一種羅漢果外植體表面滅菌技術(shù)的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供的一種羅漢果外植體表面滅菌技術(shù)，屬于植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，使用本發(fā)明的方法處理的羅漢果外植體，其外植體的污染率降低到15％以下，褐化率降低到5以下，誘導(dǎo)率在50％以上，該處理方法能夠保證后續(xù)的組織培養(yǎng)的成活率提高。
【專利說明】
一種羅漢果外植體表面滅菌技術(shù)
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)技術(shù)，尤其涉及一種羅漢果外植體表面滅菌技術(shù)。
【背景技術(shù)】
[0002] 羅漢果(學(xué)名：Siraitiagrosvenorii)是萌蘆科多年生藤本植物。其葉心形，雌雄 異株，夏季開花，秋天結(jié)果。中醫(yī)以其果實入藥，含有羅漢果甜苷、多種氨基酸和維生素等藥 用成分，主治肺熱痰火咳嗽、咽喉炎、扁桃體炎、急性胃炎、便秘等。因為羅漢果是雌雄異株， 又花期不遇，加之花粉粘重且著生于花藥不易被昆蟲觸及的地方，所以很難像普通的風(fēng)媒 花或蟲媒花那樣傳粉，因此自然條件下，結(jié)果的機率極低（目前人工栽培仍然必須人工授 粉）。同時，羅漢果種子實生苗有70%左右為雄株，且要等到2~3年之后，開花時才能判定， 生產(chǎn)上基本無實用價值。但是，羅漢果的習(xí)性是，到了秋季分枝藤蔓會向下垂，并迅速伸長， 一經(jīng)著地就會膨大變作指頭大小的塊莖(俗稱"薯塊"、"薯仔"），可以頑強地越冬，來年萌發(fā) 成為獨立的新植株。這是羅漢果自然繁殖的重要方式。在人工栽培之后，演化成了人工壓 蔓，小"塊莖"依然是羅漢果最重要的種源。然而，這些傳統(tǒng)塊莖容易傳播病毒及其它病蟲 害，又難以大批量生產(chǎn)，無法滿足現(xiàn)代規(guī)?；N植的需求。
[0003] 世紀(jì)末無菌無毒的羅漢果組培苗研究成功，很快就取代傳統(tǒng)塊莖成為最重要的種 源。先研究在羅漢果組培技術(shù)前，其消毒殺菌下過不是很理想，導(dǎo)致后面的組織培養(yǎng)成活率 不尚。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種羅漢果外植體表面滅菌技術(shù)。
[0005] 本發(fā)明通過以下技術(shù)方案得以實現(xiàn)。
[0006] 本發(fā)明提供的一種羅漢果外植體表面滅菌技術(shù)，包括以下步驟：
[0007] 1)使用常規(guī)方法制作羅漢果組培苗，并取中間健壯部分，分切成帶腋芽單節(jié)莖段；
[0008] 2)用濃度為3~5%的肥皂水浸泡5~lOmin，撈起后使用無菌水沖洗一次；
[0009] 3)再用濃度為0.05~0.1 %的檸檬酸溶液浸泡5~lOmin，撈起后使用無菌水沖洗 一次；
[0010] 4)再用濃度50~60%的酒精溶液浸泡15~20s，撈起后使用無菌水沖洗一次；
[0011] 5)再使用濃度為0.1~0.3%的高錳酸鉀溶液浸泡3~5min，撈起后使用無菌水沖 洗一次，得到滅菌的羅漢果外植體。
[0012] 進(jìn)一步的，包括以下步驟：
[0013] 1)使用常規(guī)方法制作羅漢果組培苗，并取中間健壯部分，分切成帶腋芽單節(jié)莖段；
[0014] 2)用濃度為4%的肥皂水浸泡8min，撈起后使用無菌水沖洗一次；
[0015] 3)再用濃度為0.08%的檸檬酸溶液浸泡8min，撈起后使用無菌水沖洗一次；
[0016] 4)再用濃度55 %的酒精溶液浸泡18s，撈起后使用無菌水沖洗一次；
[0017] 5)再使用濃度為0.2%的高錳酸鉀溶液浸泡4min，撈起后使用無菌水沖洗一次，得 到滅菌的羅漢果外植體。
[0018] 進(jìn)一步的，得到滅菌的羅漢果外植體使用紫外線照射10~20s。
[0019] 進(jìn)一步的，得到的滅菌的羅漢果外植體用濾紙包裹，并對濾紙噴灑MS+BA0.5~ 0.7mg/L+IAA0.1~0.2mg/L+蔗糖30g/L的溶液噴灑，使得濾紙足夠濕潤。
[0020] 本發(fā)明的有益效果在于:使用本發(fā)明的方法處理的羅漢果外植體，其外植體的污 染率降低到15%以下，褐化率降低到5以下，誘導(dǎo)率在50%以上，該處理方法能夠保證后續(xù) 的組織培養(yǎng)的成活率提高。
[0021 ]為了證明本發(fā)明的技術(shù)效果，本發(fā)明還提供以下試驗例：
[0022] 試驗例一
[0023] 試驗組1:其處理步驟為：
[0024] 1)使用常規(guī)方法制作羅漢果組培苗，并取中間健壯部分，分切成帶腋芽單節(jié)莖段；
[0025] 2)用濃度為4%的肥皂水浸泡8min，撈起后使用無菌水沖洗一次；
[0026] 3)再用濃度為0.08%的檸檬酸溶液浸泡8min，撈起后使用無菌水沖洗一次；
[0027] 4)再用濃度55 %的酒精溶液浸泡18s，撈起后使用無菌水沖洗一次；
[0028] 5)再使用濃度為0.2%的高錳酸鉀溶液浸泡4min，撈起后使用無菌水沖洗一次，得 到滅菌的羅漢果外植體。
[0029] 6 )得到的滅菌的羅漢果外植體用濾紙包裹，并對濾紙噴灑MS + BAO . 6mg/L+ ΙΑΑ0.2mg/L+蔗糖30g/L的溶液噴灑，使得濾紙足夠濕潤
[0030] 試驗組2:其處理步驟為：
[0031] 1)使用常規(guī)方法制作羅漢果組培苗，并取中間健壯部分，分切成帶腋芽單節(jié)莖段；
[0032] 2)用濃度為4%的肥皂水浸泡8min，撈起后使用無菌水沖洗一次；
[0033] 3)再用濃度為0.08%的檸檬酸溶液浸泡8min，撈起后使用無菌水沖洗一次；
[0034] 4)再用濃度55 %的酒精溶液浸泡18s，撈起后使用無菌水沖洗一次；
[0035] 5)再使用濃度為0.2 %的高猛酸鉀溶液浸泡4min，撈起后使用無菌水沖洗一次，得 到滅菌的羅漢果外植體；
[0036] 6)得到滅菌的羅漢果外植體使用紫外線照射10~20s;
[0037] 7 )得到的滅菌的羅漢果外植體用濾紙包裹，并對濾紙噴灑MS + BAO . 6mg/L+ ΙΑΑΟ. 2mg/L+蔗糖30g/L的溶液噴灑，使得濾紙足夠濕潤 [0038] 對照組：其處理步驟為：
[0039] 1)使用常規(guī)方法制作羅漢果組培苗，并取中間健壯部分，分切成帶腋芽單節(jié)莖段；
[0040] 2)使用無菌水進(jìn)行處理；
[0041] 檢測上述試驗的誘導(dǎo)率、污染率和褐化率，具體如下表：
[0042]
[0043]
[0044] 結(jié)果表明，使用本發(fā)明的方法處理的羅漢果外植體，其外植體的污染率降低到 15%以下，褐化率降低到5以下，誘導(dǎo)率在50%以上，該處理方法能夠保證后續(xù)的組織培養(yǎng) 的成活率提尚。
【具體實施方式】
[0045] 下面進(jìn)一步描述本發(fā)明的技術(shù)方案，但要求保護(hù)的范圍并不局限于所述。
[0046] 實施例一
[0047] 本發(fā)明提供的一種羅漢果外植體表面滅菌技術(shù)，包括以下步驟：
[0048] 1)使用常規(guī)方法制作羅漢果組培苗，并取中間健壯部分，分切成帶腋芽單節(jié)莖段；
[0049] 2)用濃度為3%的肥皂水浸泡5min，撈起后使用無菌水沖洗一次；
[0050] 3)再用濃度為0.05%的梓檬酸溶液浸泡5min，撈起后使用無菌水沖洗一次；
[00511 4)再用濃度50~60%的酒精溶液浸泡15s，撈起后使用無菌水沖洗一次；
[0052] 5)再使用濃度為0.1 %的高猛酸鉀溶液浸泡3min，撈起后使用無菌水沖洗一次，得 到滅菌的羅漢果外植體。
[0053] 6 )得到的滅菌的羅漢果外植體用濾紙包裹，并對濾紙噴灑MS + BAO . 6mg/L+ ΙΑΑ0.2mg/L+蔗糖30g/L的溶液噴灑，使得濾紙足夠濕潤。
[0054] 實施例二
[0055] 本發(fā)明提供的一種羅漢果外植體表面滅菌技術(shù)，包括以下步驟：
[0056] 1)使用常規(guī)方法制作羅漢果組培苗，并取中間健壯部分，分切成帶腋芽單節(jié)莖段；
[0057] 2)用濃度為5%的肥皂水浸泡lOmin，撈起后使用無菌水沖洗一次；
[0058] 3)再用濃度為0.1%的檸檬酸溶液浸泡lOmin，撈起后使用無菌水沖洗一次；
[0059] 4)再用濃度60 %的酒精溶液浸泡20s，撈起后使用無菌水沖洗一次；
[0060] 5)再使用濃度為0.3%的高錳酸鉀溶液浸泡5min，撈起后使用無菌水沖洗一次，得 到滅菌的羅漢果外植體。
[0061 ] 6 )得到的滅菌的羅漢果外植體用濾紙包裹，并對濾紙噴灑MS + BAO . 6mg/L+ ΙΑΑ0.2mg/L+蔗糖30g/L的溶液噴灑，使得濾紙足夠濕潤。
[0062] 實施例三
[0063] 本發(fā)明提供的一種羅漢果外植體表面滅菌技術(shù)，包括以下步驟：
[0064] 1)使用常規(guī)方法制作羅漢果組培苗，并取中間健壯部分，分切成帶腋芽單節(jié)莖段；
[0065] 2)用濃度為4%的肥皂水浸泡8min，撈起后使用無菌水沖洗一次；
[0066] 3)再用濃度為0.08%的檸檬酸溶液浸泡8min，撈起后使用無菌水沖洗一次；
[0067] 4)再用濃度55 %的酒精溶液浸泡18s，撈起后使用無菌水沖洗一次；
[0068] 5)再使用濃度為0.2 %的高猛酸鉀溶液浸泡4min，撈起后使用無菌水沖洗一次，得 到滅菌的羅漢果外植體；
[0069] 6)得到滅菌的羅漢果外植體使用紫外線照射10~20s;
[0070] 7 )得到的滅菌的羅漢果外植體用濾紙包裹，并對濾紙噴灑MS + BAO . 6mg/L+ ΙΑΑ0.2mg/L+蔗糖30g/L的溶液噴灑，使得濾紙足夠濕潤。
【主權(quán)項】
1. 一種羅漢果外植體表面滅菌技術(shù)，其特征在于包括以下步驟： 1) 使用常規(guī)方法制作羅漢果組培苗，并取中間健壯部分，分切成帶腋芽單節(jié)莖段； 2) 用濃度為3~5 %的肥皂水浸泡5~lOmin，撈起后使用無菌水沖洗一次； 3) 再用濃度為0.05~0.1 %的梓檬酸溶液浸泡5~lOmin，撈起后使用無菌水沖洗一次； 4) 再用濃度50~60 %的酒精溶液浸泡15~20s，撈起后使用無菌水沖洗一次； 5) 再使用濃度為0.1~0.3%的高錳酸鉀溶液浸泡3~5min，撈起后使用無菌水沖洗一 次，得到滅菌的羅漢果外植體。2. 如權(quán)利要求1所述的羅漢果外植體表面滅菌技術(shù)，其特征在于包括以下步驟： 1) 使用常規(guī)方法制作羅漢果組培苗，并取中間健壯部分，分切成帶腋芽單節(jié)莖段； 2) 用濃度為4 %的肥皂水浸泡8min，撈起后使用無菌水沖洗一次； 3) 再用濃度為0.08 %的檸檬酸溶液浸泡8min，撈起后使用無菌水沖洗一次； 4) 再用濃度55 %的酒精溶液浸泡18s，撈起后使用無菌水沖洗一次； 5) 再使用濃度為0.2 %的高錳酸鉀溶液浸泡4min，撈起后使用無菌水沖洗一次，得到滅 菌的羅漢果外植體。3. 如權(quán)利要求1或2所述的羅漢果外植體表面滅菌技術(shù)，其特征在于:得到滅菌的羅漢 果外植體使用紫外線照射10~20s。4. 如權(quán)利要求1或2所述的羅漢果外植體表面滅菌技術(shù)，其特征在于:得到的滅菌的羅 漢果外植體用濾紙包裹，并對濾紙噴灑MS+BA0 · 5~0 · 7mg/L+IAA0 · 1~0 · 2mg/L+鹿糖30g/L 的溶液噴灑，使得濾紙足夠濕潤。
【文檔編號】A01H4/00GK105993953SQ201610371100
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年5月27日
【發(fā)明人】張俊連, 羅小廷, 張俊蛟
【申請人】貴州德江易盛農(nóng)業(yè)科技發(fā)展有限公司