一種脂必妥片中桔霉素的檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明提供一種桔霉素的檢測(cè)方法，具體的說(shuō)是一種脂必妥片中桔霉素的檢測(cè)方 法;屬于化學(xué)檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 桔霉素(citrinin)是1931年首次從青霉菌Penicillium citrinum中分離得到。其 分子式為C13H14O5，分子量為250.25。桔霉素有一定的腎毒性和肝毒性，能致畸、引發(fā)腫瘤及 誘發(fā)突變。而紅曲是中國(guó)傳統(tǒng)藥材，是用特有的紅曲霉菌在大米中培養(yǎng)發(fā)酵而成。因某些紅 曲霉菌株能產(chǎn)生具有抑制膽固醇生物合成的他汀類(lèi)物質(zhì)，因而中藥紅曲被開(kāi)發(fā)為降血脂的 脂必妥片和保健食品。在1995年法國(guó)學(xué)者Blanc等首次發(fā)現(xiàn)了紅曲產(chǎn)品中含有桔霉素后，國(guó) 外已將桔霉素作為食品污染的嚴(yán)格控制指標(biāo)。而在中國(guó)，中國(guó)藥典尚未將桔霉素作為含紅 曲中成藥的控制指標(biāo)。
[0003] 對(duì)于脂必妥片一一脂必妥片有文獻(xiàn)記載用RP-HPLC法測(cè)定其桔霉素含量，而在食 品、保健食品中也有桔霉素的檢測(cè)方法:薄層層析法、熒光分光光度法、高效液相色譜法等。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 針對(duì)上述不足，本發(fā)明的目的是提供一種靈敏度高，分析時(shí)間短的脂必妥片中桔 霉素的檢測(cè)方法桔霉素的方法。
[0005] 為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供的技術(shù)方案如下：
[0006] -種脂必妥片中桔霉素的檢測(cè)方法，所述的檢測(cè)方法包括下述步驟：1)制備標(biāo)準(zhǔn) 溶液；：1)制備標(biāo)準(zhǔn)溶液;2)取脂必妥片0.5g粉碎，置10ml錐形瓶中，加3ml 1%磷酸-甲醇溶 液，60°C加熱回流60min，冷卻，過(guò)濾，濾液轉(zhuǎn)移至25ml容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻后過(guò) 濾，以lml/min流速通過(guò)分別以3ml乙醇和3ml水活化的HLB固相萃取柱，用5ml水淋洗，棄去， 再用5ml乙醇洗脫收集洗脫液，洗脫液于40°C下氮吹至近干，精密加入lml乙醇溶解，用0.22 μπι有機(jī)濾膜過(guò)濾，即得待測(cè)樣品，將待測(cè)樣品上Agi 1 ent 1295-6550C三重四級(jí)桿液相質(zhì)譜聯(lián) 用儀檢測(cè)。
[0007] 進(jìn)一步的，上述的一種脂必妥片中桔霉素的檢測(cè)方法，所述的制備標(biāo)準(zhǔn)溶液包括 下述步驟：
[0008] 1)標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備
[0009] 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液:精密稱(chēng)取標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)5mg，置5ml容量瓶中，加乙醇溶解并至刻度，使成 濃度為lmg/ml;
[0010] 標(biāo)準(zhǔn)稀釋液:精密吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液〇.2ml，置50ml的容量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，使 成濃度為2μg/mll;
[0011] 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線(xiàn)：取標(biāo)準(zhǔn)稀釋液液適量加乙醇，分別配制成濃度為0.01、2、5、5、 20ng/ml標(biāo)準(zhǔn)工作液。
[0012] 進(jìn)一步的上述的一種脂必妥片中桔霉素的檢測(cè)方法，所述的液相色譜與質(zhì)譜條件 色譜柱：Agilent poroshell 120EC-C18,3.0X50mm 2.7micron，1.8ym;流動(dòng)相A為0.2%磷 酸，流動(dòng)相B為甲醇，采用梯度洗脫程序如下：0_3min，A、75-5%，B、25-95 % ; 3-5.5min，A、 5%，B、95% ;5.5.-5.6min，A、75%，B、25% ;流速0.2ml/min;柱溫40°C;進(jìn)樣量2μ1;電噴霧 源ESI，正離子方式，選擇多反應(yīng)監(jiān)測(cè)MRM，載氣溫度：150°C，載氣流量：15L/min，霧化器壓 力40psi，鞘氣溫度300 °C，鞘氣流量：12L/min，毛細(xì)管電壓3500V，定性定量離子:母離子m/z =251.2，子離子m/z233.2和m/z 205.2，碰撞能量分別為5V和20V。
[0013]本文建立了含紅曲脂必妥片的桔霉素液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定，本方法在6min內(nèi) 完成了對(duì)該物質(zhì)的分析測(cè)定，在保證定性定量準(zhǔn)確的情況下，實(shí)現(xiàn)了高靈敏的分析，并在提 取過(guò)程中減少了甲苯等有毒試劑的使用，具有高效、環(huán)保等特點(diǎn)，可為脂必妥片中的桔霉素 監(jiān)測(cè)提供技術(shù)支撐。
【附圖說(shuō)明】
[0014]圖1是2μg/ml桔霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液多反應(yīng)監(jiān)測(cè)圖。
[0015] 圖2是空白樣品的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)圖。
【具體實(shí)施方式】
[0016] 下面結(jié)合【具體實(shí)施方式】，對(duì)本發(fā)明的權(quán)利要求做進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明，但不構(gòu)成對(duì) 本發(fā)明的任何限制，任何在本發(fā)明權(quán)利要求保護(hù)范圍所做的有限次的修改，仍在本發(fā)明的 權(quán)利要求保護(hù)范圍之內(nèi)。
[0017] 實(shí)施例！
[0018] 1 材料
[0019] 1.1儀器
[0020] Agi lent 1295-6550C三重四級(jí)桿液相質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國(guó)Agilent )、HLB-SPE柱 (60mg/3ml，上海安譜科學(xué)儀器有限公司）、Agilent ZORBAX Eclipse Plus(2.1X50mm，1.8 μπι;美國(guó)Agi 1 ent)、XA20OTU電子天平(德國(guó)梅特勒托利多公司）、超聲波清洗器。
[0021] 1.2脂必妥片與試劑
[0022] 脂必妥片3批，均來(lái)源于市場(chǎng)銷(xiāo)售樣品。
[0023] 桔霉素（批號(hào)：518-75-2-150403,標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)于Pribolab，純度>98%)，乙醇和甲醇 均為色譜純，其它試劑均為分析純，實(shí)驗(yàn)用水為經(jīng)ELGA PURELAB ClassicUVF凈化系統(tǒng)過(guò)濾 的去離子水。
[0024] 本發(fā)明所涉及到的百分濃度，沒(méi)有特別說(shuō)明的，液體均為體積濃度，溶質(zhì)為固體的 指質(zhì)量濃度。
[0025] 2方法與結(jié)果
[0026] 2.1標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備
[0027] 2.1.1標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液:精密稱(chēng)取標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)5mg，置5ml容量瓶中，加乙醇溶解并至刻度， 使成濃度為lmg/ml。
[0028] 2.1.2標(biāo)準(zhǔn)稀釋液:精密吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液0.2ml，置50ml的容量瓶中，加乙醇稀釋至刻 度，使成濃度為2μg/ml，檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)見(jiàn)圖1。
[0029] 2.1.3標(biāo)準(zhǔn)工作曲線(xiàn)：取標(biāo)準(zhǔn)稀釋液液適量加乙醇，分別配制成濃度為0.01、2、5、 5、20ng/ml標(biāo)準(zhǔn)工作液。
[0030] 2.2樣品前處理
[0031] 測(cè)方法包括下述步驟：1)制備標(biāo)準(zhǔn)溶液；：1)制備標(biāo)準(zhǔn)溶液;2)取脂必妥片0.5g粉 碎，置10ml錐形瓶中，加3ml 1 %磷酸-甲醇溶液，60°C加熱回流60min，冷卻，過(guò)濾，濾液轉(zhuǎn)移 至25ml容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻后過(guò)濾，待用。
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