一種楊梅花色苷納米脂質(zhì)體的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種楊梅花色苷納米脂質(zhì)體的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]脂質(zhì)體系指將藥物包封于類脂質(zhì)雙分子層內(nèi)而形成的超微型球狀載體制劑，亦稱類脂小球或液晶微囊，結(jié)構(gòu)為一層或多層同心脂質(zhì)雙分子層。脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)具有適合體內(nèi)降解、無毒性和無免疫原性等特點(diǎn)，可以控制包埋藥物在體內(nèi)穩(wěn)定緩慢釋放。脂質(zhì)體作為藥物載體應(yīng)用十分廣泛。而納米脂質(zhì)體是人們設(shè)計的較為理想的脂質(zhì)體藥物載體。納米脂質(zhì)體作為藥物載體，具有生物相容性好、對所載藥物有廣泛的重應(yīng)性無毒，生物利用度高，不弓丨起免疫反應(yīng)以及達(dá)到尋靶目的等優(yōu)點(diǎn)。
[0003]楊梅花色苷(Anthocyanin)是一類廣泛存在于植物的花、果實(shí)和葉中的水溶性天然色素，其化學(xué)結(jié)構(gòu)是花青素與糖類物質(zhì)通過糖苷鍵結(jié)合而成。同時楊梅花色苷作為一種天然食用色素，具有安全、無毒、資源豐富等優(yōu)點(diǎn)，且具有抗癌、抗炎、抗氧化、抗血栓、預(yù)防糖尿病、促進(jìn)視紅細(xì)胞再生、減輕視覺疲勞、減輕肝功能障礙等多種生理活性。目前，楊梅花色苷類產(chǎn)品在實(shí)際應(yīng)用中有如下的缺點(diǎn):對光、氧化敏感，在體內(nèi)釋放較快、光照等惡劣條件下極易被氧化，在非保護(hù)狀態(tài)下生物利用率不高等。針對以上楊梅花色苷在實(shí)際應(yīng)用中的問題，有必要將楊梅花色苷進(jìn)行包封并制成楊梅花色苷脂質(zhì)體，以保護(hù)其不被外界因素所氧化，提高楊梅花色苷的穩(wěn)定性和生物利用度，有利于儲存，可廣泛應(yīng)用于食品、化妝品、保健品和藥品中。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]針對現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，本發(fā)明的目的在于設(shè)計提供一種楊梅花色苷納米脂質(zhì)體的制備方法的技術(shù)方案。
[0005]所述的一種楊梅花色苷納米脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于包括以下工藝步驟:
I)將大豆卵磷脂與膽固醇按質(zhì)量比3-5:1的比例溶解在有機(jī)溶劑中得溶液A，其中，固液比(mg/ml)為4-9:1 ；
2)將楊梅花色苷溶解在溶劑中制成楊梅花色苷原液，其中，固液比(mg/ml)為1:10;
3)將楊梅花色苷原液用PH=7.4的磷酸鹽緩沖液溶解稀釋，得溶液B，其中，固液比(mg/ml)為1:100-120;
4)將A、B液按體積比1-2:1混合，先經(jīng)磁力攪拌及水浴超聲儀超聲處理，再經(jīng)磁力攪拌處理，使混合液變成澄清的單相，然后將混合液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓蒸發(fā)直至形成一層脂質(zhì)薄膜；
5)向脂質(zhì)薄膜中加入磷酸鹽緩沖溶液，溶解脂質(zhì)薄膜，得溶液C;
6)將溶液C過濾膜，超聲，放4°C冰箱中保存，即得包封楊梅花色苷的脂質(zhì)體。
[0006]所述的一種楊梅花色苷納米脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于所述的步驟I)中有機(jī)溶劑為乙醚與三氯甲烷的混合溶劑，所述乙醚與三氯甲烷的體積比為1-2:1。
[0007]所述的一種楊梅花色苷納米脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于所述的步驟I)中膽固醇為蛋白膽固醇、血清膽固醇、蛋黃膽固醇或膽囊膽固醇中的任一種。
[0008]所述的一種楊梅花色苷納米脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于所述的步驟2)中溶劑為無水乙醇、無水乙醚和氯仿中的至少一種。
[0009]所述的一種楊梅花色苷納米脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于所述的步驟3)中磷酸鹽緩沖溶液由0.2mol/L的Na2HPO4溶液與0.2mol/L的NaH2PO4溶液按體積比0.1-0.3:1混合得到。
[0010]所述的一種楊梅花色苷納米脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于所述的步驟4)中先經(jīng)磁力攪拌時間為40-50分鐘，水浴超聲儀在功率10Hz的條件下，超聲5-8分鐘，再經(jīng)磁力攪拌時間為3-8分鐘，轉(zhuǎn)速30-40r/min。
[0011]所述的一種楊梅花色苷納米脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于所述的步驟4)中減壓蒸發(fā)真空度為0.06-0.1Mpa0
[0012]所述的一種楊梅花色苷納米脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于所述的步驟6)中濾膜孔徑為450nm和220nm，超聲時間為5-10分鐘。
[0013]通過采用逆向蒸發(fā)法制備楊梅花色苷脂質(zhì)體，并采用水浴超聲儀進(jìn)行超聲處理，直至為穩(wěn)定的體系，該方法可顯著提高楊梅花色苷脂質(zhì)體的穩(wěn)定性，有效保護(hù)楊梅花色苷不被惡劣的條件所氧化，提高楊梅花色苷的穩(wěn)定性。通過調(diào)整確定了脂質(zhì)成分及緩沖液的比例，經(jīng)過磁力攪拌、超聲及旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)等工藝步驟，可有效的控制脂質(zhì)體的粒徑，提高包封率;本發(fā)明楊梅花色苷脂質(zhì)體開拓了脂質(zhì)體的應(yīng)用范圍，運(yùn)用脂質(zhì)體作為載體包埋楊梅花色苷，其制備工藝簡單，設(shè)備要求較低，便于推廣應(yīng)用，可產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。
【附圖說明】
[0014]圖1為納米脂質(zhì)體粒徑分布圖。
【具體實(shí)施方式】
[0015]以下結(jié)合實(shí)施例來進(jìn)一步說明本發(fā)明。
[0016]實(shí)施例1
將I 1mg大豆卵磷脂和36mg膽固醇(蛋白膽固醇、血清膽固醇、蛋黃膽固醇或膽囊膽固醇中的任一種)溶于含有I Oml三氯甲烷和8ml乙醚的混合溶液中得A液，將5mg楊梅花色苷溶于50ml乙醇制備成原液，取Iml原液用磷酸鹽緩沖液稀釋至1ml制成樣液，取9ml樣液作為B液，將A液和B液按體積比1:1混合，先磁力攪拌40min，然后在水浴超聲儀頻率為10Hz的條件下超聲I Omin，再磁力攪拌5min，使混合液變成澄清的單相;在40°C的水浴，0.08Mpa的真空壓下，轉(zhuǎn)速30r/min下將混合溶液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)直至形成一層脂質(zhì)薄膜；向脂質(zhì)薄膜中加入30ml磷酸鹽緩沖溶液，溶解脂質(zhì)薄膜，得溶液C;將溶液C分別過450nm，220nm濾膜，濾液超聲5min，置于4°C冰箱保存，即得包封楊梅花色苷的脂質(zhì)體。
[0017]磷酸鹽緩沖液的配置:
0.2mol/L的Na2HPO4溶液:稱取磷酸氫二鈉71.64g，加蒸餾水溶解并定容到100ml。
[0018]0.2mo I/L的NaH2PO4溶液:稱取磷酸二氫鈉31.21g，加蒸餾水溶解并定容到100ml。
[0019]將上述兩溶液分別裝在棕色瓶內(nèi)，于4°C冰箱中保存，用時兩溶液各按不同比例混合，即可得到所需pH的緩沖液。
[0020]將0.2mol/L的Na2HPO4溶液、0.2mol/L的NaH2PO4溶液按0.1-0.3:1體積混合，即得至IJpH為7.4的磷酸鹽緩沖液。
[0021]實(shí)施例2
將10mg大豆卵磷脂和25mg膽固醇溶于含有1ml三氯甲烷和8ml乙醚的混合溶液中得A液，將5mg楊梅花色苷溶于50ml乙醇制備成原液，取Iml原液用磷酸鹽緩沖液稀釋至1ml制成樣液，取9ml樣液作為B液，將A液和B液按體積比2:1混合，先磁力攪拌50min，然后在水浴超聲儀頻率為10Hz的條件下超聲1min，再磁力攪拌8min，使混合液變成澄清的單相;在40°〇的水浴，0.08Mpa的真空壓下，轉(zhuǎn)速30r/min下將混合溶液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)直至形成一層脂質(zhì)薄膜；向脂質(zhì)薄膜中加入30ml磷酸鹽緩沖溶液，溶解脂質(zhì)薄膜，得溶液C;將溶液C過過450nm，220nm濾膜，濾液超聲5min，置于4°C冰箱保存，即得包封楊梅花色苷的脂質(zhì)體。
[0022]磷酸鹽緩沖液的配置同實(shí)例I。
[0023]實(shí)施例3
將60mg大豆卵磷脂和20mg膽固醇溶于含有1ml三氯甲烷和8ml乙醚的混合溶液中得A液，將5mg楊梅花色苷溶于50ml乙醚制備成原液，取Iml原液用磷酸鹽緩沖液稀釋至1ml制成樣液，取9ml樣液作為B液，將A液和B液按體積比I: I混合，先磁力攪拌40min，然后在水浴超聲儀頻率為10Hz的條件下超聲1min，再磁力攪拌5min，使混合液變成澄清的單相;在40°〇的水浴，0.08Mpa的真空壓下，轉(zhuǎn)速40r/min下將混合溶液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)直至形成一層脂質(zhì)薄膜；向脂質(zhì)薄膜中加入30ml磷酸鹽緩沖溶液，溶解脂質(zhì)薄膜，得溶液C;將溶液C過450nm，220nm濾膜，濾液超聲lOmin，置于4°C冰箱保存，即得包封楊梅花色苷的脂質(zhì)體。
[0024]磷酸鹽緩沖液的配置同實(shí)例I。
[0025]實(shí)施例4
對實(shí)施例1得到的包封楊梅花色苷的脂質(zhì)體進(jìn)行檢測，其包封率為58.3%。
[0026]物理穩(wěn)定性:
制作完成的脂質(zhì)體分別在每隔一天測定粒徑及分布系數(shù)，研究其物理穩(wěn)定性，得出結(jié)果:
1.粒徑變化范圍(如圖1所示):l-30nm
2.分布系數(shù)變化范圍:0.04-0.1
表明粒徑變化不大，分布系數(shù)變化幅度較小，顯示所制作的納米脂質(zhì)體發(fā)生聚沉的效果不明顯，經(jīng)長期儲藏后仍可保持其納米性能。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種楊梅花色苷納米脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于包括以下工藝步驟: I)將大豆卵磷脂與膽固醇按質(zhì)量比3-5:1的比例溶解在有機(jī)溶劑中得溶液A，其中，固液比(mg/ml)為4-9:1 ； 2)將楊梅花色苷溶解在溶劑中制成楊梅花色苷原液，其中，固液比(mg/ml)為1:10； 3)將楊梅花色苷原液用PH=7.4的磷酸鹽緩沖液溶解稀釋，得溶液B，其中，固液比(mg/ml)為1:100-120; 4)將A、B液按體積比1-2:1混合，先經(jīng)磁力攪拌及水浴超聲儀超聲處理，再經(jīng)磁力攪拌處理，使混合液變成澄清的單相，然后將混合液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓蒸發(fā)直至形成一層脂質(zhì)薄膜； 5 )向脂質(zhì)薄膜中加入磷酸鹽緩沖溶液，溶解脂質(zhì)薄膜，得溶液C; 6)將溶液C過濾膜，超聲，放4°C冰箱中保存，即得包封楊梅花色苷的脂質(zhì)體。2.如權(quán)利要求1所述的一種楊梅花色苷納米脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于所述的步驟I)中有機(jī)溶劑為乙醚與三氯甲烷的混合溶劑，所述乙醚與三氯甲烷的體積比為1-2:1。3.如權(quán)利要求1所述的一種楊梅花色苷納米脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于所述的步驟I)中膽固醇為蛋白膽固醇、血清膽固醇、蛋黃膽固醇或膽囊膽固醇中的任一種。4.如權(quán)利要求1所述的一種楊梅花色苷納米脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于所述的步驟2)中溶劑為無水乙醇、無水乙醚和氯仿中的至少一種。5.如權(quán)利要求1所述的一種楊梅花色苷納米脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于所述的步驟3)中磷酸鹽緩沖溶液由0.2mo VL的Na2HPO4溶液與0.2mol/L的NaH2PO4溶液按體積比0.1-0.3:1混合得到。6.如權(quán)利要求1所述的一種楊梅花色苷納米脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于所述的步驟4)中先經(jīng)磁力攪拌時間為40-50分鐘，水浴超聲儀在功率10Hz的條件下，超聲5-8分鐘，再經(jīng)磁力攪拌時間為3-8分鐘，轉(zhuǎn)速30-40r/min。7.如權(quán)利要求1所述的一種楊梅花色苷納米脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于所述的步驟4)中減壓蒸發(fā)真空度為0.06-0.1Mpa。8.如權(quán)利要求1所述的一種楊梅花色苷納米脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于所述的步驟6)中濾膜孔徑為450nm和220nm，超聲時間為5-10分鐘。
【專利摘要】一種楊梅花色苷納米脂質(zhì)體的制備方法，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。其包括以下工藝步驟：將大豆卵磷脂與膽固醇溶解在有機(jī)溶劑中得溶液A；將楊梅花色苷溶解在溶劑中制成楊梅花色苷原液；將楊梅花色苷原液用磷酸鹽緩沖液溶解稀釋得溶液B；將A、B液混合，先經(jīng)磁力攪拌及水浴超聲儀超聲處理，再經(jīng)磁力攪拌處理，使混合液變成澄清的單相，然后將混合液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓蒸發(fā)直至形成一層脂質(zhì)薄膜；向脂質(zhì)薄膜中加入磷酸鹽緩沖溶液，溶解脂質(zhì)薄膜，得溶液C；將溶液C過濾膜，超聲，放4℃冰箱中保存。本發(fā)明楊梅花色苷脂質(zhì)體開拓了脂質(zhì)體的應(yīng)用范圍，運(yùn)用脂質(zhì)體作為載體包埋楊梅花色苷，其制備工藝簡單，設(shè)備要求較低，便于推廣應(yīng)用，可產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。
【IPC分類】A61P39/06, A61P35/00, A61P29/00, A61K9/127, A61K8/60, A61P27/02, A61P3/10, A61P1/16, A61Q19/00, A61P7/02, A23L33/12, A61K31/7048
【公開號】CN105639654
【申請?zhí)枴?br>【發(fā)明人】關(guān)榮發(fā), 梁提松, 趙進(jìn), 吳知盼, 王彥波, 呂飛, 劉明啟
【申請人】中國計量學(xué)院
【公開日】2016年6月8日
【申請日】2016年1月27日