一種適合金花保健啤酒發(fā)酵用雙菌懸液制備工藝的制作方法
【專利摘要】一種適合金花保健啤酒發(fā)酵用雙菌懸液制備工藝，其步驟為：1）啤酒酵母的分離和純化；2）金花菌的分離和純化；3）適合雙菌發(fā)酵的金花菌株選擇；4）雙菌懸液的制備和保存；5）生產(chǎn)用雙菌懸液的制備和活化。本發(fā)明能在不影響傳統(tǒng)啤酒生產(chǎn)工藝情況下，10d就可以提供生產(chǎn)金花保健啤酒發(fā)酵用的雙菌懸液，在較好的保留啤酒風(fēng)味的情況下，增加金花保健功能，提高啤酒的品質(zhì)。
【專利說明】
一種適合金花保健啤酒發(fā)酵用雙菌懸液制備工藝
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及農(nóng)產(chǎn)品加工技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種適合金花保健啤酒發(fā)酵用雙菌懸液制備工藝，將啤酒制備工藝中啤酒酵母發(fā)酵改進(jìn)為啤酒酵母和金花菌的雙菌協(xié)同發(fā)酵，所述的啤酒酵母為實際啤酒生產(chǎn)線所用菌種，所述金花菌為冠突散囊菌，俗稱金花，是茯磚茶中獨特的一種優(yōu)勢菌。
【背景技術(shù)】
[0002]啤酒是一種大眾化飲料，有著極為廣闊的市場，隨著人們生活水平的提高和飲食結(jié)構(gòu)的變化，糖尿病、高血壓、肥胖癥等現(xiàn)代“富貴病”發(fā)病率不斷攀升，實驗證實茯磚茶中金花具有較強的調(diào)節(jié)糖類代謝、降脂、降壓等功效，對糖尿病、高血壓、肥胖癥等有較好的防治作用，作為一種新型的功能性啤酒，符合現(xiàn)代消費者的消費需求，具有潛在的經(jīng)濟效益和社會效益。
[0003]啤酒在加工過程中用酵母發(fā)酵是形成啤酒風(fēng)味的主要工藝，與益生菌金花協(xié)同發(fā)酵，改變啤酒的風(fēng)味和保健屬性，其技術(shù)研究尚只是停留在實驗室研究階段，具體對啤酒酵母和金花菌雙菌協(xié)同發(fā)酵研究較少，因而亟待研制一種適合啤酒酵母和金花菌雙菌協(xié)同發(fā)酵用菌種制備工藝，以滿足大眾對保健飲品的需求。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是:解決上述現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，而提供一種適合金花保健啤酒發(fā)酵用雙菌懸液制備工藝，能在不影響傳統(tǒng)啤酒生產(chǎn)工藝情況下，生產(chǎn)金花保健啤酒，改變啤酒風(fēng)味，增加保健功能。
[0005]本發(fā)明采用的技術(shù)方案是:一種適合金花保健啤酒發(fā)酵用雙菌懸液制備工藝，包括下述工藝步驟:
1)啤酒酵母的分離和純化；
2)金花菌的分離和純化；
3)適合雙菌發(fā)酵的金花菌株選擇；
4)雙菌懸液的制備和保存；
5)生產(chǎn)用雙菌懸液的制備和活化。
[0006]上述技術(shù)方案中，所述步驟I)啤酒酵母的分離和純化為:用添加10%麥芽汁的PDA瓊脂固體培養(yǎng)基平板;所述步驟2)金花菌的分離和純化為:用添加10%茯磚茶汁的TOA瓊脂固體培養(yǎng)基平板，對市場上常見茯磚茶樣本進(jìn)行平板梯度稀釋法分離純化金花菌，保存，建立金花菌種庫;所述步驟3)適合雙菌發(fā)酵的金花菌株選擇為:對用上述方式獲得的金花菌種庫中純金花分別與用添加10%麥芽汁的TOA瓊脂固體培養(yǎng)基平板獲得的啤酒酵母進(jìn)行共培養(yǎng)實驗，確定共生長性好的金花菌株;所述步驟4)雙菌懸液的制備和保存為:用添加10%麥芽汁、10%茯磚茶汁的TOA液體培養(yǎng)基，接種啤酒酵母和適合性好的金花菌、280C、10rpm震蕩培養(yǎng)10d，4°C保存?zhèn)溆?所述步驟5)生產(chǎn)用雙菌懸液的制備和活化為:將制得的雙菌懸液，生產(chǎn)用前280rpm震蕩20mins分散，濃度用添加10%麥芽汁、10%茯磚茶汁的PDA液體培養(yǎng)基調(diào)節(jié)控制OD值為1.0，28°C靜置培養(yǎng)2h活化后即可作為生產(chǎn)用菌種。
[0007]上述技術(shù)方案中，所述的PDA:Potato Dextrose Agar的簡稱。
[0008]PDA瓊脂固體培養(yǎng)基:將馬鈴薯洗凈去皮，稱取200g，切成小塊放入燒杯中，加適量蒸餾水，煮沸I小時，稍冷后用雙層紗布過濾，在濾液中加入15g瓊脂，加熱熔化，最后加入蔗糖20g，混勻，用量筒定容至100mU趁熱分裝在三角瓶中，在l.lkg/cm2(12rC)中保持20分鐘滅菌。
[0009]PDA液體培養(yǎng)基:上述培養(yǎng)基配制過程操作，但不添加瓊脂。
[0010]PDA瓊脂固體培養(yǎng)基平板:上述PDA瓊脂固體培養(yǎng)基滅菌結(jié)束后，冷卻至50 °C左右，在超凈工作臺上將培養(yǎng)基倒入事先已經(jīng)滅菌并干燥的培養(yǎng)皿中，待冷卻即為制得的PDA瓊脂固體培養(yǎng)基平板。
[0011 ] 10%麥芽汁的PDA瓊脂固體培養(yǎng)基平板:制法同TOA瓊脂固體培養(yǎng)基平板，制作過程中添加10%(體積比)的麥芽汁。
[0012]10%茯磚茶汁的TOA瓊脂固體培養(yǎng)基平板:制法同TOA瓊脂固體培養(yǎng)基平板，制作過程中添加10%(體積比)的茯磚茶汁。
[0013]添加10%麥芽汁、10%茯磚茶汁的TOA液體培養(yǎng)基:同PDA液體培養(yǎng)基制法，制作過程中同時各添加10%(體積比)的茯磚茶汁和麥芽汁。
[0014]平板梯度稀釋法為:將成品茯磚樣本用植物微型粉碎機將樣品粉碎，200目過篩、65°C干燥2小時后稱取Ig樣品，定容1mL，即配成I X KT1gAiL的茯磚樣本溶液，從上述溶液中取I mL定容10 mL配成I X KT1gAiL的茯磚樣本溶液，依次配制成濃度IX 10一3、I X 10一4、IX 10—58/1^的茯磚茶樣本溶液各10 mL備用。取I X 10—3、I X 10—4、I X 10—5g/mL的茯磚樣本溶液各0.5 mL，用涂布器涂布到冠狀散囊菌快速分離培養(yǎng)基平板上(配成10—^ΙΟ—^ΙΟ—3、10一4、10—5是指濃度，單位為g/mL)，超凈臺上吹干15分鐘左右，倒置平皿，28°C培養(yǎng)，3 — 4天后挑取優(yōu)勢菌一一金花同樣條件培養(yǎng)直至純化。
[0015]金花菌落指金花菌在10%茯磚茶汁的PDA瓊脂固體培養(yǎng)基平板上生長到一定時候形成的一個菌落集合體，菌落是指聚集在一起的微生物團(tuán)。
[0016]茯磚茶汁的具體制備方法為:按照Ig茯磚茶樣本比30mL蒸餾水的比例稱取20g茯磚茶，加入600mL蒸餾水，100°C水浴2小時，待稍冷卻后用量筒定容至600mL即為制備好的茯磚茶汁。
[0017]麥芽汁的具體制備方法為:按照Ig麥芽比30mL蒸餾水的比例稱取20g麥芽，加入600mL蒸餾水，100°C水浴2小時，待稍冷卻后用量筒定容至600mL即為制備好的麥芽汁。
[0018]生產(chǎn)金花保健啤酒發(fā)酵用雙菌懸液濃度控制OD值為1.0，用722型分光光度計測量其OD值獲得。
[0019]本發(fā)明提供了一種適合金花保健啤酒發(fā)酵用雙菌懸液制備工藝，能在不影響傳統(tǒng)啤酒生產(chǎn)工藝情況下，1d可以提供生產(chǎn)金花保健啤酒發(fā)酵用雙菌懸液，在較好的保留啤酒風(fēng)味的情況下，增加金花保健功能，提尚啤酒的品質(zhì)。
[0020]【附圖說明】:
圖1為本發(fā)明從全國各地茯磚茶分離純化的23株金花菌菌落照片(7d)。
[0021]圖2為本發(fā)明通過共培養(yǎng)篩選獲得的金花菌(G3)與啤酒酵母雙菌懸液照片(1d)。
[0022]圖3為本發(fā)明制備的雙菌懸液在實際生產(chǎn)線上生產(chǎn)的金花保健啤酒照片。
【具體實施方式】
[0023 ]本發(fā)明的適合金花保健啤酒發(fā)酵用雙菌懸液制備工藝，其步驟是:
1)啤酒酵母的分離和純化:
啤酒酵母從荷蘭七箭啤酒有限公司發(fā)酵罐中采集發(fā)酵液樣進(jìn)行分離;具體分離和純化過程為:將發(fā)酵罐中采取的發(fā)酵液，用平板梯度稀釋法在添加10%麥芽汁的PDA平板上28°C培養(yǎng)直至純化；
2)金花菌的分離和純化:
金花菌從全國各地茯磚樣本中分離，具體分離和純化過程為:將成品茯磚樣本粉碎，用平板梯度稀釋法在添加10%茯磚茶汁的I3DA平板上，28 °C培養(yǎng)直至純化，將分離的菌種保存，建立金花菌種庫；
3)適合雙菌發(fā)酵的金花菌株選擇:
從金花菌種庫中選擇純化的金花菌種，分別與上述I)中分離的啤酒酵母進(jìn)行共培養(yǎng)實驗，確定共生長性好的金花菌株；
4)雙菌懸液的制備和保存:
用添加10%麥芽汁、10%茯磚茶汁的PDA液體培養(yǎng)基，接種啤酒酵母和適合性好的金花菌(步驟3中篩選的金花菌)、28°C、100rpm震蕩培養(yǎng)10d，4°C保存?zhèn)溆茫?br> 5)生產(chǎn)用雙菌懸液的制備和活化:
生產(chǎn)用前280rpm震蕩20mins分散，獲得雙菌懸液，濃度用添加10%麥芽汁、10%茯磚茶汁的PDA液體培養(yǎng)基調(diào)節(jié)控制OD值為1.0，28°C靜置培養(yǎng)2h活化。
[0024]實施例:
I)啤酒酵母的分離和純化:
啤酒酵母從荷蘭七箭啤酒有限公司發(fā)酵罐中采集發(fā)酵液樣進(jìn)行分離，具體分離和純化過程為:將發(fā)酵罐中采取的發(fā)酵液，用平板梯度稀釋法在添加10%麥芽汁的PDA平板上28°C
培養(yǎng)直至純化。
[0025])金花菌的分離和純化:
將湖南久揚茶業(yè)有限公司生產(chǎn)的成品久揚茯磚茶編號G2、湖南益陽茶廠有限公司生產(chǎn)的湘益牌禮品茯磚茶編號G3、湖南益陽華茗茶廠生產(chǎn)的湘葉牌特制茯磚茶編號G4、湖南永泰福茶業(yè)有限公司生產(chǎn)的永泰福老茯茶編號G5、湖南臨湘茶廠有限公司生產(chǎn)的春意牌特制茯磚茶編號G6、湖南利源隆茶業(yè)有限公司生產(chǎn)的利源隆茯磚茶編號G7、湖南臨湘白石茶廠生產(chǎn)的白石加碘茯磚茶編號G8、湖南白沙溪茶廠有限公司生產(chǎn)的白沙溪茯茶編號G9、湖南省安化茶廠生產(chǎn)的安化茶廠特制茯磚編號G10、湖南黑美人茶業(yè)有限公司生產(chǎn)的黑美人茯磚茶編號G11、湖南冠隆譽黑茶發(fā)展有限公司生產(chǎn)的冠隆譽茯磚茶編號G12、陜西涇渭茶廠生產(chǎn)的涇渭茯磚編號G13、湖南岳陽市三湘茶廠生產(chǎn)的三湘四水牌茯磚茶編號G14、湖北趙李橋茶廠有限公司生產(chǎn)的川牌特制茯磚茶編號G15、貴州梵錦茶業(yè)有限公司生產(chǎn)的特制茯磚康茶編號G16、湖南臨湘永巨茶業(yè)有限公司生產(chǎn)的永巨貢磚編號G17、烏魯木齊?？挡枞~有限公司生產(chǎn)的艾米熱茯磚茶編號G18、廣西橫縣茶廠生產(chǎn)的橫縣老茯茶編號G19、江蘇宜興市西渚五圣茶廠生產(chǎn)的五圣牌茯磚茶編號G20、湖北咸寧市富華茶業(yè)有限公司生產(chǎn)的雙瀛牌茯磚茶編號G21、江蘇宜興市張渚茶前茶場生產(chǎn)的湘贏牌茯磚茶編號G22、浙江新昌縣江南誠茂磚茶有限公司生產(chǎn)的葉兒羌精制茯磚茶編號G23、浙江武義駱駝九龍磚茶有限公司生產(chǎn)的駱駝王子牌茯磚茶編號G24等23個茯磚樣本分別用植物微型粉碎機粉碎，200目過篩、65°C干燥2小時后稱取Ig樣品，定容10mL，配成10—\10—2、10—3、10—4、10—5各10mL，取10一3、10一4、10—5三個梯度各0.0.5mL涂布添加10%茶汁的TOA平板，超凈臺上吹干，28 °C培養(yǎng)3d，挑取金黃色優(yōu)勢菌落，畫線至添加10%茶汁的TOA平板上，同樣條件繼續(xù)培養(yǎng)直至純化，保存，建立金花菌種庫。
[0026]分離純化的23株金花菌落，經(jīng)初步性學(xué)鑒定分為五種類型形態(tài)，見附圖1。
[0027]3)適合雙菌發(fā)酵的金花菌株選擇:
從金華菌種庫中選擇純化的金花菌種，分別與上述I)中分離的啤酒酵母進(jìn)行共培養(yǎng)實驗，確定共生長性好的金花菌株，本實施例確定共生長性好的金花菌種為湖南益陽茶廠有限公司生產(chǎn)的湘益禮品茯磚茶編號G3。
[0028]4 )金花保健啤酒發(fā)酵用雙菌懸液的制備和保存:
用添加10%麥芽汁、10%茯磚茶汁的PDA液體培養(yǎng)基，接種啤酒酵母和適合性好的金花菌(篩選的金花菌為G3)、28°C、100rpm震蕩培養(yǎng)10d，4°C保存?zhèn)溆谩?br>[0029 ]金花保健啤酒發(fā)酵用雙菌懸液見附圖2。
[0030]5)生產(chǎn)用雙菌懸液的制備和活化:
生產(chǎn)用前，280rpm震蕩20mins分?jǐn)?shù)，獲得雙菌懸液，濃度用添加10%麥芽汁、10%茯磚茶汁的PDA液體培養(yǎng)基調(diào)節(jié)控制OD值為1.0，28°C靜置培養(yǎng)2h活化。
[0031]采用生產(chǎn)用雙菌懸液生產(chǎn)金花保健啤酒的驗證:
按照上述實施例中4)-5)步驟生產(chǎn)的雙菌懸液，作為接種發(fā)酵基質(zhì)，在荷蘭七箭啤酒有限公司實際生產(chǎn)線上代替原來啤酒酵母接種注篩選的金花菌為G3，其他工藝條件參數(shù)均不發(fā)生變化，獲得金花保健啤酒，質(zhì)量上乘，且增加了金花香味。
[0032]實際生產(chǎn)線上生產(chǎn)的金花保健啤酒見附圖3。
【主權(quán)項】
1.一種適合金花保健啤酒發(fā)酵用雙菌懸液制備工藝，其特征在于:包括下述工藝步驟: 1)啤酒酵母的分離和純化； 2)金花菌的分離和純化； 3)適合雙菌發(fā)酵的金花菌株選擇； 4)雙菌懸液的制備和保存； 5)生產(chǎn)用雙菌懸液的制備和活化。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種適合金花保健啤酒發(fā)酵用雙菌懸液制備工藝，其特征在于:所述步驟I)啤酒酵母的分離和純化為:用添加10%麥芽汁的PDA瓊脂固體培養(yǎng)基平板;所述步驟2)金花菌的分離和純化為:用添加10%茯磚茶汁的PDA瓊脂固體培養(yǎng)基平板，對市場上常見茯磚茶樣本進(jìn)行平板梯度稀釋法分離純化金花菌，保存，建立金花菌種庫;所述步驟3)適合雙菌發(fā)酵的金花菌株選擇為:對用上述方式獲得的金花菌種庫中純金花分別與用添加10%麥芽汁的PDA瓊脂固體培養(yǎng)基平板獲得的啤酒酵母進(jìn)行共培養(yǎng)實驗，確定共生長性好的金花菌株;所述步驟4)雙菌懸液的制備和保存為:用添加10%麥芽汁、10%茯磚茶汁的PDA液體培養(yǎng)基，接種啤酒酵母和適合性好的金花菌、28 °C、10rpm震蕩培養(yǎng)1d，4 °C保存?zhèn)溆?；所述步驟5)生產(chǎn)用雙菌懸液的制備和活化為:將制得的雙菌懸液，生產(chǎn)用前280rpm震蕩20mins分散，濃度用添加10%麥芽汁、10%茯磚茶汁的PDA液體培養(yǎng)基調(diào)節(jié)控制OD值為1.0,280C靜置培養(yǎng)2h活化后即可作為生產(chǎn)用菌種。
【文檔編號】C12N1/14GK106047735SQ201610391649
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年6月6日
【發(fā)明人】劉石泉, 龍立平, 胡治遠(yuǎn)
【申請人】湖南城市學(xué)院