%的胰蛋白酶對(duì)原代培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行消化3分鐘，使細(xì)胞脫離瓶壁，加入牛血清蛋白終止反應(yīng)，將細(xì)胞懸浮并離心棄上清后，細(xì)胞稀釋2倍進(jìn)行傳代培養(yǎng)，在37°C、3% 0)2的條件下進(jìn)行傳代培養(yǎng)，每一代