一種慢性萎縮性胃炎大鼠模型的構(gòu)建及評(píng)價(jià)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ]本發(fā)明屬于模型的構(gòu)建及評(píng)價(jià)方法技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種慢性萎縮性胃炎大鼠 模型的構(gòu)建及評(píng)價(jià)方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 慢性萎縮性胃炎(Chronic atrophic gastritis，CAG)是消化系統(tǒng)的常見(jiàn)疾病之 一，是指胃黏膜上皮遭受反復(fù)損害導(dǎo)致固有腺體的減少，伴或不伴纖維替代，腸腺化生和/ 或假幽門(mén)腺化生的一種慢性胃部疾病。在我國(guó)，CAG患者占受檢人群總數(shù)的13.8%。1978年 世界衛(wèi)生組織將CAG列為胃癌前狀態(tài)。目前，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)于慢性萎縮性胃炎尚缺乏行之有效 的治療方法?；颊咭坏┌l(fā)病，難于治愈，大多終生帶病，嚴(yán)重威脅著人類(lèi)的身體生存質(zhì)量。
[0003] CAG作為胃癌癌前疾病，是非常值得臨床及科研工作者深入研究的。病理模型的評(píng) 價(jià)則是疾病發(fā)病機(jī)制和新藥研究的關(guān)鍵所在?，F(xiàn)代研究多應(yīng)用綜合方法復(fù)制慢性萎縮性胃 炎模型，摸擬與人類(lèi)近似的病因、發(fā)病機(jī)制等特征，用于臨床和藥物研究中。但是，在模型復(fù) 制中，缺乏有效的評(píng)價(jià)方式，主要體現(xiàn)在以下幾點(diǎn)：
[0004] 目前慢性萎縮性胃炎模型復(fù)制成功與否的判斷主要根據(jù)病理組織學(xué)檢查，胃組織 形態(tài)的觀察結(jié)果作為輔助。胃蛋白酶、胃泌素、胃酸、表皮生長(zhǎng)因子、一氧化氮等機(jī)制相關(guān)檢 測(cè)指標(biāo)也被大量研究者監(jiān)測(cè)。另外，新的可視化技術(shù)還可對(duì)胃黏膜損傷面積進(jìn)行評(píng)價(jià)，進(jìn)而 清晰地顯示出胃黏膜受損情況。但長(zhǎng)期以來(lái)的實(shí)驗(yàn)研究中，慢性萎縮性胃炎模型評(píng)價(jià)仍存 在不足之處。①主觀性：胃組織形態(tài)直接觀察觀察指標(biāo)包括胃部大小、胃壁厚度、皺襞數(shù)量、 黏膜色澤及出血等，這種評(píng)價(jià)方法采取主觀人為評(píng)價(jià)，存在很大的主觀性和不確定性。②片 面性:通過(guò)慢性萎縮性胃炎相關(guān)調(diào)控因子評(píng)價(jià)模型存在一定的片面性，只能反映個(gè)別的生 化功能，器官/組織的狀態(tài)，缺乏整體的系統(tǒng)的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。③耗費(fèi)性：目前慢性萎縮性胃炎實(shí) 驗(yàn)研究還處于探索階段，普遍造模時(shí)間較長(zhǎng)，病理檢測(cè)是其目前唯一的金標(biāo)準(zhǔn)，但該方法操 作繁瑣且費(fèi)用昂貴，費(fèi)時(shí)費(fèi)力。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是解決現(xiàn)有慢性萎縮性胃炎模型的構(gòu)建及評(píng)價(jià)方法存在精確性低、 成本高和費(fèi)時(shí)費(fèi)力的技術(shù)問(wèn)題，提供一種慢性萎縮性胃炎大鼠模型的構(gòu)建及評(píng)價(jià)方法。
[0006] 為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：
[0007] -種慢性萎縮性胃炎大鼠模型的構(gòu)建方法，包括以下步驟：
[0008] 用濃度為20mmol/L的脫氧膽酸鈉溶液和濃度為0.1 %的氨水溶液?jiǎn)稳针p日交替自 由喂養(yǎng)大鼠，并保證足量;同時(shí)結(jié)合饑飽失常法:兩天足食，1天禁食，循環(huán)實(shí)施8周。
[0009] -種對(duì)上述方法構(gòu)建的慢性萎縮性胃炎大鼠模型的評(píng)價(jià)方法，包括以下步驟：
[0010] 1)在大鼠模型構(gòu)建的第0周、第4周、第6周和第8周分別收集大鼠模型的尿液，首先 對(duì)第〇周、第4周、第6周和第8周收集大鼠模型的尿液分別進(jìn)行核磁共振分析，得出大鼠模型 的 1H NMR譜圖;然后對(duì)大鼠模型的1H NMR譜圖積分?jǐn)?shù)據(jù)矩陣進(jìn)行多元統(tǒng)計(jì)分析，得出大鼠模 型的輪廓圖；進(jìn)而對(duì)大鼠模型的輪廓圖進(jìn)行輪廓?jiǎng)討B(tài)分析，得出大鼠模型的輪廓?jiǎng)討B(tài)變化 趨勢(shì)圖；
[0011] 2)對(duì)第8周收集大鼠模型的尿液進(jìn)行核磁共振分析得出大鼠模型的1H NMR圖譜進(jìn) 行積分，得出18個(gè)生物標(biāo)志物的含量變化；
[0012] 3)首先分析步驟1)得出的輪廓?jiǎng)討B(tài)變化趨勢(shì)圖，與第0周相比，在模型構(gòu)建第8周 時(shí)偏離程度最大；
[0013] 然后，分析步驟2)得出18個(gè)生物標(biāo)志物的含量變化，與第0周相比，在模型構(gòu)建第8 周時(shí)的18個(gè)生物標(biāo)志物的含量變化如下：
[0014] 模型大鼠尿液中 Isoleucine、Malonate、Sarcosine、Betaine、Glycine、 Guanidinoacetate和Allantoin含量顯著下降，具體含量變化如下：
[0015] Isoleucine的積分面積均數(shù)從正常鼠的1 · 149 ±0 · 1303下降到0 · 8691 ± 0 · 0519，p <0.01；
[0016] Malonate 的積分面積均數(shù)從正常鼠的 1 · 015 ± 0 · 119 下降 0 · 7358 ± 0 · 140，p〈0 · 01;
[0017] Sarcosine的積分面積均數(shù)從正常鼠的1 · 127 ± 0 · 309下降到0 · 8306 ±0 · 099，p〈 0.01；
[0018] Betaine的積分面積均數(shù)從正常鼠的2 · 053 ±0 · 890下降到1 · 034±0 · 253，p〈0 · 05; [0019] Glycine的積分面積均數(shù)從正常鼠的1 · 127 ±0 · 309下降到0 · 831 ±0 · 01，p〈0 · 01;
[0020] Guanidinoacetate的積分面積均數(shù)從正常鼠的1·979±0·194下降到1.626土 0·093，ρ〈0·05;
[0021] Allantoin的積分面積均數(shù)從正常鼠的2.003 ±0.481下降到0.7908 ±0.295，ρ〈 0.01；
[0022] 模型大鼠尿液中\(zhòng)^1;!_116、2-117(11'〇17131^7『&七6、八。6七&七6、311。。;!_11&七6、&-ketoglutarate、Dimethylamine、TMA、DMG、Hippurate、Fumarate 和Trigonelline 含量顯著 上調(diào)，具體含量變化如下：
[0023] Valine的積分面積均數(shù)從正常鼠的0.119±0.0849上升到0.215±0.03，p〈0.01;
[0024] 2-hydroxybutyrate的積分面積均數(shù)從正常鼠的0.597 ± 0.0836上升到0.93 土 0·026，p〈0·05;
[0025] Acetate的積分面積均數(shù)從正常鼠的0.386±0.194上升到0.612±0.029，p〈0.01;
[0026] Succinate的積分面積均數(shù)從正常鼠的0.991 ±0.266上升到2.22 ±0.775，p〈 0.05；
[0027] a-ketoglutarate的積分面積均數(shù)從正常鼠的1.338±0.346上升到1.854±0.39， p〈0·05;
[0028] Dimethylamine的積分面積均數(shù)從正常鼠的0.331 ±0.108上升到0.496±0.108，p <0.05；
[0029] TMA的積分面積均數(shù)從正常鼠的0.356±0.108上升到0.406±0.095 4〈0.01;
[0030] DMG的積分面積均數(shù)從正常鼠的0.919±0.249上升到1.233±0.595 4〈0.05;
[0031] Hippurate的積分面積均數(shù)從正常鼠的0.361 ±0.097上升到0.543 ±0.134，p〈 0.01；
[0032] Fumarate的積分面積均數(shù)從正常鼠的0.001 ±0.006上升到0.023265163±0.013， p<0.01；
[0033] Trigonelline的積分面積均數(shù)從正常鼠的0 · 0051 ±0 · 005上升到0 · 0214±0 · 009， ρ〈0·01，
[0034] 則表明慢性萎縮性胃炎大鼠模型在第8周時(shí)構(gòu)建成功。
[0035] 本發(fā)明采用以上技術(shù)方案，采用代謝組學(xué)的技術(shù)，通過(guò)分析造模前后機(jī)體終端產(chǎn) 物尿液中內(nèi)源性代謝產(chǎn)物的變化，獲得代謝輪廓?jiǎng)討B(tài)軌跡圖譜。同時(shí)，使用MestReNova軟件 對(duì)所有的NMR譜進(jìn)行處理得到積分?jǐn)?shù)據(jù)，并結(jié)合18個(gè)生物標(biāo)志物的含量統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)造 模前后尿液中的18個(gè)生物標(biāo)記物積分均值的變化一定程度上反應(yīng)了慢性萎縮性胃炎大鼠 尿液代謝軌跡的變化趨勢(shì)，從而針對(duì)性地評(píng)價(jià)慢性萎縮性胃炎的模型。代謝產(chǎn)物處于生物 機(jī)體中的終端，上游基因和蛋白質(zhì)的微小變化都會(huì)在代謝物上得到放大，從而可更加靈敏 地表征生命現(xiàn)象，能忠實(shí)反映外界干預(yù)對(duì)機(jī)體代謝網(wǎng)絡(luò)調(diào)控過(guò)程的微觀變化。且迄今為止， 未見(jiàn)代謝組學(xué)方法用于慢性萎縮性胃炎模型的評(píng)價(jià)。與以往的評(píng)價(jià)方法相比，該方法更全 面靈敏、系統(tǒng)綜合的體現(xiàn)造模前后機(jī)體的動(dòng)態(tài)輪廓，綜合地體現(xiàn)模型復(fù)制的合理性和科學(xué) 性，可以為新藥研發(fā)和藥理研究提供一種可靠的慢性萎縮性胃炎模型的評(píng)價(jià)方法，具有高 效、快速、無(wú)創(chuàng)傷、特異性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)。
[0036] 為表明本發(fā)明具有以上優(yōu)點(diǎn)，分別采用造模前后大鼠體重、生化指標(biāo)及病理變化 評(píng)價(jià)慢性萎縮性胃炎模型的方法(結(jié)果見(jiàn)圖4、圖5、圖6和表1)和本發(fā)明所述方法評(píng)價(jià)慢性 萎縮性胃炎模型的方法(結(jié)果見(jiàn)圖1、圖2和圖3)，
[0037] 弄1 .誥樽前后各鉬女鼠的S0D、MDA7J曽蛋白BS活力倌奪化愔況（Mean土SD)
[0038]
[0039] 與正常對(duì)照組相比，*ρ<0·05,林ρ<0·01。
[0040] 利用造模前后兩組大鼠生化指標(biāo)的變化評(píng)價(jià)模型的可靠性。結(jié)果表明，與正常對(duì) 照組相比，模型組大鼠血漿S0D值顯著下降，而MDA值顯著升高，胃蛋白酶顯著降低。生化分 析結(jié)果表明慢性萎縮性胃炎模型造模成功。
[0041] 通過(guò)對(duì)比可知，采用本發(fā)明所述評(píng)價(jià)方法能更加全面靈敏的監(jiān)測(cè)慢性萎縮性胃炎 模型的復(fù)制過(guò)程，具有高效、快速、無(wú)創(chuàng)傷、特異性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)。
【附圖說(shuō)明】
[0042] 圖1是模型構(gòu)建期間大鼠模型尿液的PCA動(dòng)態(tài)趨勢(shì)圖；
[0043]圖2是大鼠模型尿液0PLS-DA分析得分圖；
[0044]圖3是大鼠模型尿液0PLS-DA分析載荷圖；
[0045]圖4是大鼠模型復(fù)制期間大鼠體重變化趨勢(shì)圖；
[0046]圖5是正常大鼠胃組織病理圖；
[0047]圖6是大鼠模型胃組織病理圖。
【具體實(shí)施方式】
[0048] -種慢性萎縮性胃炎大鼠模型的構(gòu)建方法，包括以下步驟：
[0049] 用濃度為20mmol/L的脫氧膽酸鈉溶液和濃度為0.1 %的氨水溶液?jiǎn)稳针p日交替自 由喂養(yǎng)大鼠，并保證足量;同時(shí)結(jié)合饑飽失常法:兩天足食，1天禁食，循環(huán)實(shí)施8周。
[0050] -種對(duì)本實(shí)施例所述方法構(gòu)建的慢性萎縮性胃炎大鼠模型的評(píng)價(jià)方法，包括以下 步驟：
[0051] 1)應(yīng)用多元統(tǒng)計(jì)分析方法對(duì)代謝輪廓進(jìn)行表征，采用主成分分析(PCA)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn) 行模式識(shí)別，考察各組數(shù)據(jù)輪廓的分離情況。具體方法是在大鼠模型構(gòu)建的第〇周、第4周、 第6周和第8周分別收集大鼠模型的尿液，首先對(duì)第0周、第4周、第6周和第8周收集大鼠模型 的尿液分別進(jìn)行核磁共振分析，得出大鼠模型的 1H NMR圖譜;然后對(duì)大鼠模型的1H NMR譜圖 積分?jǐn)?shù)據(jù)矩陣進(jìn)行多元統(tǒng)計(jì)分析，得出大鼠模型的輪廓圖；進(jìn)而對(duì)大鼠模型的輪廓圖進(jìn)行 輪廓