一種全緣馬尾藻多糖的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及一種全緣馬尾藻多糖的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 肺癌是導(dǎo)致全世界人群腫瘤相關(guān)的死亡最主要的原因，目前治療的有效性嚴(yán)重受 限，平均每10萬(wàn)病患中就有30例死亡。其中，非小細(xì)胞型肺癌在所有類(lèi)型的肺癌中占據(jù)了 80%的比例，而化學(xué)治療法仍然是現(xiàn)在治療的標(biāo)準(zhǔn)方法。雖然運(yùn)些治療策略極大地改善了 患者們的癥狀和生活質(zhì)量，但是病患的總體存活率仍然很低。因此，尋找和開(kāi)發(fā)新穎有效的 藥物來(lái)預(yù)防和治療肺癌的需求依舊非常迫切。
[0003] 血管生成是指從已有的毛細(xì)血管發(fā)展而形成新的血管的過(guò)程，其設(shè)及一系列相互 協(xié)調(diào)的內(nèi)皮細(xì)胞的活動(dòng)，包括:血管內(nèi)皮細(xì)胞的激活、增殖、遷移、重排和管腔形成。目前已 證明血管生成是實(shí)體瘤生長(zhǎng)的必備條件，因?yàn)槟[瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移依賴于功能性的血管供給 系統(tǒng)的存在。因此，抗腫瘤血管生成成為了一種有廣闊前景的抗癌策略，并且許多抗血管生 成藥物已經(jīng)進(jìn)入了臨床研究。但是目前大部分的抗腫瘤血管生成候選藥物通常并不是特異 性針對(duì)腫瘤細(xì)胞并且常常導(dǎo)致健康組織中的血管內(nèi)皮功能障礙W及腫瘤的抗性等一系列 副作用，因此對(duì)新穎高效的抗血管生成藥物的持續(xù)尋找仍然在繼續(xù)。
[0004] 海藻是生物活性物質(zhì)的重要來(lái)源之一，運(yùn)些海藻活性物質(zhì)在醫(yī)藥、食品和生物醫(yī) 藥產(chǎn)業(yè)具有極大的發(fā)展?jié)摿?。按照含有的色素，海藻主要分為褐藻、綠藻和紅藻=大類(lèi)，其 中褐藻因?yàn)楹邪ǘ嗵呛投嗬以趦?nèi)的許多不同的生物活性物質(zhì)而著稱。

【發(fā)明內(nèi)容】

[000引本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種全緣馬尾藻多糖的應(yīng)用。
[0006] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為
[0007] -種全緣馬尾藻多糖的應(yīng)用，全緣馬尾藻多糖作為制備抗癌藥物或抗癌保健品中 的應(yīng)用;或，全緣馬尾藻多糖作為制備抗血管再生的藥物或抗血管再生成保健品中的應(yīng)用。
[0008] 所述全緣馬尾藻多糖作為制備抗非小細(xì)胞型肺癌藥物中的應(yīng)用。
[0009] 所述全緣馬尾藻多糖的獲得是W全緣馬尾藻原料采用熱水提取法提取，而后過(guò) 濾、濃縮，濃縮后經(jīng)醇沉、干燥，即得全緣馬尾藻多糖。
[0010] 具體是，w全緣馬尾藻原料采用11(TC、高壓O.lMPa熱水提取法提取，而后過(guò)濾、濃 縮，濃縮后經(jīng)醇沉、干燥，即得全緣馬尾藻多糖。
[0011] 所述全緣馬尾藻多糖分子量范圍為100~200W)a，主要組成單糖為巖藻糖和半乳 糖，兩者的摩爾比例為1~10:1，硫酸根含量為15%~50%。
[0012] 所述全緣馬尾藻來(lái)源于褐藻口，褐藻綱，墨角藻目，馬尾藻科的馬尾藻屬。
[0013] 本發(fā)明所具有的優(yōu)點(diǎn)為：
[0014] 本發(fā)明全緣馬尾藻多糖應(yīng)用抗癌和抗血管生成藥物和保健品，能夠誘導(dǎo)癌細(xì)胞調(diào) 亡，降低線粒體膜電位，阻滯G2/M細(xì)胞周期，抑制內(nèi)皮細(xì)胞增殖，抑制HUVEC細(xì)胞遷移，抑制 HUVEC細(xì)胞的小管擬態(tài)的形成，從而對(duì)惡性腫瘤有一定的預(yù)防和治療作用。
【附圖說(shuō)明】
[0015] 圖1為本發(fā)明實(shí)施例1提供的全緣馬尾藻多糖的紅外譜圖。
[0016] 圖2為本發(fā)明實(shí)施例1提供的全緣馬尾藻多糖體外給藥對(duì)肺癌A549細(xì)胞增殖活性 影響的柱狀圖。
[0017] 圖3A為本發(fā)明實(shí)施例1提供的全緣馬尾藻多糖體外給藥對(duì)肺癌A549細(xì)胞核形態(tài)影 響圖。
[0018] 圖3B為本發(fā)明實(shí)施例1提供的全緣馬尾藻多糖體外給藥對(duì)肺癌A549細(xì)胞調(diào)亡的誘 導(dǎo)作用圖。
[0019] 圖3C為本發(fā)明實(shí)施例1提供的全緣馬尾藻多糖體外給藥對(duì)肺癌A549細(xì)胞各個(gè)調(diào)亡 時(shí)間細(xì)胞數(shù)的累積圖。
[0020] 圖4為本發(fā)明實(shí)施例1提供的全緣馬尾藻多糖體外給藥誘導(dǎo)肺癌A549細(xì)胞線粒體 膜電位的降低圖。
[0021] 圖5A為本發(fā)明實(shí)施例1提供的全緣馬尾藻多糖體外給藥誘導(dǎo)肺癌A549細(xì)胞活性氧 的產(chǎn)生圖；
[0022] 圖5B為本發(fā)明實(shí)施例1提供的全緣馬尾藻多糖體外給藥誘導(dǎo)肺癌A549細(xì)胞活性氧 產(chǎn)生的定量分析圖。
[0023] 圖6A為本發(fā)明實(shí)施例1提供的全緣馬尾藻多糖體外給藥誘導(dǎo)肺癌A549細(xì)胞G2/M細(xì) 胞周期阻滯圖；
[0024] 圖6B為本發(fā)明實(shí)施例1提供的各個(gè)細(xì)胞周期細(xì)胞數(shù)量的比例分析圖。
[0025] 圖7為本發(fā)明實(shí)施例1提供的全緣馬尾藻多糖體外給藥對(duì)肺癌A549細(xì)胞調(diào)亡相關(guān) 蛋白表達(dá)量的影響圖。
[0026] 圖8為為本發(fā)明實(shí)施例1提供的全緣馬尾藻多糖體外給藥對(duì)人廝靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 HUVEC增殖活性影響的柱狀圖。
[0027] 圖9為本發(fā)明實(shí)施例1提供的全緣馬尾藻多糖的劃痕法(A)和Transwell法(B)檢測(cè) 全緣馬尾藻多糖體外給藥對(duì)人廝靜脈內(nèi)皮細(xì)胞冊(cè)VEC遷移活性的影響圖；圖9C劃痕法和圖 9D Transwell法實(shí)驗(yàn)結(jié)果定量分析圖。
[0028] 圖10為為本發(fā)明實(shí)施例1提供的全緣馬尾藻多糖體外給藥對(duì)人廝靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 HUVEC管腔形成活性的影響圖。
[0029] 圖11為本發(fā)明實(shí)施例1提供的全緣馬尾藻多糖體內(nèi)給藥對(duì)斑馬魚(yú)新生血管生成的 影響圖。
【具體實(shí)施方式】
[0030] 本發(fā)明松藻多糖具有抗癌活性和抗血管生成活性，所述全緣馬尾藻多糖的應(yīng)用是 指具有抗癌活性和抗血管生成活性的全緣馬尾藻多糖在制備抗癌藥物或/和抗癌保健品中 的應(yīng)用，抗血管生成藥物藥物或/和抗血管生成保健品中的應(yīng)用。本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)全緣馬尾 藻多糖對(duì)抗癌和抗血管具有顯著的抑制作用，并公開(kāi)了將全緣馬尾藻多糖應(yīng)用于制備抗癌 和抗血管生成藥物和保健品，能夠誘導(dǎo)癌細(xì)胞調(diào)亡，降低線粒體膜電位，阻滯G2/M細(xì)胞周 期，抑制內(nèi)皮細(xì)胞增殖，抑制冊(cè)VEC細(xì)胞遷移，抑制冊(cè)VEC細(xì)胞的小管擬態(tài)的形成，從而對(duì)惡 性腫瘤有一定的預(yù)防和治療作用。
[0031] 實(shí)施例1，全緣馬尾藻多糖的制備
[0032] 取全緣馬尾藻干品lOOg，用2500ml自來(lái)水在高壓鍋中于110°C，0.1 MPa提取4h，篩 絹過(guò)濾分離藻渣，娃藻±過(guò)濾，過(guò)濾提取液，濾液濃縮至400ml，加入4g氯化儀和100ml無(wú)水 乙醇去除褐藻膠，離屯、（400化pm, 15min)，除去沉淀，取上清液濃縮至200ml，將濃縮液裝入 lOOODa的透析袋透析，而后經(jīng)自來(lái)水或蒸饋水分別透析24h，透析后再將透析液濃縮至 50ml，濃縮液冷凍干燥，即得水提取的全緣馬尾藻多糖(SPS)，產(chǎn)率為2.5 %。
[0033] 全緣馬尾藻多糖的化學(xué)組分分析顯示含有巖藻糖為29.44%，糖醒酸為4.88%，硫 酸根為37.26%;分子量顯示為122.91d)a;單糖摩爾比為鼠李糖，葡萄糖，半乳糖，木糖和巖 藻糖(0.06:0.19:0.58:0.17:1)。紅外譜圖（圖1)在1221畑1-1和818畑1-1出現(xiàn)硫酸基特征吸收 峰，說(shuō)明全緣馬尾藻多糖為硫酸多糖。
[0034] 實(shí)施例2,全緣馬尾藻多糖的制備
[00巧]向1500ml熱水(70-80°C)中加入12.5ml優(yōu)級(jí)鹽酸，放入全緣馬尾藻干品lOOg，攬 拌，浸泡提取2小時(shí)，篩絹過(guò)濾分離藻渣，氨氧化鋼中和，娃藻±過(guò)濾，過(guò)濾提取液，濾液濃縮 至200ml，將濃縮液裝入1000化的透析袋透析，而后經(jīng)自來(lái)水或蒸饋水分別透析24h，透析后 再將透析液濃縮至50ml，濃縮液冷凍干燥，即得酸提取的全緣馬尾藻多糖(SPS-A)，產(chǎn)率為 2.89%。
[0036] 全緣馬尾藻多糖的化學(xué)組分分析顯示含有巖藻糖為26.14%，糖醒酸為11.23%， 硫酸根為37.67%;分子量顯示為115.化化;單糖摩爾比為鼠李糖，葡萄糖，半乳糖，木糖和 巖藻糖(0.04:0.09:0.60:0.16:1)。紅外譜圖（圖1)在1221cm-i和818cnfi出現(xiàn)硫酸基特征吸 收峰，也說(shuō)明全緣馬尾藻多糖為硫酸多糖。
[0037] 實(shí)施例3
[0038] SPS和SPS-A體外給藥對(duì)肺癌A549細(xì)胞增殖活性的影響
[0039] MTT比色法是一種檢測(cè)細(xì)胞存活和生長(zhǎng)的方法。其檢測(cè)原理為活細(xì)胞線粒體中的 班巧酸脫氨酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瑣并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì) 胞無(wú)此功能。二甲基亞諷能溶解細(xì)胞中的甲瑣，通過(guò)酶標(biāo)儀測(cè)定其在540nm波長(zhǎng)處光吸收 值，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。該方 法已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測(cè)、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細(xì)胞毒性試驗(yàn)W 及腫瘤放射敏感性測(cè)定等。它的特點(diǎn)是靈敏度高、經(jīng)濟(jì)。
[0040] 實(shí)驗(yàn)方法
[0041] 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的A549細(xì)胞，膜蛋白酶消化成單細(xì)胞懸液，細(xì)胞計(jì)數(shù)后，按照4X103 個(gè)/孔的密度接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，放入5 % C〇2、37 °C的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);第二天，向96 孔板中加入終濃度為0,0.2,0.3,0.4,0.5,0.6,0.7,0.8,0.9，1.0曰11(11.5111邑/1111的5口5，每組 濃度設(shè)6個(gè)復(fù)孔，放入培養(yǎng)箱中分別繼續(xù)培養(yǎng)1化和24h;SPS處理之后，每孔加入20μ1的MTT 溶液(濃度為5mg/ml)，放入培養(yǎng)箱中再接著培養(yǎng)4h，而后倒掉96孔板中的培養(yǎng)上清，每孔加 入15化1的二甲基亞諷，搖床上振蕩lOmin混勻，用酶標(biāo)儀測(cè)定570皿處的吸光值;按照下方 的方法計(jì)算冊(cè)VEC細(xì)胞的增殖抑制率:增殖抑制率（％ ) = (0D娜貓一0D胃)/0D娜貓X 100%。 實(shí)驗(yàn)重復(fù)Ξ次，數(shù)據(jù)WF+幻)表示，通過(guò)SPSS16,采