Na2CO3溶液煮沸30min三次脫膠，蒸餾水洗凈烘干后 得到纖維狀的絲素蛋白。用摩爾比為1: 2:8的CaCl2/C2H5OH/ H2O有機(jī)無(wú)機(jī)混合鹽將纖維狀 的絲素蛋白進(jìn)行溶解，溶解液于透析袋內(nèi)透析3天，然后在pH=6.5~7.5，溫度為37°〇±2°〇 的酶解條件下用中性蛋白酶進(jìn)行酶解，超濾膜過(guò)濾后濃縮冷凍干燥即得到納米級(jí)絲素蛋 白，尺寸為50~200nm〇
[0025] 1.2)將聚乙烯醇水浴加熱溶解于蒸餾水中，配制成濃度為8%~10%(W/V)的聚乙烯 醇溶液； 1.3) 將淀粉粉末分散于蒸餾水中，水浴加熱糊化，配制成濃度為3%~6%的淀粉溶液； 1.4) 將醋酸鋅配制成20~50%溶液； 2) 加熱水浴攪拌條件下，將納米絲素蛋白溶液、聚乙烯醇溶液和淀粉溶液按體積比2~ 8:12~18:9~15混合，混合時(shí)間0.5~Ih，得到混合液;水浴加熱溫度為40~60°C; 3) 向混合液中添加醋酸鋅溶液，醋酸鋅與納米絲素蛋白的質(zhì)量比為1:1~1:3,氫氧化 鈉溶液調(diào)節(jié)體系pH值至6~7,再攪拌混合0.5~lh，-12~-20°C冷凍處理8~12h，然后在25 ~35°C下解凍2~6h，冷凍和解凍環(huán)節(jié)反復(fù)2~4次，再次放入-12~-20°C預(yù)冷凍4~8h，最后 冷凍干燥18~30h，即得到本抑菌醫(yī)用敷料。
[0026] 下面將結(jié)合四個(gè)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的實(shí)施方案進(jìn)行詳細(xì)描述，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員 將會(huì)理解，下列實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明，而不應(yīng)視為限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例中未注明 具體條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者， 均為可以通過(guò)市售購(gòu)買獲得的常規(guī)產(chǎn)品。
[0027]表1為實(shí)施例1~4提供的含納米絲素蛋白的抑菌醫(yī)用敷料的各原料配方濃度，表2 為在表1所示納米絲素蛋白溶液、淀粉溶液和聚乙烯醇溶液濃度下三者的混合比例（體積 比）。表3為納米絲素蛋白和醋酸鋅質(zhì)量比。
[0028]表 1
每個(gè)實(shí)施例的反應(yīng)溫度、冷凍時(shí)間，反復(fù)凍融次數(shù)以及冷凍干燥的時(shí)間如表4所示。
經(jīng)過(guò)以上處理方式，獲得相應(yīng)的含納米絲素蛋白的抑菌醫(yī)用敷料。
[0030] 試驗(yàn)例 本發(fā)明實(shí)施例中所有的樣品，取樣(面積2cm*2cm)，并稱重，分別置于裝有人工體液 (Simulated Body Fluid, SBF)的燒杯中（浴比1:20)，燒杯口要密閉嚴(yán)實(shí)，然后將裝有SBF 及實(shí)驗(yàn)材料的燒杯置于37±0.2°C中振蕩48小時(shí)，將4個(gè)實(shí)施例樣品冷凍干燥沉重，計(jì)算各 實(shí)施例樣品降解情況;將降解液采用紫外-可見(jiàn)光于250nm~350nm掃描，并與納米絲素蛋白 樣品掃描結(jié)果進(jìn)行對(duì)照分析降解液中是否存在納米絲素蛋白；同時(shí)將降解液滅菌處理，采 用國(guó)標(biāo)細(xì)胞L-929小鼠成纖維細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞生長(zhǎng)性能測(cè)試，計(jì)算相對(duì)增殖率。
[0031 ]圖1為本發(fā)明實(shí)施例2得到的抑菌性醫(yī)用敷料成型后實(shí)物形態(tài)圖； 圖2為本發(fā)明實(shí)施例2得到的抑菌性醫(yī)用敷料經(jīng)掃描電鏡(SEM)拍攝所得斷面形貌結(jié)構(gòu) 圖，放大500倍。
[0032]另外，抗菌性醫(yī)用敷料根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)QBT2591-2003采用抑菌率定量測(cè)試法測(cè)試該醫(yī)用 敷料對(duì)金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的抑菌率效果表結(jié)果。抑菌率定量測(cè)試法采用肉膏蛋白 胨培養(yǎng)基。將敷料直接和菌液振蕩培養(yǎng)，使敷料同菌液充分的接觸，可以較為準(zhǔn)確的反映出 抗菌性敷料的抗菌性能。
[0033] (1)各實(shí)施例樣品48小時(shí)降解率，經(jīng)測(cè)定如圖3所示，實(shí)驗(yàn)顯示個(gè)樣品均有不同程 度的降解/溶失。
[0034] (2)各實(shí)施例樣品48小時(shí)降解液中，于250nm~350nm掃描顯不均存在與納米絲素 蛋白相似的氨基酸特征峰，如圖4所示。
[0035] (3)各實(shí)施例樣品48小時(shí)降解液對(duì)L-929小鼠成纖維細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞生長(zhǎng)性能測(cè)試 結(jié)果顯示，相對(duì)增殖率最大超過(guò)2.0，如表5所示。
[0036]表5各實(shí)施例降解液對(duì)L-929小鼠成纖維細(xì)胞的增殖率
(4)取各實(shí)施例樣品48小時(shí)降解液，測(cè)定其抑菌率(如表6所示），結(jié)果顯示均具有明顯 的抑菌效果。
[0037] 表6各實(shí)施例降解液抑菌率
最后需要說(shuō)明的是，以上實(shí)施例僅用以說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制，盡管申請(qǐng)人 參照較佳實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)說(shuō)明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，對(duì)本發(fā)明的 技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本技術(shù)方案的宗旨和范圍，均應(yīng)涵蓋在本發(fā)明 的權(quán)利要求范圍當(dāng)中。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種含納米絲素蛋白的抑菌醫(yī)用敷料，其特征在于:按如下步驟制備而成， 1) 備料:配制濃度為2.0%~4.0%(W/V)的納米絲素蛋白溶液;配制濃度為8%~10%(W/V) 的聚乙烯醇溶液;配制濃度為3%~6%(W/V)的淀粉溶液;配制濃度為20~50%(W/V)的醋酸鋅 溶液;納米絲素蛋白溶液、聚乙烯醇溶液、淀粉溶液和醋酸鋅溶液的溶劑均為蒸餾水； 2) 加熱水浴攪拌條件下，將納米絲素蛋白溶液、聚乙烯醇溶液和淀粉溶液按體積比2~ 8:12~18:9~15混合，混合時(shí)間0.5~lh，得到混合液； 3) 向混合液中添加醋酸鋅溶液，醋酸鋅與納米絲素蛋白的質(zhì)量比為1:1~1: 3，氫氧化 鈉溶液調(diào)節(jié)體系pH值至6~7,再攪拌混合0.5~lh，-12~-20°C冷凍處理8~12h，然后在25 ~35°C下解凍2~6h，冷凍和解凍環(huán)節(jié)反復(fù)2~4次，再次放入-12~-20°C預(yù)冷凍4~8h，最后 冷凍干燥18~30h，即得到本抑菌醫(yī)用敷料。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的含納米絲素蛋白的抑菌醫(yī)用敷料，其特征在于:所述納米絲素 蛋白溶液中的納米絲素蛋白通過(guò)如下方法制備得到:采用鹽溶酶解工藝，將廢舊的繭殼或 繭衣依次經(jīng)醚類、醇類有機(jī)溶劑浸泡以除去其中的蠟質(zhì)物、碳水化合物及灰分雜質(zhì)，然后通 過(guò)水煮沸進(jìn)行脫膠、鹽溶、透析、蛋白酶酶解后，濃縮、冷凍干燥即得到納米級(jí)絲素蛋白粉 末，尺寸為50~200nm〇3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含納米絲素蛋白的抑菌醫(yī)用敷料，其特征在于:步驟2)中納米 絲素蛋白溶液、淀粉溶液和聚乙烯醇溶液加熱水浴攪拌混合的水浴加熱溫度為40~60°C。
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種含納米絲素蛋白的抑菌醫(yī)用敷料，將納米絲素蛋白溶液、聚乙烯醇溶液和淀粉溶液按體積比2～8:12～18:9～15混合，得到混合液；向混合液中添加醋酸鋅溶液，調(diào)節(jié)體系pH值至6～7，再攪拌混合0.5～1h，-12～-20℃冷凍處理8～12h，然后在25～35℃下解凍2～6h，冷凍和解凍環(huán)節(jié)反復(fù)2～4次，再次放入-12～-20℃預(yù)冷凍4～8h，最后冷凍干燥18～30h，即得到本抑菌醫(yī)用敷料。本發(fā)明醫(yī)用敷料兼具抑菌性、促傷口愈合、提供營(yíng)養(yǎng)的功能，抑菌性明顯且有很好的促細(xì)胞生長(zhǎng)性能和成型性。
【IPC分類】C07K1/14, C07K14/435, C12P21/06, A61L26/00
【公開(kāi)號(hào)】CN105435300
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510988533
【發(fā)明人】王富平, 陳忠敏, 孟鑫, 梁敏, 胡辰, 龐亞妮
【申請(qǐng)人】重慶理工大學(xué)
【公開(kāi)日】2016年3月30日
【申請(qǐng)日】2015年12月25日