枳殼揮發(fā)油提取物作為制備抗抑郁藥物的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及中醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及枳殼揮發(fā)油提取物作為制備抗抑郁藥物的 應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 抑郁癥是一種以持續(xù)精神低落為主要癥狀的精神情志障礙性疾病。臨床對抑郁癥 的治療主要依靠西藥抗抑郁劑，并輔助以心理治療，但此治療方法存在起效慢、療程長、副 作用大、藥價昂貴等缺點。近年來，中醫(yī)藥在治療抑郁癥實驗研究方面取得了豐富的經(jīng)驗和 較好的療效。經(jīng)大量文獻(xiàn)調(diào)研可知，許多中藥復(fù)方、單味藥及中藥活性成分均具有抗抑郁作 用。因此，近年來中醫(yī)中藥在抑郁癥的治療方面日益被人們所關(guān)注。
[0003] 枳殼最早載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為中品。枳殼為蕓香科植物酸橙C i trus aurantium L.及其栽培變種的干燥未成熟果實，性微寒，味苦、辛、酸，入肺、脾、大腸經(jīng)。功 能理氣寬中，行滯消脹。主治胸肋氣滯、脹滿疼痛、食積不化、痰飲內(nèi)停、胃下垂等。
[0004] 枳殼類藥材化學(xué)成分比較復(fù)雜，目前枳殼藥材中已知的成分主要包括揮發(fā)油、黃 酮類、香豆素類和生物堿等成分。枳殼揮發(fā)油中所含的主要化合物為檸檬烯，能夠顯著抑制 胃腸平滑肌收縮，也具有一定的鎮(zhèn)痛、抗菌、中樞抑制及溶膽石作用。目前，針對枳殼揮發(fā)油 抗抑郁癥的研究未見報道。
[0005] 體外細(xì)胞實驗，由于細(xì)胞直接來源于機體組織，生物性狀尚未發(fā)生大的變化，在一 定程度上能夠反映體內(nèi)的狀態(tài)，具有操作簡便、周期短、節(jié)約成本等優(yōu)勢，廣泛應(yīng)用于藥效 學(xué)研究領(lǐng)域。SH-SY5Y細(xì)胞(神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞)在抗抑郁、治療帕金森病等神經(jīng)系統(tǒng)疾病研 究方面應(yīng)用較為普遍，SH-SY5Y細(xì)胞氧化損傷模型常用于抗抑郁藥物的篩選研究。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 針對上述問題，本發(fā)明提供一種枳殼揮發(fā)油提取物作為制備抗抑郁藥物的應(yīng)用， 該揮發(fā)油提取物從枳殼藥材中提取，對缺氧損傷SH-SY5Y神經(jīng)細(xì)胞具有較好的保護(hù)作用，可 應(yīng)用于抑郁癥的治療研究。
[0007] 為實現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，本發(fā)明提供枳殼揮發(fā)油提取物作為制備抗抑郁藥物的 應(yīng)用，所述枳殼揮發(fā)油提取物的主要成分為檸檬烯。
[0008] 所述枳殼揮發(fā)油提取物的提取工藝為：取枳殼藥材，浸泡1~3h，采用水蒸氣蒸餾 法，加6~10倍重量的水提取5~9h，即得。
[0009] 所述枳殼揮發(fā)油提取物的提取工藝為:取枳殼藥材，浸泡3h，采用水蒸氣蒸餾法， 加8倍重量的水提取7h，即得。
[0010]所用的枳殼為蕓香科植物酸橙Citrus aurantium L.及其栽培變種的干燥未成熟 果實。
[0011]所述枳殼揮發(fā)油提取物能制備多種制劑，并可添加藥學(xué)上可接受的輔料及載體應(yīng) 用于臨床抗抑郁新藥的開發(fā)。藥物劑型可以為:糖衣片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、硬膠囊 劑、軟膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、蜜丸劑、散劑、丹劑、注射劑、栓劑、硬膏劑、糖 漿劑、針粉劑或緩釋膠囊劑等。
[0012] 與現(xiàn)有技術(shù)相比本發(fā)明的有益效果。
[0013] 本發(fā)明提供的枳殼揮發(fā)油提取物作為制備抗抑郁藥物的應(yīng)用，通過體外藥效實 驗，證明枳殼揮發(fā)油提取物有顯著的抗抑郁作用，為該藥物抗抑郁方面的新藥開發(fā)奠定基 礎(chǔ)。
【具體實施方式】
[0014] 下面結(jié)合具體實施例進(jìn)一步詳細(xì)說明本發(fā)明，但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題 的范圍僅限于下述的實施例，凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容實現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。
[0015] -實驗材料。
[0016] 1實驗細(xì)胞株。
[0017]人骨髓神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株SH_SY5Y(購自中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院細(xì)胞 資源中心）。
[0018] 2藥材與試劑。
[0019]鹽酸帕羅西汀片（中美史克，批號：13030713);枳殼藥材（由遼寧華潤本溪三藥有 限公司提供）;DMEM/F12培養(yǎng)基(美國GIBCO公司）；胎牛血清(FCS)(杭州四季青生物工程材 料有限公司）;水為超純水。
[0020] 3儀器與設(shè)備。
[0021] US AUT0FL0W型CO2培養(yǎng)箱（德國NUAIRE公司）；AE31型倒置相差顯微鏡（Motic公 司）；SUNRISE酶標(biāo)儀（瑞士TECAN公司）；LEGEND MICRO 17R型低溫高速離心機（Thermo Fisher Scientific)。
[0022] 二實驗方法與結(jié)果。
[0023] 1枳殼揮發(fā)油提取工藝研究:取枳殼藥材，精密稱取50.0g，采用水蒸氣蒸餾法，按 下述條件進(jìn)行提取試驗。
[0024] 1.1正交試驗設(shè)計。
[0025]選取浸泡時間、加水倍數(shù)、提取時間三個因素，對主要影響因素各取三個水平，進(jìn) 行L9(34)正交試驗考察。以揮發(fā)油得率為考察指標(biāo)，優(yōu)選其最佳提取工藝。正交試驗L 9(34) 因素水平表見表1，正交試驗設(shè)計表及直觀分析結(jié)果見表2，方差分析結(jié)果見表3。
[0026] 表1因素水平表。
[0027]表2正交實驗設(shè)計表及直觀分析結(jié)果。
[0028] 表3以揮發(fā)油為指標(biāo)正交試驗方差分析。
[0029] 注:Fq.〇5=19.00;* 為 Ρ<0·05。
[0030] 以揮發(fā)油含量為指標(biāo)，直觀分析及方差分析影響枳殼揮發(fā)油提取工藝的因素順序 為A>B>C，篩選出最佳提取條件為A 2B2C3，即浸泡3h，加8倍量的水提取7h。
[0031] 2藥物活性研究。
[0032] 2.1實驗方法：（DMTT法藥效檢測。取對數(shù)生長期、生長狀態(tài)良好的SH-SY5Y細(xì)胞， 經(jīng)PBS清洗，用0.25%胰蛋白酶消化，待細(xì)胞趨于變圓用含15%進(jìn)口胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液沖 洗吹打細(xì)胞，制成單細(xì)胞懸液。以每毫升IX IO5個細(xì)胞接種于96孔培養(yǎng)板中，每孔IOO1IL(除 空白調(diào)零孔外），將培養(yǎng)板置于⑶ 2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)，24 h后模型組和給藥組加入含H2O2 (終濃度為100μ mol · Γ1)的PBS溶液，構(gòu)建氧化損傷抑郁模型，空白對照組加無H2O2的PBS溶 液，造模2h后空白對照組和模型組加入含10 %血清的培養(yǎng)基100 uL培養(yǎng)，各給藥組分別加 入含10 %血清的含藥培養(yǎng)基100 HL。設(shè)空白調(diào)零組（只加培養(yǎng)基，酶標(biāo)儀調(diào)零用）、空白對照 組、模型組（只加細(xì)胞）、枳殼揮發(fā)油組和鹽酸帕羅西汀組，設(shè)5個復(fù)孔。在37°C、5% CO2培養(yǎng) 箱中繼續(xù)培養(yǎng)24h后，每孔吸取細(xì)胞上清液5〇nL，置-20°C保存，留作測試劑盒用，每孔補加 50 uL培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)3 h，每孔加入20μΚ5 mg/mL)MTT，繼續(xù)培養(yǎng)4 h后吸凈孔內(nèi)上清液， 每孔加入150 yL DMSO用酶標(biāo)儀振搖lOmin，使紫色結(jié)晶完全溶解，在492 nm處掃描，測定吸 光值(OD)，結(jié)果見表4。其中存活率=OD試驗組均值/OD空白對照組均值X 100%。
[0033]表4枳殼揮發(fā)油對SH-SY5Y神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)作用。
LUU34J 汪：與S 臼組比較，*P<〇 · 05，**P<0 · 01;與模型組比較，#P<0 · 05，##P<0 · 01。
[0035]由表4可知，枳殼揮發(fā)油對SH-SY5Y神經(jīng)細(xì)胞有很好的保護(hù)作用，其作用效果等效 于鹽酸帕羅西汀，證明枳殼揮發(fā)油具有較強的抗抑郁作用，可以開發(fā)為以枳殼揮發(fā)油為原 料的中藥抗抑郁藥物，便于臨床制成不同劑型給藥，擴大了枳殼的應(yīng)用范圍，為其抗抑郁新 藥的開發(fā)提供理論依據(jù)。
【主權(quán)項】
1. 枳殼揮發(fā)油提取物用于治療抑郁癥。2. 如權(quán)利要求1所述的枳殼揮發(fā)油提取物，其特征在于，所述枳殼揮發(fā)油提取物從枳殼 藥材中提取，主要成分為檸檬烯。3. 如權(quán)利要求1所述的枳殼揮發(fā)油提取物，其特征在于，所述枳殼揮發(fā)油提取物的提取 工藝為：取枳殼藥材，浸泡1~3h，采用水蒸氣蒸餾法，加6~10倍量的水提取5~9h，即得本 發(fā)明枳殼揮發(fā)油提取物。4. 如權(quán)利要求3所述的枳殼揮發(fā)油提取物，其特征在于，所述枳殼揮發(fā)油提取物的提取 工藝為：取枳殼藥材，浸泡3h，采用水蒸氣蒸餾法，加8倍量的水提取7h，即得本發(fā)明枳殼揮 發(fā)油提取物。5. 如權(quán)利要求2所述的枳殼揮發(fā)油提取物，其特征在于，所用的枳殼為蕓香科植物酸橙 Citrus aurantium L.及其栽培變種的干燥未成熟果實。6. 如權(quán)利要求1所述的枳殼揮發(fā)油提取物，其特征在于，所述枳殼揮發(fā)油提取物可以制 備成多種制劑，并可添加藥學(xué)上可接受的輔料及載體應(yīng)用于臨床抗抑郁新藥的開發(fā)。7. 如權(quán)利要求6所述的枳殼揮發(fā)油提取物作為制備抗抑郁藥物的應(yīng)用，其特征在于，所 述藥物制劑的劑型可以為:糖衣片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、口服 液、口含劑、顆粒劑、沖劑、蜜丸劑、散劑、丹劑、注射劑、栓劑、硬膏劑、糖衆(zhòng)劑、針粉劑或緩釋 膠囊劑等。
【專利摘要】枳殼揮發(fā)油提取物作為制備抗抑郁藥物的應(yīng)用，所述枳殼揮發(fā)油提取物從枳殼藥材中提取，主要成分為檸檬烯。所述枳殼揮發(fā)油提取物的提取工藝為：取枳殼藥材，浸泡1～3h，采用水蒸氣蒸餾法，加6～10倍體積的水提取5～9h即得。優(yōu)選工藝為：取枳殼藥材，浸泡3h，采用水蒸氣蒸餾法，加8倍體積的水提取7h，即得。所述枳殼揮發(fā)油提取物可以制備成多種制劑，并可添加藥學(xué)上可接受的輔料及載體應(yīng)用于臨床抗抑郁新藥的開發(fā)。本發(fā)明提供的枳殼揮發(fā)油提取物作為制備抗抑郁藥物的應(yīng)用，通過體外藥效實驗，證明枳殼揮發(fā)油提取物對缺氧損傷SH-SY5Y神經(jīng)細(xì)胞具有保護(hù)作用，具有顯著的抗抑郁作用，為抗抑郁方面的新藥開發(fā)奠定基礎(chǔ)。
【IPC分類】A61P25/24, A61K36/752
【公開號】CN105641148
【申請?zhí)枴?br>【發(fā)明人】孟憲生, 包永睿, 王帥, 張麗敏, 李天嬌
【申請人】遼寧中醫(yī)藥大學(xué)
【公開日】2016年6月8日
【申請日】2016年2月26日