一種楊梅葉原花色素微乳液抗氧化體系及用圖
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種楊梅葉原花色素微乳液抗氧化體系及用途：用不同純度的楊梅葉原花色素、吐溫?20和PBS形成微乳液作為抗氧化體系，改善其在復雜食品體系中的應用，以及提高油脂含量豐富的食品的營養(yǎng)價值；楊梅葉原花色素在乳化體系中的重量比為0.02％，所述楊梅葉原花色素是楊梅葉粉碎后丙酮萃取，經(jīng)大孔樹脂純化后再經(jīng)Sephadex LH?20純化，經(jīng)甲醇和丙酮洗脫后冷凍干燥所得的棕黃色粉末，其中，楊梅葉原花色素純度大于等于85％。
【專利說明】
一種楊梅葉原花色素微乳液抗氧化體系及用途
技術領域
[0001] 本發(fā)明涉及農(nóng)副產(chǎn)品精深加工及綜合利用領域，特別涉及從楊梅葉中提取純化高 純度的原花色素，并用它制備微乳液作為新型的抗氧化體系，提高其在復雜食品體系中的 應用價值。
【背景技術】
[0002] 目前，常用的合成抗氧化劑有2，6_二叔丁基化羥基甲苯(BHT)、特丁基對苯二酚 (TBHQ)、叔丁基對羥基茴香醚(BHA)、沒食子酸丙酯(PG)等酚類抗氧化劑，這些苯酚型結構 化合物能阻斷油脂自動氧化鏈式反應機制，具有很強的抗氧化性能。但是，近年來的相關研 究表明人工合成抗氧化劑會對人體造成一定的危害，如BHT可能具有致癌性，PG可能引起腎 臟損傷等。因此，安全、高效、穩(wěn)定、價格低廉的天然抗氧化劑將成為食品添加劑及保健食品 研究開發(fā)的重點。膽固醇及亞油酸是人體內不可或缺的重要脂質，人體細胞膜中含有大量 膽固醇，亞油酸是人體的必需脂肪酸，用于維持血液濃度和調節(jié)細胞膜的流動性。但被氧化 的膽固醇和過氧化的亞油酸對人體健康會產(chǎn)生損害:羥膽固醇是膽固醇的氧化產(chǎn)物，極易 堆積在血管壁上，從而引發(fā)動脈粥樣硬化，增加心臟病和中風發(fā)作的風險;而亞油酸作為常 見的多不飽和脂肪酸，容易發(fā)生過氧化反應，對人體健康造成損害。因此，開發(fā)新型的以天 然產(chǎn)物為基礎的抗氧化劑，能夠應用于復雜食品體系的同時，減緩人體體內的油脂氧化，是 當前功能性食品開發(fā)的熱點。
[0003] 原花色素(PAs)是一類廣泛存在于植物界的多酚類物質。研究表明原花色素具有 抗氧化、防癌、抗菌消炎、預防和治療心血管疾病等活性功能。原花色素廣泛存在于各種植 物中，是分布范圍僅限于木質素的次生代謝物質，主要分布在植物樹皮、果皮、種子等部位。 根據(jù)聚合度，可將原花色素分為單體原花色素、低聚原花色素 (mDP = 2-5)和高聚原花色素 (mDP 2 6)。不同植物的原花色素含量、組成和結構也不盡相同，不同來源的原花色素聚合度 不同，即使是不同品種間也有差異。研究表明，楊梅葉原花色素為獨特的原飛燕草素結構， 幾乎所有的結構組成單元在C-3位發(fā)生了掊酸酯化，其結構組成單元全部為EGCG，因此，楊 梅葉原花色素特殊的并具有強活性的結構單元可能是潛在的強抗氧化劑來源。楊梅葉原花 色素是親水性化合物，本研究配制的楊梅葉原花色素微乳液能有助于提高PAs在兩親型的 食品體系中的應用，與純水溶液相比，乳化體系中使用更少的PAs就能達到優(yōu)于合成抗氧化 劑的作用。乳化體系的使用，擴大了原花色素在食品添加劑中的應用范圍，提高了原花色素 的在復雜食品體系中的抗氧化效果，目前尚未有相關文獻或專利報道。

【發(fā)明內容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有技術的不足，提供一種楊梅葉原花色素微乳液抗氧化 體系的制備方法及應用。
[0005] 本發(fā)明的目的是通過以下技術方案來實現(xiàn)的：一種楊梅葉原花色素微乳液抗氧化 體系，它通過以下方法制備得到：
[0006] (1)、將楊梅葉粉碎，過40目篩，70 %丙酮萃取，-50°C下冷凍干燥24小時，得黃棕色 粉末;其中，楊梅葉原花色素的純度2 35% (質量％);所述70%丙酮由丙酮和水按照體積比 70:30混合得到；
[0007] (2)、將步驟1得到的黃棕色粉末經(jīng)HPD-500大孔樹脂純化后，再經(jīng)Sephadex LH-20 純化，經(jīng)90%甲醇和50%丙酮洗脫，收集丙酮相，-50°C下冷凍干燥24小時，得到黃棕色粉 末；其中，楊梅葉原花色素的純度2 85% (質量％ );所述90%甲醇由甲醇和水按照體積比 90:10混合得到，所述50 %丙酮由丙酮和水按照體積比50:50混合得到；
[0008] (3)、將吐溫-20、PBS按照比例1:50 (v/v)混合均勻，配制吐溫-PBS乳化液；
[0009] (4)、將步驟2所得黃棕色粉末按照質量比0.02:100加入到步驟3配制的吐溫-PBS 乳化液中，得到楊梅葉原花色素微乳液抗氧化體系。
[0010] -種上述楊梅葉原花色素微乳液抗氧化體系作為食品抗氧化劑的用途。
[0011] 本發(fā)明與現(xiàn)有技術相比，其有益效果在于:楊梅葉原花色素微乳液表現(xiàn)出良好的 抗亞油酸、膽固醇氧化的性能?？寡趸瘎〣HT和TBHQ在乳化體系中的重量比為0.02%作為陽 性對照，通過GC-MS法測定37°C下放置的亞油酸-楊梅葉原花色素微乳液中亞油酸的殘留 值，以及測定60°C下放置的膽固醇-楊梅葉原花色素微乳液中7-酮基膽固醇(膽固醇最終氧 化產(chǎn)物)的生成量，證明楊梅葉原花色素微乳液比親水體系使用更少的量，就能達到更優(yōu)的 抗氧化效果，而且第二楊梅葉原花色素微乳液(〇. 02 % )比同劑量的BHT、TBHQ的抗亞油酸和 膽固醇氧化的效果更佳，極具開發(fā)為天然抗氧化劑的潛力。此外，楊梅葉原花色素微乳液能 有助于原花色素在復雜食品體系的應用，提高原花色素的抗氧化效果，擴大其在食品添加 劑中的應用范圍，除吐溫-20以外，其他能幫助水相和油相互溶，配置成穩(wěn)定的乳化體系的 乳化劑均能運用于乳化體系中。因此，將楊梅葉原花色素也應用于食用油脂或富含油脂的 食品中，能夠延緩油脂氧化，提高油脂的抗氧化性能，在食品工業(yè)中具有廣闊的應用前景。
【附圖說明】
[0012] 圖1是親水體系中第二楊梅葉原花色素(0.04% )48h亞油酸保留量GC圖；
[0013] 圖2是第二楊梅葉原花色素微乳液(0.02% )48h亞油酸保留量GC圖；
[0014] 圖3是親水體系中第二楊梅葉原花色素(0.04% )5d 7-酮基膽固醇生成量GC圖； [0015]圖4是第二楊梅葉原花色素微乳液(0.02% )5d 7-酮基膽固醇生成量GC圖。
【具體實施方式】
[0016]下面根據(jù)實施例比較說明本申請方案的確定過程，通過實施例的解釋說明，本發(fā) 明的非顯而易見性和其相對于現(xiàn)有技術的進步得到更明顯的體現(xiàn)。
[0017]實施例卜實施例4中涉及的物質和體系的制備過程大致如下：
[0018] 第一楊梅葉原花色素為未經(jīng)Sephadex LH-20純化，丙酮萃取楊梅葉粉末后冷凍干 燥所得的黃棕色粉末;其中，楊梅葉原花色素的純度2 35% (質量％ )。
[0019] 第二楊梅葉原花色素為第一楊梅葉原花色素經(jīng)大孔樹脂純化后，再經(jīng)Sephadex LH-20,經(jīng)甲醇和丙酮洗脫，收集丙酮相，冷凍干燥后所得的黃棕色粉末;其中，楊梅葉原花 色素的純度285%(質量％);
[0020] 加入了促氧化劑的乳化體系的制備過程為:按照吐溫_20、PBS比例l:50(v/v)配制 吐溫-PBS乳化液;加入AAPH作為促氧化劑，其在乳化體系中的重量比為0.3 %，充分混合均 勾，應無分層現(xiàn)象。
[0021]加入了促氧化劑的楊梅葉原花色素微乳液抗氧化體系的制備過程為:按照第一楊 梅葉原花色素、第二楊梅葉原花色素與乳化體系的重量比為〇. 02:0.02:100，以乳化體系為 基準，稱取第一楊梅葉原花色素和第二楊梅葉原花色素。將稱取好的第一楊梅葉原花色素 和第二楊梅葉原花色素分別溶于PBS緩沖溶液中，充分溶解，定容，得到兩種楊梅葉原花色 素溶液。將兩種楊梅葉原花色素溶液分別加入乳化體系中，充分攪拌混勻，可得兩種楊梅葉 原花色素微乳液。
[0022]按照比例在楊梅葉原花色素微乳液中添加亞油酸或膽固醇。
[0023]所述亞油酸按照其與楊梅葉原花色素微乳液體積比為0.0125%，添加到楊梅葉原 花色素微乳液中，震蕩均勻，制得亞油酸-楊梅葉原花色素微乳液混合體系。
[0024] 所述膽固醇按照其與楊梅葉原花色素微乳液比例為lmg:lmL，添加到楊梅葉原花 色素微乳液中，勻漿機勻漿，震蕩均勻，制得膽固醇-楊梅葉原花色素微乳液混合體。
[0025] 實施例1:親水性體系中第一楊梅葉原花色素對亞油酸和膽固醇的抗氧化作用 [0026]分別配置亞油酸-PBS親水性體系和膽固醇-PBS親水性體系，分裝20mL至錐形瓶 中，按質量分數(shù)〇.04%的濃度添加楊梅葉原花色素粗提物(純度36.31 % )，表格和圖中空白 為無添加楊梅葉原花色素的roS溶液，并以質量分數(shù)0.02 %的BHT和TBHQ的roS溶液作為陽 性對照。將亞油酸-PBS親水性體系置于37°C水浴搖床中敞口放置，并隨機調整它們在水浴 鍋中的位置，以保證各組溫度條件相同，用GC-MS測定24小時以及48小時后亞油酸的殘留 量。將膽固醇-PBS親水性體系置于60°C水浴搖床中敞口放置，并隨機調整它們在水浴鍋中 的位置，以保證各組溫度條件相同，5天后用GC-MS測定7-酮基膽固醇的含量，可知膽固醇氧 化程度。實驗結果如表1所示。
[0027] GC-MS測定結果顯示，對比空白組，楊梅葉原花色素粗提物對亞油酸含量減少，以 及對膽固醇的最終氧化產(chǎn)物7-酮基膽固醇的含量增加有抑制作用，能抑制亞油酸和膽固醇 的氧化。但在由于沒有乳化，使楊梅葉原花色素不能充分與油滴接觸，所以抗氧化效果明顯 減弱，說明乳化體系對于原花色素的抗氧化效果的必要性。
[0028] 表 1
[0029]
[0030] 實施例2:親水性體系中第二楊梅葉原花色素對亞油酸和膽固醇的抗氧化作用
[0031] 將楊梅葉原花色素純化后冷凍干燥（純度85.69%)，用PBS配置成已知濃度的溶 液。分別配置亞油酸親水性體系和膽固醇親水體系，分裝20mL至錐形瓶中，按質量分數(shù) 0.04 %的濃度添加第二楊梅葉原花色素，空白為PBS溶液，并以質量分數(shù)0.02 %的BHT和 TBHQ的PBS溶液作為陽性對照。其余與實驗1所述一致。實驗結果如表2、圖1和圖3所示。 [0032] GC-MS測定結果顯示，相比第一楊梅葉原花色素，第二楊梅葉原花色素對亞油酸含 量減少，以及對膽固醇的最終氧化產(chǎn)物7-酮基膽固醇的含量增加有更為明顯的抑制作用， 表明楊梅葉原花色素的純度與其抗氧化效果正相關。0.04%濃度的第二楊梅葉原花色素的 抗氧化效果要優(yōu)于同濃度原花色素粗提物，并與〇. 02%的BHT和TBHQ抗氧化能力相當。 [0033]表 2
[0036]實施例3:第一楊梅葉原花色素微乳液對亞油酸和膽固醇的抗氧化作用 [0037] 按照吐溫_20、PBS比例1: 50(v/v)配制吐溫-PBS乳化液；加入AAPH作為促氧化劑， 其在乳化體系中的重量比為0.3%，充分混合均勻，應無分層現(xiàn)象。按照第一楊梅葉原花色 素與乳化體系的重量比為0.02%配制第一楊梅葉原花色素微乳液。分別將亞油酸和膽固醇 添加至第一楊梅葉原花色素微乳液中，亞油酸的添加量按照其與楊梅葉原花色素微乳液體 積比為0.0125%添加;膽固醇按照其與楊梅葉原花色素微乳液比例為lmg: lmL添加，表格和 圖中空白為溶液，并以質量分數(shù)0.02 %的BHT和TBHQ的roS溶液作為陽性對照。將亞油酸 乳化體系置于37°C水浴搖床中敞口放置，并隨機調整它們在水浴鍋中的位置，以保證各組 溫度條件相同，用GC-MS測定24小時以及48小時后亞油酸的殘留量。將膽固醇乳化體系置于 60°C水浴搖床中敞口放置，并隨機調整它們在水浴鍋中的位置，以保證各組溫度條件相同， 5天后用GC-MS測定7-酮基膽固醇的含量，可知膽固醇氧化程度。實驗結果表3所示。
[0038] GC-MS測定結果顯示，在乳化體系中，相比親水體系中更高劑量的第一楊梅葉原花 色素(0.04% )，第一楊梅葉原花色素微乳液(0.02% )對亞油酸含量減少，尤其對膽固醇的 最終氧化產(chǎn)物7-酮基膽固醇的含量增加起到更為明顯的抑制作用。相比親水體系，在微乳 體系中，亞油酸24h和48h的保留量分別提高了8.1 %和13.6; 7-酮基膽固醇的生成量則降低 了 41.7%，說明微乳體系顯著改善了楊梅葉原花色素的抗氧化能力。
[0039] 表 3
[0040]
[0041 ]實施例4:第二楊梅葉原花色素微乳液對亞油酸和膽固醇的抗氧化作用 [0042] 按照吐溫_20、PBS比例1: 50(v/v)配制吐溫-PBS乳化液；加入AAPH作為促氧化劑， 其在乳化體系中的重量比為0.3%，充分混合均勻，應無分層現(xiàn)象。按照第二楊梅葉原花色 素與乳化體系的重量比為0.02%配制第二楊梅葉原花色素微乳液。分別將亞油酸和膽固醇 添加至第二楊梅葉原花色素微乳液中，亞油酸的添加量按照其與楊梅葉原花色素微乳液體 積比為0.0125%添加;膽固醇按照其與楊梅葉原花色素微乳液比例為lmg: lmL添加，表格和 圖中空白為溶液，并以質量分數(shù)0.02 %的BHT和TBHQ的roS溶液作為陽性對照。將亞油酸 乳化體系置于37°C水浴搖床中敞口放置，并隨機調整它們在水浴鍋中的位置，以保證各組 溫度條件相同，用GC-MS測定24小時以及48小時后亞油酸的殘留量。將膽固醇乳化體系置于 60°C水浴搖床中敞口放置，并隨機調整它們在水浴鍋中的位置，以保證各組溫度條件相同， 5天后用GC-MS測定7-酮基膽固醇的含量，可知膽固醇氧化程度。實驗結果如表4、圖2和圖4 所示。
[0043] GC-MS測定結果顯示，在乳化體系中，相比親水體系中更高劑量的第二楊梅葉原花 色素(0.04% )，第二楊梅葉原花色素微乳液(0.02% )對亞油酸含量減少，尤其對膽固醇的 最終氧化產(chǎn)物7-酮基膽固醇的含量增加起到非常顯著的抑制作用。相比親水體系，在微乳 體系中，亞油酸24h和48h的保留量分別提高了 17.3 %和19.0 % ; 7-酮基膽固醇的生成量則 降低了62.2 %。而且，在微乳體系中，第二楊梅葉原花色素的抗亞油酸和膽固醇的氧化能 力，更優(yōu)于相同劑量的BHT和TBHQ，說明微乳體系顯著改善了楊梅葉原花色素的抗氧化能 力，同時也說明了，高純度的第二楊梅葉原花色素極具開發(fā)為天然抗氧化劑的能力。
[0044]表 4
[0045]
[0046] 通過以上實施例，可以發(fā)現(xiàn)，通過以下方案制備得到的楊梅葉原花色素微乳液抗 氧化體系作為食品抗氧化劑，加入到食品中能夠延緩食品的氧化，提高其營養(yǎng)價值：
[0047] 1、將楊梅葉粉碎，過40目篩，70 %丙酮萃取，-50 °C下冷凍干燥24小時，得黃棕色粉 末；其中，楊梅葉原花色素的純度2 35% (質量％ );所述70%丙酮由丙酮和水按照體積比 70:30混合得到；
[0048] 2、將步驟1得到的黃棕色粉末經(jīng)HPD-500大孔樹脂純化后，再經(jīng)Sephadex LH-20純 化，經(jīng)90%甲醇和50%丙酮洗脫，收集丙酮相，-50°C下冷凍干燥24小時，得到黃棕色粉末； 其中，楊梅葉原花色素的純度2 85% (質量％ );所述90%甲醇由甲醇和水按照體積比90:10 混合得到，所述50 %丙酮由丙酮和水按照體積比50:50混合得到；
[0049] 3、將吐溫-20、PBS按照比例1:50 (v/v)混合均勻，配制吐溫-PBS乳化液；
[0050] 4、將步驟2所得黃棕色粉末按照質量比0.02:100加入到步驟3配制的吐溫-PBS乳 化液中，得到楊梅葉原花色素微乳液抗氧化體系。
[0051]最后，還有注意的是，以上例舉的僅是本發(fā)明的若干個具體實施例。顯然，本發(fā)明 不限于以上實施例，還可以有許多變形。本領域的普通技術人員能從本發(fā)明公開的內容直 接導出或聯(lián)想到的所有變形，均應認為是本發(fā)明的保護范圍。
【主權項】
1. 一種楊梅葉原花色素微乳液抗氧化體系，其特征在于，它通過以下方法制備得到： (1) 、將楊梅葉粉碎，過40目篩，70%丙酮萃取，-50°c下冷凍干燥24小時，得黃棕色粉 末；其中，楊梅葉原花色素的純度2 35% (質量％ );所述70%丙酮由丙酮和水按照體積比 70:30混合得到； (2) 、將步驟1得到的黃棕色粉末經(jīng)HPD-500大孔樹脂純化后，再經(jīng)Sephadex LH-20純 化，經(jīng)90%甲醇和50%丙酮洗脫，收集丙酮相，-50°C下冷凍干燥24小時，得到黃棕色粉末； 其中，楊梅葉原花色素的純度2 85% (質量％ );所述90%甲醇由甲醇和水按照體積比90:10 混合得到，所述50 %丙酮由丙酮和水按照體積比50:50混合得到； (3) 、將吐溫-20、PBS按照比例1:50 (v/v)混合均勻，配制吐溫-PBS乳化液； (4) 、將步驟2所得黃棕色粉末按照質量比0.02:100加入到步驟3配制的吐溫-PBS乳化 液中，得到楊梅葉原花色素微乳液抗氧化體系。2. -種權利要求1所述楊梅葉原花色素微乳液抗氧化體系作為食品抗氧化劑的用途。
【文檔編號】C11B5/00GK105831548SQ201610169173
【公開日】2016年8月10日
【申請日】2016年3月23日
【發(fā)明人】張妤, 葉興乾, 陳士國, 韋朝陽, 段潔
【申請人】浙江大學