一種防控腫瘤細(xì)胞的組合物及其用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，是一種防控腫瘤細(xì)胞的組合物及其用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 綠茶約占世界茶葉消費(fèi)量的20 %，在中國(guó)、日本、韓國(guó)等亞洲國(guó)家比較受歡迎。兒 茶素占綠茶干重的10 %-15 %，表兒茶素（Epica tech in，EC)、表沒食子兒茶素 (Epigallocatechin，EGC)、表兒茶素沒食子酸酯(Epicatechingal late，ECG)和表沒食子兒 茶素沒食子酸酯(Epigal locatechingal late，EGCG)是最主要的四種兒茶素，其中EGCG是綠 茶兒茶素主要成分，占兒茶素總量的50%-75%。1987年富田勛首次報(bào)道了 EGCG對(duì)人體腫瘤 細(xì)胞具有較高體外抑制作用。隨后大量研究表明，EGCG具有抗突變，抗氧化，抗血管形成，抗 粘附，抗腫瘤浸潤(rùn)，抗炎，抗病毒等一系列生物學(xué)活性。這些作用使EGCG具有非常廣闊的應(yīng) 用前景和市場(chǎng)價(jià)值。然而，EGCG具有多酚類化學(xué)結(jié)構(gòu)，與空氣接觸極易被氧化分解，并不能 真正有效的做成藥物、保健品或者其它能夠保存的產(chǎn)品供人類使用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 為解決現(xiàn)有技術(shù)中表沒食子兒茶素沒食子酸酯易分解，很難實(shí)現(xiàn)產(chǎn)品化的技術(shù)缺 陷，本發(fā)明公開了一種防控腫瘤細(xì)胞的組合物，實(shí)現(xiàn)能夠?qū)⒈頉]食子兒茶素沒食子酸酯成 分固化到產(chǎn)品中目的，降低分解率，使表沒食子兒茶素沒食子酸酯作為有效成分作為藥物、 保健品或其它形式的產(chǎn)品應(yīng)用到市場(chǎng)中。
[0004] 實(shí)現(xiàn)上述目的采用的技術(shù)方案為，本發(fā)明提供的一種防控腫瘤細(xì)胞的組合物，該 組合物包括綠茶提取物、有機(jī)酸、紅甜椒粉。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)，將綠茶提取物與有機(jī)酸組合，能顯 著提高EGCG的穩(wěn)定性，另一方面，將綠茶提取物與紅甜椒組合，具有良好的協(xié)同作用，尤其 抗腫瘤方面效果顯著。
[0005] 優(yōu)選的，綠茶提取物在組合物中的重量份數(shù)為50-100份，有機(jī)酸在組合物中的重 量份數(shù)為0.1-1份，紅甜椒粉在組合物的重量份數(shù)為1-5份。所優(yōu)選的重量份數(shù)為調(diào)配充分 發(fā)揮效果、成本最低的選擇。
[0006] 進(jìn)一步的，綠茶提取物包括表沒食子兒茶素沒食子酸酯，其在綠茶提取物中的質(zhì) 量濃度為1〇%_98%。進(jìn)一步，更優(yōu)選的，本發(fā)明中沒食子兒茶素沒食子酸酯在綠茶提取物 中的質(zhì)量濃度為85-95%。進(jìn)一步，綠茶提取物中的沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)含量 90%效果最佳，防控腫瘤細(xì)胞的作用最強(qiáng)，所選擇的濃度與有機(jī)酸、紅甜椒粉混合穩(wěn)定性最 強(qiáng)、防空腫瘤細(xì)胞的作用也是最強(qiáng)的。
[0007] 進(jìn)一步的，有機(jī)酸包括蘋果酸、檸檬酸、維生素 C的一種或一種以上。上述有機(jī)酸與 綠茶提取物組合均可提尚綠茶提取物的穩(wěn)定性。
[0008] 進(jìn)一步的，該組合物還包括藥學(xué)可接受的載體，制成各種劑型的藥物組合物，可將 該組合物采用現(xiàn)有技術(shù)方法制備成各種劑型的混合物，方法包括如下步驟(1)配料:按配方 稱取綠茶提取物、有機(jī)酸、紅甜椒粉以及輔料，混合均勻，優(yōu)選采用等量遞增混合方式進(jìn)行 混合均勻；
[0009] (2)制粒：將（1)中配制好的物料用75 %乙醇溶液制軟材，濕法制粒，45~60 °C干 燥，整粒；
[0010] (3)包裝、檢驗(yàn)，即得本發(fā)明含有EGCG、維生素C和紅甜椒粉的顆粒劑，也可采用現(xiàn) 有方法可將上述顆粒劑灌裝于空心膠囊殼中得到膠囊劑，或者將上述顆粒劑通過壓片工藝 壓制成片劑。
[0011] 本發(fā)明還公開了上述組合物的用途，作為防控乳腺腫瘤細(xì)胞、肺癌細(xì)胞、食管癌細(xì) 胞、胃癌細(xì)胞、肝癌細(xì)胞、結(jié)直腸癌細(xì)胞、胰腺癌細(xì)胞、子宮頸癌細(xì)胞、前列腺癌細(xì)胞、皮膚癌 細(xì)胞、口腔癌細(xì)胞以及白血病腫瘤細(xì)胞的組合物用途。
[0012] 綜上，本發(fā)明的有益效果為，基于綠茶提取物具有的抗腫瘤作用，開發(fā)了一種防控 腫瘤細(xì)胞的組合物，在制備過程中，加入了有機(jī)酸和紅甜椒粉。有機(jī)酸能抑制綠茶提取物氧 化，使綠茶提取物處于穩(wěn)定狀態(tài)。紅甜椒中的抗癌色素與綠茶提取物具有協(xié)同作用，最大程 度的發(fā)揮其效價(jià)，增加其抗癌效果。
【具體實(shí)施方式】
[0013] 下面結(jié)合具體的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)描述。
[0014] 實(shí)施例一:本發(fā)明公開的一種防控腫瘤細(xì)胞的組合物，包括綠茶提取物、有機(jī)酸、 紅甜椒粉。綠茶提取物中主要含有表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)，該成份具有良好防 控腫瘤細(xì)胞的作用，但是極易被氧化分解，并不能真正的做成藥物、保健品等供人類使用， 將綠茶提取物與有機(jī)酸組合，能顯著提高EGCG的穩(wěn)定性，另一方面，將綠茶提取物與紅甜椒 組合，具有良好的協(xié)同作用，尤其抗腫瘤方面效果顯著。
[0015]下述試驗(yàn)說明，有機(jī)酸與EGCG混合，能夠增強(qiáng)EGCG穩(wěn)定性的作用，同時(shí)也用以說明 選擇能夠使EGCG穩(wěn)定時(shí)所作的試驗(yàn)選擇過程。
[0016]從有機(jī)酸中選擇抗壞血酸對(duì)EGCG的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)：
[0017] 方法:分別吸取0.5mL EGCG儲(chǔ)備液于3支25mL比色管中，再加入4mL水，編號(hào)1、2、3、 4、5，1號(hào)作為對(duì)照液進(jìn)行定性掃描，向2號(hào)比色管中逐滴加入0.10、0.25、0.40、0.55、0.70、 0.85mL抗壞血酸溶液(0.0Imo 1/L)，分別在80°C水浴反應(yīng)Oh，Ih，2h，4h，6h后，進(jìn)行HPLC檢測(cè) EGCG含量，試驗(yàn)結(jié)果如下：

[0020] 以上研究結(jié)果表明，添加維生素C后能明顯增加EGCG的熱穩(wěn)定性。
[0021] 下述試驗(yàn)說明，紅甜椒粉與EGCG混合，能夠協(xié)同EGCG增強(qiáng)防控腫瘤細(xì)胞的作用，同 時(shí)也用以說明選擇能夠使EGCG穩(wěn)定時(shí)所作的試驗(yàn)選擇過程。
[0022] EGCG與紅甜椒粉的組合物在抗腫瘤方面的顯著性作用試驗(yàn)：
[0023]通過建立肺癌移植瘤模型，研究EGCG及其組合物對(duì)腫瘤的抑制作用。
[0024] 一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物;BALB/c裸鼠60只，5~6周齡，雄性，（20 ± 2)g，購(gòu)自必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有 限公司【動(dòng)物合格證號(hào)SCXK(滬)】。飼養(yǎng)于上海交通大學(xué)藥學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心SPF級(jí)動(dòng)物房， 室溫25°C，濕度40%~70%之間，自由進(jìn)食與飲水。
[0025]二、方法:人肺腺癌細(xì)胞裸鼠移植瘤模型的建立和分組:40只鼠隨機(jī)分為4組，每組 10只，分別為對(duì)照組、EGCG組、紅甜椒粉、EGCG與紅甜椒粉的組合物組。試驗(yàn)第1周每天各組 小鼠灌胃藥物或生理鹽水0.2mL(對(duì)照組），1周后取人肺癌細(xì)胞H460株（I X l〇VmL)0.2mL接 種于裸鼠右腋部皮下，即完成裸鼠腫瘤接種。以后每天向各組小鼠灌胃1次〇.2mL的藥物或 生理鹽水。21d后，采血后斷頸處死荷瘤裸鼠，剝?nèi)∑は聦?shí)體瘤瘤塊，剔除筋膜，測(cè)量并計(jì)算 各組瘤體積和抑瘤率，抑瘤率=(對(duì)照組瘤體積-實(shí)驗(yàn)組瘤體積)/對(duì)照組瘤體積X 100%。 [0026] 對(duì)照組:注射生理鹽水；
[0027] EGCG組：按EGCG計(jì)50mg/Kg，溶解于生理鹽水；
[0028]紅甜椒粉組:按紅甜椒粉計(jì)5mg/Kg，溶解于生理鹽水；
[0029] EGCG與紅甜椒粉的組合物組：按EGCG計(jì)50mg/Kg，紅甜椒粉計(jì)5mg/Kg，溶解于生理 鹽水。
[0030] 結(jié)果如下：
[0032] 注:*，與EGCG和紅甜椒粉相比較，p〈0 · 05。
[0033]結(jié)論:本發(fā)明EGCG和紅甜椒粉的組合物在裸鼠實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)中，具有顯著抑 制腫瘤生長(zhǎng)的作用；與EGCG組、紅甜椒粉組比較，具有顯著差異(p〈0.05)，說明EGCG和紅甜 椒粉的組合物在抗腫瘤方面具有良好的協(xié)同作用。
[0034] 實(shí)施例二:本發(fā)明公開的一種防控腫瘤細(xì)胞的組合物，包括綠茶提取物、蘋果酸、 紅甜椒粉，各成分在組合物中的重量份數(shù)分別為，綠茶提取物在組合物中的重量份數(shù)為50 份，蘋果酸在組合物中的重量份數(shù)為1份，甜椒粉在組合物的重量份數(shù)為1份。
[0035] 進(jìn)一步的，綠茶提取物包括表沒食子兒茶素沒食子酸酯，其在綠茶提取物中的質(zhì) 量濃度為90 %。
[0036] 以下采用試驗(yàn)說明本發(fā)明選擇的表沒食子兒茶素沒食子酸酯質(zhì)量濃度是根據(jù)對(duì) 癌細(xì)胞抑制作用篩選出來的。
[0037]不同含量的EGCG對(duì)前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C-3生長(zhǎng)的抑制作用：
[0038] 1.材料與方法
[0039] 1.1材料與試劑
[0040] EGCG購(gòu)自美國(guó)sigma公司；二甲基亞砜(DM S0)、四甲基偶氮噻唑鹽(MTT)、胰蛋白 酶購(gòu)自上海生物工程有限公司:F12培養(yǎng)液購(gòu)自GIBCO生物技術(shù)公司；新生牛血清購(gòu)自杭州 四季青試劑公司；其余試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。
[0041] 1.2細(xì)胞及培養(yǎng)
[0042] 前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C-3購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞所。用含10%新生牛血清，lOOU/mL 青霉素/鏈霉素的Fl2培養(yǎng)液，置于37°C，5 %C〇2恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每3-4天傳代一次，消化 液為0.25 %胰蛋白酶溶液。
[0043] 1 · 3細(xì)胞存活率測(cè)定(MTI