血紅蛋白、血紅蛋白-結(jié)合珠蛋白復(fù)合物、轉(zhuǎn)鐵蛋白聯(lián)檢試劑盒的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實用新型屬于臨床體外診斷試劑技術(shù)領(lǐng)域，具體為一種血紅蛋白、血紅蛋白-結(jié)合珠蛋白復(fù)合物、轉(zhuǎn)鐵蛋白聯(lián)檢試劑盒，應(yīng)用免疫學(xué)原理、側(cè)向?qū)游黾夹g(shù)以及化學(xué)鄰甲苯胺顯色法，通過檢測人糞便中的血紅蛋白、血紅蛋白-結(jié)合珠蛋白復(fù)合物、轉(zhuǎn)鐵蛋白，發(fā)現(xiàn)下消化道出血癥狀，早期診斷直腸癌或結(jié)腸癌等下消化道腫瘤。
【背景技術(shù)】
[0002]便隱血在目前臨床上主要檢測方法有化學(xué)法和免疫學(xué)方法:化學(xué)法常用的有鄰甲苯胺法、還原酚酞法、聯(lián)苯胺法、匹拉米洞法、俞創(chuàng)木脂法等。其設(shè)計原理基本相同，都是基于血紅蛋白中的含鐵血黃素部分有催化過氧化物分解的作用，能催化試劑中的過氧化氫，分解釋放新生態(tài)氧，氧化上述色原物質(zhì)而呈色，顯色的深淺反應(yīng)了血紅蛋白的多少。然而在實際應(yīng)用中由于糞便成份差別很大，各實驗室具體操作細(xì)節(jié)不同，用化學(xué)法檢測結(jié)果存在很大差異，并且缺乏特異性和準(zhǔn)確性。外源性食物中如果含有血紅蛋白、肌紅蛋白，其血紅素的作用均可以使實驗呈陽性，大量生食蔬菜中含有活性的植物過氧化物也可催化過氧化物分解，出現(xiàn)假陽性反應(yīng)。血液在腸道中停留過久，血紅蛋白變性，則會出現(xiàn)與病情不符的陰性結(jié)果。此外，如果患者服用大量的維生素C或其他具有還原性的藥物，在實驗中可將過氧化物還原，從而不能氧化色原物質(zhì)，也可使實驗出現(xiàn)假陰性。因此，化學(xué)法易受干擾因素多、假陽性率高、冰醋酸配成的試劑易形成晶體等條件限制，未能得到廣泛使用，亟需一種特異性好、靈敏度高、檢測快速、簡單的隱血檢測方法。
[0003]免疫學(xué)方法是目前檢測隱血常用的方法，主要包括免疫單抗法、酶聯(lián)免疫吸附法、免疫斑點法、膠乳免疫透射比濁法、放射免疫擴(kuò)散法、反向間接血凝法、膠體金標(biāo)記夾心免疫檢驗法等。免疫法檢測的指標(biāo)一般是人血紅蛋白或人紅細(xì)胞基質(zhì)，所用抗體是抗人血紅蛋白抗體或抗人紅細(xì)胞基質(zhì)抗體，檢測人血紅蛋白可檢出消化道任何部位的出血，檢測人紅細(xì)胞基質(zhì)只能檢出下消化道出血，但是血紅蛋白由于受到腸道內(nèi)細(xì)菌的作用及大腸粘膜產(chǎn)生的粘液成分影響而變性，易出現(xiàn)假陰性反應(yīng)。
[0004]臨床上往往需要兩種或以上的方法聯(lián)合檢測，目前市場上已有血紅蛋白-轉(zhuǎn)鐵蛋白聯(lián)檢試劑盒、血紅蛋白-Hb-Hp復(fù)合物聯(lián)檢試劑盒等。如中國發(fā)明專利申請公布號為CN101965515A (公布日為2011年2月2日)提供了一種用于檢測潛血的方法和裝置，包括檢測在GI樣品中的轉(zhuǎn)鐵蛋白和血紅蛋白，以及將檢測到的轉(zhuǎn)鐵蛋白和血紅蛋白的量與轉(zhuǎn)鐵蛋白和血紅蛋白的各自的預(yù)定值相比較，由此去頂來自GI的出血，并提供使用橫向流動三明治免疫測定裝置來實現(xiàn)對轉(zhuǎn)鐵蛋白和血紅蛋白的檢測，該技術(shù)方案缺少血紅蛋白-結(jié)合珠蛋白復(fù)合物檢測，對直腸癌或結(jié)腸癌的陽性符合率較低。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本實用新型旨在提供一種血紅蛋白、血紅蛋白-結(jié)合珠蛋白復(fù)合物、轉(zhuǎn)鐵蛋白聯(lián)檢試劑盒，由一根同時檢測血紅蛋白、血紅蛋白-結(jié)合珠蛋白復(fù)合物、轉(zhuǎn)鐵蛋白的試紙條，化學(xué)鄰甲苯胺試紙，上卡殼和下卡殼組成的試劑盒，該試劑盒的結(jié)構(gòu)簡單，檢測快速高效，具有很好靈敏度和特異性，在臨床上對直腸癌或結(jié)腸癌等下消化道出血癥狀的腫瘤早期診斷和鑒別有較好的參考價值，對消化道出血性疾病的陽性檢出率有顯著提高。
[0006]針對以上根本技術(shù)問題，本實用新型相應(yīng)的解決技術(shù)方案是:
[0007]一種血紅蛋白、血紅蛋白-結(jié)合珠蛋白復(fù)合物、轉(zhuǎn)鐵蛋白聯(lián)檢試劑盒，包括上卡殼、下卡殼、置于上卡殼和下卡殼之間的免疫試紙條、檢測試紙，上卡殼設(shè)有加樣孔、觀察窗口、ID記錄處和化學(xué)試紙觀察窗口，下卡殼開有與免疫試紙條位置對應(yīng)的第一凹槽和與化學(xué)法試紙位置對應(yīng)的第二凹槽，其特征在于免疫試紙條包括吸水紙、硝酸纖維素膜、樣品墊和PVC底板，樣品墊邊緣處黏貼在硝酸纖維素膜上，吸水紙邊緣處黏貼在硝酸纖維素膜上，硝酸纖維素膜固定在PVC底板上，含有血紅蛋白單抗、血紅蛋白-結(jié)合珠蛋白復(fù)合物單抗和轉(zhuǎn)鐵蛋白單抗的金標(biāo)復(fù)合物劃在硝酸纖維素膜上，硝酸纖維素膜上平行設(shè)置有3條檢測線、質(zhì)控線以及靠近硝酸纖維素膜底端的金標(biāo)復(fù)合物劃膜線，質(zhì)控線處包被有羊抗鼠IgG，3條檢測線是由氣動微定量噴頭將標(biāo)記完成的膠體金復(fù)合物噴線包被于硝酸纖維素膜上。
[0008]第一凹槽和與化學(xué)法試紙位置對應(yīng)的第二凹槽中間設(shè)有凸起的隔斷，檢測試紙上樣段與樣品墊的底部由隔斷分隔開，加樣孔位于隔斷處正上方。
[0009]加樣孔下方為化學(xué)法試紙和樣品墊，加樣孔為圓形或橢圓形并同時外漏出化學(xué)法試紙和樣品墊，所述的硝酸纖維素膜對應(yīng)觀察窗口放置。
[0010]所述上卡殼上設(shè)有二維碼。
[0011]所述PVC底板是具有粘性膠質(zhì)層的PVC底板。
[0012]所述樣品墊是厚度為355.6-508.0um的奧斯龍8964型玻璃纖維。
[0013]使用該聯(lián)檢試劑盒的檢測時，在圓形或者橢圓形的加樣孔中滴加3-4滴由樣本采集器處理好的樣品液，5到8分鐘判讀免疫試紙條；同時，在化學(xué)試紙觀察窗口滴加10%的過氧化氫溶液，觀察顏色變化，最后結(jié)合兩種檢測方法的結(jié)果判定最終檢測結(jié)果:
[0014]全陽性:對于免疫學(xué)方法，在長條形觀察窗口中，均在檢測線和質(zhì)控線位置出現(xiàn)紫色紅色帶。表示樣品中存在血紅蛋白、血紅蛋白-結(jié)合珠蛋白復(fù)合物、轉(zhuǎn)鐵蛋白。對于化學(xué)方法，出現(xiàn)藍(lán)色反應(yīng)，表明結(jié)果呈陽性；
[0015]全陰性:對于免疫學(xué)方法，在長條形觀察窗口中，在質(zhì)控線位置出現(xiàn)紫紅色帶，而在檢測線位置均未出現(xiàn)紫紅色帶，表示樣品中不存在血紅蛋白、血紅蛋白-結(jié)合珠蛋白復(fù)合物、轉(zhuǎn)鐵蛋白。對于化學(xué)方法，不出現(xiàn)藍(lán)色反應(yīng)，表明結(jié)果呈陰性；
[0016]相比現(xiàn)有技術(shù)，本實用新型提供的聯(lián)檢試劑盒及其制備方法，有益效果在于:
[0017](I)本實用新型是血紅蛋白、血紅蛋白-結(jié)合珠蛋白復(fù)合物、轉(zhuǎn)鐵蛋白聯(lián)檢試劑盒，采用免疫層析膠體金技術(shù)結(jié)合化學(xué)顯色方法，快速、簡便同時檢測大便中的血紅蛋白、血紅蛋白-結(jié)合珠蛋白復(fù)合物、轉(zhuǎn)鐵蛋白，可以消除現(xiàn)有技術(shù)的弊端，準(zhǔn)確發(fā)現(xiàn)消化道癌變引起的少量出血，提高早期直腸癌或結(jié)腸癌診斷準(zhǔn)確率，也可以為早期診斷此病提供快速、簡便的手段和藥物治療時的監(jiān)測。
[0018](2)本實用新型試劑盒上使用ID和二維碼，一方面，ID處可以手工填寫樣本信息，避免檢測結(jié)果的混淆。另一方面，二維碼可以高密度編碼，信息容量大，可以存入大量的零件信息。編碼范圍廣，可以存入文字、圖片、聲音等信息。容錯能力強(qiáng)，具有糾錯能力，表面受到油污、損耗等照樣可以得到識讀。譯碼可靠性高，誤碼率不超過千萬分之一。還有成本低，易制作，持久耐用等優(yōu)點，二維碼可以選擇性的根據(jù)條件進(jìn)行檢測結(jié)果錄入，對患者的治愈和康復(fù)過程有一個很好的監(jiān)測，結(jié)果查詢更加方便，醫(yī)生統(tǒng)籌治療方案也更加得心應(yīng)手。甚至在病理方面也具有統(tǒng)計學(xué)上的意義。
[0019]本實用新型申請的聯(lián)檢試劑盒特異性強(qiáng)，靈敏度高，易儲存，無須專門技術(shù)人員操作，不需任何儀器設(shè)備，而且結(jié)果易讀。對直腸癌或結(jié)腸癌等下消化道出血癥狀的腫瘤早期診斷和鑒別有較好的參考價值，對消化道出血性疾病的陽性檢出率效果更佳。
【附圖說明】
[0020]附圖1是本試劑盒的立體模型示意圖。
[0021]附圖2是本試劑盒的拆分結(jié)構(gòu)示意圖。
[0022]圖中，1.上卡殼，2.下卡殼，3.加樣孔，4.觀察窗口，5.第一凹槽，6.試紙條，17.化學(xué)試紙觀察窗口，18.1D記錄，19.二維碼，20.化學(xué)試紙，21.第二凹槽，22.隔斷。
[0023]附圖3是免疫試紙條的結(jié)構(gòu)示意圖。
[0024]附圖4是免疫試紙條的結(jié)構(gòu)示意圖。