一種增強(qiáng)動(dòng)物免疫力的復(fù)合菌劑、制備方法及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及動(dòng)物養(yǎng)殖領(lǐng)域，特別是指一種增強(qiáng)動(dòng)物免疫力的混合菌株發(fā)酵粉、制 備方法及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 動(dòng)物的免疫功能是由許多免疫細(xì)胞和免疫分子執(zhí)行的，其免疫細(xì)胞與免疫分子的 數(shù)量與活性，決定了其免疫力的強(qiáng)弱。免疫物質(zhì)的數(shù)量與活性與飼料成分密切相關(guān)。因此想 要提高動(dòng)物自身免疫功能，必須從飼料的成分抓起。近年來使用的飼料添加劑中，有不少含 有提高動(dòng)物免疫力的添加劑。飼料添加劑的使用對(duì)提高動(dòng)物的免疫力、提高生長(zhǎng)速率等方 面具有極大的促進(jìn)作用，養(yǎng)殖效益十分顯著。但是目前各國所使用的飼料添加劑多大事化 學(xué)合成藥物或激素類物質(zhì)。用這些添加劑飼喂動(dòng)物，常常具有各種各樣的毒副作用，使病原 菌產(chǎn)生抗耐藥性，動(dòng)物產(chǎn)品中有害殘留物增加。人們吃了飼喂這些添加劑的動(dòng)物產(chǎn)品以后， 導(dǎo)致畸形、癌癥、早衰、兒童早熟等問題的發(fā)生率明顯提高，嚴(yán)重危害人類的健康。因此，各 國政府都已立法限制化學(xué)類飼料添加劑的使用，我國也出臺(tái)了多種法令法規(guī)。
[0003] 隨著人們對(duì)健康的關(guān)注程度越來越高，人們對(duì)于食品的安排問題越來越重視。除 了要求基本的食品安全之外，健康、綠色也成為更多人的選擇和追求。而動(dòng)物的免疫力是關(guān) 系動(dòng)物抗病力的關(guān)鍵因素。因此如何激發(fā)動(dòng)物自身的免疫系統(tǒng)功能，提高動(dòng)物的免疫力，是 動(dòng)物養(yǎng)殖過程中研究的重點(diǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明提出了一種增強(qiáng)動(dòng)物免疫力的混合菌株發(fā)酵粉、制備方法及其應(yīng)用，能夠 調(diào)節(jié)動(dòng)物體內(nèi)的菌群平衡，增強(qiáng)動(dòng)物的抵抗力和應(yīng)激能力。
[0005] 本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實(shí)現(xiàn)的：
[0006] -種復(fù)合菌劑，以細(xì)胞個(gè)數(shù)記，包括以下組分:側(cè)孢短芽胞桿菌1-10份，產(chǎn)朊假絲 酵母1-10份，地衣芽胞桿菌5-15份，米曲霉5-15份。
[0007] -種增強(qiáng)動(dòng)物免疫的復(fù)合菌劑發(fā)酵粉的制備方法，包括以下步驟：
[0008] (1)配制復(fù)合菌劑發(fā)酵所需的培養(yǎng)基；
[0009] (2)將上述菌株分別活化制得菌株發(fā)酵液，取制得的菌株發(fā)酵液，按配方量混合均 勻后，加入到上述混合菌劑發(fā)酵培養(yǎng)物中，在溫箱中培養(yǎng)得到復(fù)合菌劑發(fā)酵液，干燥后即得 混合菌劑發(fā)酵粉。
[0010] 進(jìn)一步，所述步驟（1)中，所述培養(yǎng)基包括以下重量份數(shù)的組分，葡萄糖1-10份、蔗 糖1-8份、麩皮2-15份、蛋白胨1-5份、椰子粉3-7份、脫脂大豆粉5-10份，純化水100-400份。
[0011] 進(jìn)一步，所述發(fā)酵培養(yǎng)物中，以細(xì)菌總數(shù)計(jì)，復(fù)合菌劑中總菌株濃度為106-108cfu/ mL〇
[0012] 進(jìn)一步，所述的步驟(2)中，培養(yǎng)條件為，35-40°C，培養(yǎng)45-50小時(shí)。
[0013] 進(jìn)一步，所述步驟(2)中，復(fù)合菌劑的干燥方式為噴霧干燥或者冷凍干燥。
[0014] 進(jìn)一步，在噴霧干燥之前，復(fù)合菌劑發(fā)酵液中加入多孔淀粉，混合均勻。
[0015] 上述的復(fù)合菌劑或者復(fù)合菌劑發(fā)酵粉在制備增強(qiáng)動(dòng)物免疫力的制劑上的應(yīng)用。
[0016] 進(jìn)一步，所述的動(dòng)物為家畜。
[0017] 進(jìn)一步，所述的動(dòng)物為家禽。
[0018] 本發(fā)明中所述的菌株均購自中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心，經(jīng)鑒定分別為側(cè) 抱短芽胞桿菌(Brevibacillus laterosporus)，編號(hào)為CICC21185;產(chǎn)H元假絲酵母(Candida utilis)，編號(hào)為CICC32211;地衣芽胞桿菌(Bacillus licheniformis)，編號(hào)為CICC10037; 米曲霉（Aspergillus oryzae)，編號(hào)為CICC2195。
[0019] 本發(fā)明的有益效果：
[0020] 側(cè)孢短芽胞桿菌，為非脊椎動(dòng)物的病原菌，有研究證實(shí)具有殺線蟲的作用。
[0021] 產(chǎn)朊假絲酵母又叫產(chǎn)朊圓酵母或食用圓酵母。其蛋白質(zhì)和維生素 B的含量都比啤 酒酵母高，它能以尿素和硝酸作為氮源，在培養(yǎng)基中不需要加入任何生長(zhǎng)因子即可生長(zhǎng)。它 能利用五碳糖和六碳糖，既能同化硝酸鹽，還能利用糖蜜、木材水解液等生產(chǎn)出人畜可食 用的蛋白質(zhì)。
[0022] 地衣芽胞桿菌能夠調(diào)節(jié)腸道內(nèi)微生物之間、微生物與宿主之間處于微生態(tài)平衡， 同時(shí)參與腸道內(nèi)物質(zhì)代謝，增強(qiáng)免疫力和抗應(yīng)激能力。
[0023] 米曲霉是一類產(chǎn)復(fù)合酶的菌株，除產(chǎn)蛋白酶外，還可產(chǎn)淀粉酶、糖化酶、纖維素酶、 植酸酶等，可以分解培養(yǎng)物中的大分子物質(zhì)，將其降解，以供其他菌株新陳代謝以及繁殖所 需，有利于提高發(fā)酵的效率，提高菌粉中有益菌的數(shù)量;噴霧干燥之前加入多孔淀粉，可以 保護(hù)菌株在干燥過程中的成活率，提高菌粉中菌株的活力。
[0024] 本發(fā)明所述的復(fù)合菌株及復(fù)合菌株發(fā)酵粉，通過組合配比，并進(jìn)行混合發(fā)酵，各菌 株之間相互影響，能更充分的利用培養(yǎng)基中的各種營養(yǎng)成分，發(fā)酵效率大大提高，添加到動(dòng) 物飼料中后，可以調(diào)節(jié)動(dòng)物腸道的菌群平衡，增強(qiáng)免疫力和應(yīng)激能力，降低動(dòng)物的發(fā)病率， 調(diào)節(jié)動(dòng)物的消化系統(tǒng)功能，大大提高飼料的利用率，日增重顯著增加。
【具體實(shí)施方式】
[0025] 下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然， 所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施 例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有作出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于 本發(fā)明保護(hù)的范圍。
[0026] 實(shí)施例1
[0027] 一種復(fù)合菌劑，以細(xì)菌個(gè)數(shù)記，包括以下組分:側(cè)孢短芽胞桿菌1份，產(chǎn)朊假絲酵母 1份，地衣芽胞桿菌5份，米曲霉5份。
[0028] -種增強(qiáng)動(dòng)物免疫的復(fù)合菌劑發(fā)酵粉的制備方法，包括以下步驟：
[0029] (1)取葡萄糖lg、鹿糖lg、麩皮2g、蛋白胨lg、椰子粉3g、脫脂大豆粉5g份混勾，加入 純化水100g，混合均勻，制成復(fù)合菌劑發(fā)酵所需的培養(yǎng)基；
[0030] (2)將上述菌株分別活化制得菌株發(fā)酵液，取制得的菌株發(fā)酵液，混合均勻后，菌 株發(fā)酵液混合后，以細(xì)菌個(gè)數(shù)記，包括以下組分:側(cè)孢短芽胞桿菌1份，產(chǎn)朊假絲酵母1份，地 衣芽胞桿菌5份，米曲霉5份;加入到上述混合菌劑發(fā)酵培養(yǎng)物中；以細(xì)菌總數(shù)計(jì)，發(fā)酵培養(yǎng) 物中復(fù)合菌劑中總菌株濃度為106cfu/mL。在35°C的溫箱中培養(yǎng)45小時(shí)得到復(fù)合菌劑發(fā)酵 液，加入多孔淀粉，混合均勻，噴霧干燥后即得混合菌劑發(fā)酵粉。
[0031] 上述制得的復(fù)合菌劑或復(fù)合菌劑發(fā)酵液可用于制備提高家禽免疫力的制劑
[0032] 實(shí)施例2
[0033] -種復(fù)合菌劑，以細(xì)菌個(gè)數(shù)記，包括以下組分:側(cè)孢短芽胞桿菌10份，產(chǎn)朊假絲酵 母10份，地衣芽胞桿菌15份，米曲霉15份。
[0034] -種增強(qiáng)動(dòng)物免疫的復(fù)合菌劑發(fā)酵粉的制備方法，包括以下步驟：
[0035] (1)取葡萄糖10g、鹿糖8g、麩皮15g、蛋白胨5g、椰子粉7g、脫脂大豆粉10g，混勾，加 入純化水400g，混合均勻，制成復(fù)合菌劑發(fā)酵所需的培養(yǎng)基；
[0036] (2)將上述菌株分別活化制得菌株發(fā)酵液，取制得的菌株發(fā)酵液，混合均勻后，菌 株發(fā)酵液混合后，以細(xì)菌個(gè)數(shù)記，包括以下組分:側(cè)孢短芽胞桿菌10份，產(chǎn)朊假絲酵母10份， 地衣芽胞桿菌15份，米曲霉15份;加入到上述混合菌劑發(fā)酵培養(yǎng)物中；以細(xì)菌總數(shù)計(jì)，發(fā)酵 培養(yǎng)物中復(fù)合菌劑中總菌株濃度為10 8cfu/mL;在40 °C的溫箱中培養(yǎng)50小時(shí)得到復(fù)合菌劑 發(fā)酵液，冷凍干燥后即得混合菌劑發(fā)酵粉。
[0037] 上述制得的復(fù)合菌劑或復(fù)合菌劑發(fā)酵液可用于制備提高家畜免疫力的制劑。
[0038] 實(shí)施例3
[0039] -種復(fù)合菌劑，以細(xì)菌個(gè)數(shù)記，包括以下組分:側(cè)孢短芽胞桿菌5份，產(chǎn)朊假絲酵母 5份，地衣芽胞桿菌10份，米曲霉10份。
[0040] -種增強(qiáng)動(dòng)物免疫的復(fù)合菌劑發(fā)酵粉的制備方法，包括以下步驟：
[0041] (1)取葡萄糖5g、鹿糖5g、麩皮10g、蛋白胨3g、椰子粉5g、脫脂大豆粉7g，混勾，加入 純化水200g，混合均勻，制成復(fù)合菌劑發(fā)酵所需的培養(yǎng)基；
[0042] (2)將上述菌株分別活化制得菌株發(fā)酵液，取制得的菌株發(fā)酵液，混合均勻后，菌 株發(fā)酵液混合后，以細(xì)菌個(gè)數(shù)記，包括以下組分:側(cè)孢短芽胞桿菌10份，產(chǎn)朊假絲酵母10份， 地衣芽胞桿菌15份，米曲霉15份;加入到上述混合菌劑發(fā)酵培養(yǎng)物中，以細(xì)菌總數(shù)計(jì)，發(fā)酵 培養(yǎng)物中復(fù)合菌劑中總菌株濃度為10 7cfu/mL;在38°C的溫箱中培養(yǎng)48小時(shí)得到復(fù)合菌劑 發(fā)酵液，加入多孔淀粉，混合均勻，噴霧干燥后即得混合菌劑發(fā)酵粉。
[0043]上述制得的復(fù)合菌劑或復(fù)合菌劑發(fā)酵液可用于制備提高家禽或者家畜免疫力的 制劑。
[0044]本發(fā)明所述的混合菌劑發(fā)酵粉對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物免疫力的影響
[0045] 清潔級(jí)昆明種小鼠80只，雌雄各半，體重（20±2)g，隨機(jī)分為8組，每組10只。實(shí)驗(yàn) 組按照3個(gè)實(shí)施例提供的方法制備混合菌劑發(fā)酵粉。對(duì)照組1的復(fù)合菌劑中去掉側(cè)孢短芽胞 桿菌;對(duì)照組2的復(fù)合菌劑中去掉側(cè)孢短芽胞桿菌;對(duì)照組3的復(fù)合菌劑中去掉地衣芽胞桿 菌;對(duì)照組4的復(fù)合菌劑中去掉米曲霉;其他操作與實(shí)施例3相同。以體重為標(biāo)準(zhǔn)，實(shí)驗(yàn)組按 〇 . 〇4g/kg的給藥標(biāo)準(zhǔn)，灌胃給藥；以同等體積量的生理鹽水作為空白對(duì)照組，連續(xù)灌胃10 天。通過以下指標(biāo)評(píng)價(jià)混合菌劑發(fā)酵粉對(duì)小鼠免疫力的影響。其結(jié)果分別見表1-3。
[0046] (1)免疫器官指數(shù):脫頸處死小鼠，取小鼠胸腺和脾臟，稱重后，計(jì)算胸腺指數(shù)和脾 臟指數(shù)。胸腺指數(shù)=胸腺重量/體重;脾臟指數(shù)=脾臟重量/體重 [0047] (2)免疫功能檢測(cè)
[0048]小鼠碳廓清實(shí)驗(yàn):按100mL/kg體重從小鼠尾靜脈叢注入稀釋4倍的印度墨汁，注入 墨汁后分別在2min、10min時(shí)從眼內(nèi)眥靜脈取血20yL，并加入到0.1%的似2〇)3溶液21^中，在 600nm波長(zhǎng)測(cè)光密度值(0D)，以0.1 %的Na2C03溶液作為空白對(duì)照，計(jì)算廓清指數(shù)K。
[0049] K=