一種古代羊毛織品雙抗夾心法檢測試紙的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于古代羊毛織品痕跡的檢測領(lǐng)域，尤其涉及一種快速檢測古代羊毛織品的雙抗夾心法檢測試紙的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]古代在北方地區(qū)毛織品廣泛應(yīng)用于服飾和毛毯，而羊毛織物占絕大多數(shù)。出土的大量毛織物其精美程度不亞于出土的絲綢文物，這不僅是古代紡織技術(shù)演變的重要實(shí)物證據(jù)，也對研究古代社會(huì)環(huán)境和人文活動(dòng)具有重要參考價(jià)值。而現(xiàn)有技術(shù)中缺乏對古代絲織品中羊毛角蛋白鑒定的深入研究。
[0003]羊毛角蛋白是一種硬化，不易溶解的蛋白質(zhì)，其中既有含羧基等在內(nèi)的酸性基，也有含胺基，亞胺基等在內(nèi)的堿性基，所以在酸、堿、鹽、氧化劑、還原劑、鹵素等中羊毛都具有一定的不穩(wěn)定性。在絲織品文物鑒定中，這對羊毛制品的鑒別造成了一定困難。現(xiàn)有技術(shù)中，基于Elisa法的原理，如何能夠在考古現(xiàn)場快捷，方便，準(zhǔn)確地鑒別出羊毛織品，為古代羊毛織品發(fā)展研究提供依據(jù)，是現(xiàn)有技術(shù)需要解決的問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]為了解決上述問題，本發(fā)明提供一種古代羊毛織品雙抗夾心法檢測試紙的制備方法，從而針對上述現(xiàn)有技術(shù)存在的問題提供一種直觀的，快捷的檢測方法。
[0005]為此，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:一種古代羊毛織品雙抗夾心法檢測試紙的制備方法，其特征在于采用以下步驟:
A)制備金納米粒子，采用梓檬酸鈉還原氯金酸的方法制備出粒徑為25-50nm的金納米粒子；即將100ml的質(zhì)量濃度為0.01%的氯金酸溶液水浴加熱至沸騰，迅速加入1.0-1.5ml的質(zhì)量濃度為1%的檸檬酸鈉溶液，煮沸7-10min，溶液呈現(xiàn)出紅色，即制得金納米溶膠；
B)制備金標(biāo)兔抗角蛋白抗體，用0.lmo 1 /1的ΚΚ03溶液將100ml的膠體金溶液調(diào)節(jié)PH至9.2，攪拌的加入兔抗角蛋白抗體20-50μ1，所述抗體濃度為3.15mg/ml ；接著加入5ml的質(zhì)量濃度為1%_10%的聚乙二醇20000溶液，室溫下攪拌5min，然后在9000-11000r/min下離心40-60min，棄去上清液;將沉淀溶于0.0lmol/Ι的PH為8.2的三羥甲基氨基甲烷緩沖液，即Tri s-HCl溶液，所述Tr is-HCl溶液中各組分質(zhì)量濃度比例為0.15%的吐溫-20，1%的牛血清蛋白，5%的蔗糖;于4°C下保存；
C)組裝試紙條，用噴膜機(jī)將5-20μ1、用PH8.2的Tris-HCl溶液稀釋100-400倍的鼠抗角蛋白抗體溶液和羊抗兔抗體溶液分別噴在長2.5cm、寬4mm的硝酸纖維素膜的檢測線和質(zhì)控線上，37°C烘干備用;將用質(zhì)量濃度比例為0.15%的吐溫-20、1%的牛血清蛋白、5%的蔗糖，PH為8.2的Tr i s-HCl溶液稀釋10_20倍的金標(biāo)記的兔抗角蛋白抗體包被在膠體金結(jié)合墊上，37°C烘干備用;將樣品墊、膠體金結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊依次組裝在PVC底板上，用切刀切割成4_寬的試紙條，放入帶干燥劑的鋁箔袋中密封儲存；
D)取lg紡織品痕跡樣，溶解于50-100ml、PH為8.2的Tris-HCl緩沖液中，攪拌均勻，2h后取一滴上清液滴在組裝好的試紙條的樣品墊上；5-10min后，檢測線和質(zhì)控線均顯出紅色，說明樣品中含有角蛋白，該紡織品痕跡為羊毛織品的痕跡。
[0006]本發(fā)明的有益成果是:本發(fā)明采用雙抗夾心免疫膠體金層析對古代羊毛織品進(jìn)行檢測，相比現(xiàn)有技術(shù)，該方法簡單快捷，靈敏度高，特異性強(qiáng)，結(jié)果直觀，更適合考古現(xiàn)場分析。
【具體實(shí)施方式】
[0007]實(shí)施例1采用以下步驟:
A)制備金納米粒子，采用梓檬酸鈉還原氯金酸的方法制備出粒徑為25nm的金納米粒子;即將100ml的質(zhì)量濃度為0.01%的氯金酸溶液水浴加熱至沸騰，迅速加入1.0ml的質(zhì)量濃度為1%的檸檬酸鈉溶液，煮沸7min，溶液呈現(xiàn)出紅色，即制得金納米溶膠；
B)制備金標(biāo)兔抗角蛋白抗體，用0.lmo 1 /1的KW03溶液將100ml的膠體金溶液調(diào)節(jié)PH至9.2，攪拌的加入兔抗角蛋白抗體2(^1，所述抗體濃度為3.1511^/1]11;接著加入51]11的質(zhì)量濃度為1%%的聚乙二醇20000溶液，室溫下攪拌5min，然后在9000r/min下離心60min，棄去上清液;將沉淀溶于0.0lmol/Ι的PH為8.2的三羥甲基氨基甲烷緩沖液，即Tris_HCl溶液，所述Tris-HCl溶液中各組分質(zhì)量濃度比例為0.15%的吐溫-20，1%的牛血清蛋白，5%的蔗糖;于41下保存；
C)組裝試紙條，用噴膜機(jī)將5μ1、用PH8.2的Tris-HCl溶液稀釋100倍的鼠抗角蛋白抗體溶液和羊抗兔抗體溶液分別噴在長2.5cm、寬4mm的硝酸纖維素膜的檢測線和質(zhì)控線上，37°C烘干備用;將用質(zhì)量濃度比例為0.15%的吐溫-20、1%的牛血清蛋白、5%的蔗糖，PH為8.2的Tris-HCl溶液稀釋10倍的金標(biāo)記的兔抗角蛋白抗體包被在膠體金結(jié)合墊上，37°C烘干備用;將樣品墊、膠體金結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊依次組裝在PVC底板上，用切刀切割成4_寬的試紙條，放入帶干燥劑的鋁箔袋中密封儲存；
D)取lg紡織品痕跡樣，溶解于50ml、PH為8.2的Tris-HCl緩沖液中，攪拌均勻，2h后取一滴上清液滴在組裝好的試紙條的樣品墊上;5min后，檢測線和質(zhì)控線均顯出紅色，說明樣品中含有角蛋白，該紡織品痕跡為羊毛織品的痕跡。
[0008]實(shí)施例2采用以下步驟:
A)制備金納米粒子，采用梓檬酸鈉還原氯金酸的方法制備出粒徑為40nm的金納米粒子；即將100ml的質(zhì)量濃度為0.01%的氯金酸溶液水浴加熱至沸騰，迅速加入1.25ml的質(zhì)量濃度為1%的檸檬酸鈉溶液，煮沸8min，溶液呈現(xiàn)出紅色，即制得金納米溶膠；
B)制備金標(biāo)兔抗角蛋白抗體，用0.lmo 1 /1的KW03溶液將100ml的膠體金溶液調(diào)節(jié)PH至9.2，攪拌的加入兔抗角蛋白抗體35口1，所述抗體濃度為3.1511^/1]11;接著加入51]11的質(zhì)量濃度為5%的聚乙二醇20000溶液，室溫下攪拌5min，然后在0000r/min下離心50min，棄去上清液;將沉淀溶于0.0lmol/Ι的PH為8.2的三羥甲基氨基甲烷緩沖液，即Tris_HCl溶液，所述Tris-HCl溶液中各組分質(zhì)量濃度比例為0.15%的吐溫-20，1%的牛血清蛋白，5%的蔗糖;于41下保存；
C)組裝試紙條，用噴膜機(jī)將12μ1、用PH8.2的Tris-HCl溶液稀釋250倍的鼠抗角蛋白抗體溶液和羊抗兔抗體溶液分別噴在長2.5cm、寬4mm的硝酸纖維素膜的檢測線和質(zhì)控線上，37°C烘干備用;將用質(zhì)量濃度比例為0.15%的吐溫-20、1%的牛血清蛋白、5%的蔗糖，PH為8.2的Tr is-HCl溶液稀釋15倍的金標(biāo)記的兔抗角蛋白抗體包被在膠體金結(jié)合墊上，37°C烘干備用;將樣品墊、膠體金結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊依次組裝在PVC底板上，用切刀切割成4_寬的試紙條，放入帶干燥劑的鋁箔袋中密封儲存；
D)取lg紡織品痕跡樣，溶解于75ml、PH為8.2的Tris-HCl緩沖液中，攪拌均勻，2h后取一滴上清液滴在組裝好的試紙條的樣品墊上;8min后，檢測線和質(zhì)控線均顯出紅色，說明樣品中含有角蛋白，該紡織品痕跡為羊毛織品的痕跡。
[0009]實(shí)施例3采用以下步驟:
A)制備金納米粒子，采用梓檬酸鈉還原氯金酸的方法制備出粒徑為50nm的金納米粒子；即將100ml的質(zhì)量濃度為0.01%的氯金酸溶液水浴加熱至沸騰，迅速加入1.5ml的質(zhì)量濃度為1%的檸檬酸鈉溶液，煮沸l(wèi)Omin，溶液呈現(xiàn)出紅色，即制得金納米溶膠；
B)制備金標(biāo)兔抗角蛋白抗體，用0.lmo 1 /1的KW03溶液將100ml的膠體金溶液調(diào)節(jié)PH至9.2，攪拌的加入兔抗角蛋白抗體5(^1，所述抗體濃度為3.1511^/1]11;接著加入51]11的質(zhì)量濃度為10%的聚乙二醇20000溶液，室溫下攪拌5min，然后在11000r/min下離心40min，棄去上清液;將沉淀溶于0.0lmol/Ι的PH為8.2的三羥甲基氨基甲烷緩沖液，即Tris-HCl溶液，所述Tris-HCl溶液中各組分質(zhì)量濃度比例為0.15%的吐溫-20，1%的牛血清蛋白，5%的蔗糖;于4°C下保存；
C)組裝試紙條，用噴膜機(jī)將20μ1、用PH8.2的Tr i s_HCl溶液稀釋400倍的鼠抗角蛋白抗體溶液和羊抗兔抗體溶液分別噴在長2.5cm、寬4mm的硝酸纖維素膜的檢測線和質(zhì)控線上，37°C烘干備用;將用質(zhì)量濃度比例為0.15%的吐溫-20、1%的牛血清蛋白、5%的蔗糖，PH為
8.2的Tr is-HCl溶液稀釋20倍的金標(biāo)記的兔抗角蛋白抗體包被在膠體金結(jié)合墊上，37°C烘干備用;將樣品墊、膠體金結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊依次組裝在PVC底板上，用切刀切割成4_寬的試紙條，放入帶干燥劑的鋁箔袋中密封儲存；
D)取1g紡織品痕跡樣，溶解于100ml、PH為8.2的Tri s_HCl緩沖液中，攪拌均勻，2h后取一滴上清液滴在組裝好的試紙條的樣品墊上；lOmin后，檢測線和質(zhì)控線均顯出紅色，說明樣品中含有角蛋白，該紡織品痕跡為羊毛織品的痕跡。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種古代羊毛織品雙抗夾心法檢測試紙的制備方法，其特征在于采用以下步驟: A)制備金納米粒子，采用梓檬酸鈉還原氯金酸的方法制備出粒徑為25-50nm的金納米粒子；即將100ml的質(zhì)量濃度為0.01%的氯金酸溶液水浴加熱至沸騰，迅速加入1.0-1.5ml的質(zhì)量濃度為1%的檸檬酸鈉溶液，煮沸7-10min，溶液呈現(xiàn)出紅色，即制得金納米溶膠； B)制備金標(biāo)兔抗角蛋白抗體，用0.lmo 1 /1的K2C03溶液將100ml的膠體金溶液調(diào)節(jié)PH至.9.2，攪拌的加入兔抗角蛋白抗體20-50μ1，所述抗體濃度為3.15mg/ml;接著加入5ml的質(zhì)量濃度為1%_10%的聚乙二醇20000溶液，室溫下攪拌5min，然后在9000-11000r/min下離心40-.60min，棄去上清液;將沉淀溶于0.0lmol/Ι的PH為8.2的三羥甲基氨基甲烷緩沖液，即Tris-HC1溶液，所述Tris-HCl溶液中各組分質(zhì)量濃度比例為0.15%的吐溫-20，1%的牛血清蛋白，.5%的蔗糖;于4°C下保存； C)組裝試紙條，用噴膜機(jī)將5-20μ1、用PH8.2的Tris-HCl溶液稀釋100-400倍的鼠抗角蛋白抗體溶液和羊抗兔抗體溶液分別噴在長2.5cm、寬4mm的硝酸纖維素膜的檢測線和質(zhì)控線上，37°C烘干備用;將用質(zhì)量濃度比例為0.15%的吐溫-20、1%的牛血清蛋白、5%的蔗糖，PH為8.2的Tr i s-HCl溶液稀釋10_20倍的金標(biāo)記的兔抗角蛋白抗體包被在膠體金結(jié)合墊上，.37°C烘干備用;將樣品墊、膠體金結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊依次組裝在PVC底板上，用切刀切割成4_寬的試紙條，放入帶干燥劑的鋁箔袋中密封儲存； D)取lg紡織品痕跡樣，溶解于50-100ml、PH為8.2的1^8-!1(:1緩沖液中，攪拌均勻，211后取一滴上清液滴在組裝好的試紙條的樣品墊上；5-10min后，檢測線和質(zhì)控線均顯出紅色，說明樣品中含有角蛋白，該紡織品痕跡為羊毛織品的痕跡。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種古代羊毛織品雙抗夾心法檢測試紙的制備方法，采用以下步驟：采用檸檬酸鈉還原氯金酸的方法制備出金納米粒子；制備金標(biāo)兔抗角蛋白抗體；組裝試紙條，將樣品墊、膠體金結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊依次組裝在PVC底板上，用切刀切割成試紙條，放入帶干燥劑的鋁箔袋中密封儲存；取1g紡織品痕跡樣，溶解于50-100ml、PH為8.2的Tris-HCl緩沖液中，攪拌均勻，2h后取一滴上清液滴在組裝好的試紙條的樣品墊上；5-10min后，檢測線和質(zhì)控線均顯出紅色，說明樣品中含有角蛋白，該紡織品痕跡為羊毛織品的痕跡。相比現(xiàn)有技術(shù)，該方法簡單快捷，靈敏度高，特異性強(qiáng)，結(jié)果直觀，更適合考古現(xiàn)場分析。
【IPC分類】G01N33/68, G01N33/531
【公開號】CN105424920
【申請?zhí)枴緾N201510726352
【發(fā)明人】胡智文, 蘇孝鵬, 王秉
【申請人】浙江理工大學(xué)
【公開日】2016年3月23日
【申請日】2015年10月30日