不對(duì)稱(chēng)芳香二硫醚類(lèi)化合物作為病毒3c蛋白酶抑制劑在制備抗病毒藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及不對(duì)稱(chēng)芳香二硫醚類(lèi)化合物作為病毒3C蛋白酶抑制劑在制備抗病毒 藥物中的應(yīng)用，具體涉及對(duì)柯薩奇病毒(Coxsackie virus)B3亞型（CVB3)的3C蛋白酶有較 強(qiáng)抑制效果的不對(duì)稱(chēng)芳香二硫醚類(lèi)化合物。
【背景技術(shù)】
[0002] 病毒性心肌炎(Viralmyocarditis)是一種嚴(yán)重威脅人類(lèi)的感染性疾病?？滤_奇病 毒屬于小RNA病毒科(Picornaviridae)，能夠?qū)е轮匕Y心肌炎和神經(jīng)系統(tǒng)疾病，嚴(yán)重危害人 類(lèi)，特別是嬰幼兒的生命健康?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，該病毒的3C蛋白酶在其復(fù)制及侵染宿主的過(guò)程中 發(fā)揮重要作用，而且人體中沒(méi)有其同源基因，因此是一個(gè)理想的藥物設(shè)計(jì)靶點(diǎn) (Esfandiarei and McManus,Molecular Biology and Pathogenesis of Viral Myocarditis.Annual Review of Pathology:Mechanisms of Disease,2008.3(1):p.127-155.)。人類(lèi)鼻病毒(human rhinovirus)的特異性抑制劑一蘆平曲韋(rupintrivir)，就是 由此誕生的一種肽類(lèi)藥物(AK Patick，et al，In Vitro Antiviral Activity of AG7088, a Potent Inhibitor of Human Rhinovirus 3C Protease.Antimicrobial Agents& Chemotherapy，1999 ·43(10):p · 2444-50)，它具有與3C蛋白酶底物相似的空間構(gòu)型，因而能 夠同底物競(jìng)爭(zhēng)性地與酶結(jié)合，發(fā)揮對(duì)酶的抑制作用。但目前對(duì)3C蛋白酶抑制劑的研究主要 局限于這種肽類(lèi)化合物，化合物結(jié)構(gòu)類(lèi)型相對(duì)單一，而且尚無(wú)專(zhuān)門(mén)針對(duì)心肌炎病毒3C蛋白 酶的藥物。目前尚未有關(guān)于不對(duì)稱(chēng)芳香二硫醚類(lèi)化合物作為心肌炎病毒3C蛋白酶的抑制劑 的任何報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的是提供一種不對(duì)稱(chēng)芳香二硫醚類(lèi)化合物作為病毒3C蛋白酶抑制劑 在制備抗病毒藥物中的應(yīng)用，不對(duì)稱(chēng)芳香二硫醚類(lèi)化合物對(duì)小RNA病毒的3C蛋白酶具有很 好的抑制活性，并且在細(xì)胞水平上對(duì)幾種能引起感染的病毒具有較強(qiáng)的抑制活性。
[0004] 本發(fā)明首先提供不對(duì)稱(chēng)芳香二硫醚類(lèi)化合物在制備預(yù)防和/或治療含有3C蛋白酶 的病毒感染的抗病毒藥物中的應(yīng)用；
[0005] 所述不對(duì)稱(chēng)芳香二硫醚類(lèi)化合物的結(jié)構(gòu)式如式I或式Π 所示，
[0006]
[0007] 式I中，R1表示苯環(huán)上的單取代基或多取代基,R1獨(dú)立地選自-NO 2X1-C3烷基、C1-C3 烷氧基、R ' 0C0-和與苯環(huán)直接稠合構(gòu)筑得到的稠環(huán)，其中R '表示C1-C3烷基；
[0008] R2表示H或碳原子數(shù)為1~3的酰基，
[0009] R3 表示 HSc1-C3 烷基；
[0010] 式 Π 中，X表示NHSs;
[0011 ] R4表示苯環(huán)上的單取代基或多取代基，Ri獨(dú)立地選自-NO2 X1-C3烷基和鹵素；
[0012 ] R5表示H或R" OCO-，其中R"表示C1-C3烷基；
[0013] R6表示H或R" 'CONH-，其中R" '表示C1-C3烷基。
[0014] 所述病毒可為柯薩奇病毒，具體可為B3亞型。
[0015] 本發(fā)明還進(jìn)一步提供了所述不對(duì)稱(chēng)芳香二硫醚類(lèi)化合物在制備病毒3C蛋白酶抑 制劑中的應(yīng)用，其中所述病毒具體可為柯薩奇病毒B3亞型。
[0016] 活性成分為所述不對(duì)稱(chēng)芳香二硫醚類(lèi)化合物的預(yù)防和/或治療含有3C蛋白酶的病 毒感染的抗病毒藥物也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍，所述病毒具體可為柯薩奇病毒B3亞型。
[0017] 所述抗病毒藥物還可包括一種或多種藥學(xué)上可接受的載體，所述載體包括藥學(xué)領(lǐng) 域常規(guī)的稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤(rùn)劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附 載體、潤(rùn)滑劑或增效劑等。
[0018] 所述抗病毒藥物可以制成注射劑、片劑、丸劑、膠囊、懸浮劑或乳劑的形式使用，其 給藥途徑可以為口服、經(jīng)皮、靜脈或肌肉注射。
[0019] 式I中，R1表示苯環(huán)上的單取代基或雙取代基，R1獨(dú)立地選自-NO 2、甲基、甲氧基、 CH3OCO-和與苯環(huán)直接稠合構(gòu)筑得到的苯環(huán)；
[0020] R2表示H或乙?；?；
[0021] R3表示H或甲基；
[0022] 式Π 中，R4表示苯環(huán)上的單取代基，R1選自-NO2、甲基和溴；
[0023] R5 表示 H 或 C2H5OCO-;
[0024] R6 表示 H 或 CH3CONH-。
[0025] 不對(duì)稱(chēng)芳香二硫醚類(lèi)化合物具體可為下述式1-式11所示化合物中任一種，
[0027]本發(fā)明所涉及的不對(duì)稱(chēng)芳香二硫醚類(lèi)化合物可按照文獻(xiàn)(王建國(guó)等，中國(guó)發(fā)明專(zhuān) 利ZL201210055728.5;王建國(guó)等，中國(guó)發(fā)明專(zhuān)利ZL201210084848.8)公開(kāi)的方法制備。
[0028] 通過(guò)體外酶活測(cè)試，本發(fā)明涉及的不對(duì)稱(chēng)芳香二硫醚類(lèi)化合物對(duì)CVB3 3C蛋白酶 有著很強(qiáng)的抑制作用，IC5Q達(dá)到μΜ級(jí)，與陽(yáng)性對(duì)照蘆平曲韋（IC5Q= 1.57μΜ)活性相似，但化 學(xué)結(jié)構(gòu)與蘆平曲韋等短肽化合物完全不同，很可能具有與蘆平曲韋完全不同的作用機(jī)制。 經(jīng)過(guò)細(xì)胞水平活性測(cè)試，本發(fā)明涉及的不對(duì)稱(chēng)芳香二硫醚類(lèi)化合物對(duì)CVB3病毒有抑制作 用。因此本發(fā)明涉及的不對(duì)稱(chēng)芳香二硫醚類(lèi)化合物在制備CVB3亞型的3C蛋白酶抑制劑方面 有很大應(yīng)用潛力。本發(fā)明涉及的不對(duì)稱(chēng)芳香二硫醚類(lèi)化合物可以通過(guò)抑制CVB3 3C活性，在 細(xì)胞水平上產(chǎn)生CVB3病毒抑制效果，具有良好的抗病毒藥物應(yīng)用前景。
【附圖說(shuō)明】
[0029]圖1是式1-11所示不對(duì)稱(chēng)芳香二硫醚類(lèi)化合物對(duì)CVB3 3C蛋白酶的抑制曲線。
[0030]圖2是式1、式2、式3、式5和式6所示不對(duì)稱(chēng)芳香二硫醚類(lèi)化合物對(duì)CVB3病毒感染的 Hela細(xì)胞的抑制活性。
【具體實(shí)施方式】
[0031 ]下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法。
[0032]下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無(wú)特殊說(shuō)明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0033]下述實(shí)施例用于合成不對(duì)稱(chēng)芳香二硫醚類(lèi)化合物所使用的化學(xué)原料及試劑3-巰 基-[1，2,4]_三唑、3-巰基-5-甲基-[1，2,4]_三唑、1-乙酰基-3-巰基-5-甲基-[1，2,4]_三 唑、2-巰基-4-乙氧羰基-咪唑、2-巰基-5-乙酰氨基-噻唑、鄰硝基苯硫氯、鄰甲基苯硫氯、鄰 甲氧羰基苯硫氯、2-硝基-4-甲氧基-苯硫氯、β-萘硫氯、對(duì)甲基苯硫氯、對(duì)溴苯硫氯購(gòu)自 Alfa Aesar(天津)化學(xué)品公司、上海晶純?cè)噭┯邢薰净蛎绹?guó)Aurora化學(xué)品公司，其余原 料和試劑均為天津本地市售。
[0034]下述實(shí)施例所使用生化原料及試劑如下：
[0035] 氯化鈉、氯化鉀、十二水合磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、二甲基亞砜DMSO (以上均購(gòu)自 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司），三羥甲基氨基甲烷（Tr i s，購(gòu)自NOVON公司）、咪唑（購(gòu)自MP Biomedicals公司）、二硫蘇糖醇(dithiothreitol，DTT，購(gòu)自北京欣經(jīng)科生物公司）、牛血清 白蛋白（Bovine serum albumin,BSA,購(gòu)自Sigma公司）、甘油（購(gòu)自Sigma公司）、蘆平曲韋 (rupintrivir，購(gòu)自加拿大Toronto Research Chemicals公司）、細(xì)胞增殖-毒性檢測(cè)試劑 盒（Cell Counting Kit-8，CCK-8,購(gòu)自同仁化學(xué)公司）、3C蛋白酶底物（H-Asp-{Glu (EDANS) }-Met-Ser-Ala-Ile-Phe-Gln-Gly-Pr〇-Ile-Ser-{Lys(DABCYL)}-Asp-〇H，購(gòu)自上 海吉爾生化公司）、3925黑色平底不透明96孔酶標(biāo)板(購(gòu)自Corning公司）、CVB3 3C蛋白酶 (47yM，20mM Tris，200mM NaCl，250mM 咪挫，5%(v/v)甘油）、2Xphosphate buffered saline(PBS)緩沖液（16g NaCl，0.4g KCl，7.16g Na2HP〇4· 12H20,0.48g KH2PO4,溶于 1000 mL水，調(diào)pH值至7.4，使用高壓蒸汽滅菌鍋在121°C下滅菌20分鐘，冷卻備用），熒光酶標(biāo) 儀（Spectra max GEMINI xps,Molecular Devices公司）。
[0036] 實(shí)施例1:不對(duì)稱(chēng)芳香二硫醚類(lèi)化合物的合成
[0037]