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技術(shù)特征:

1.一種用于控制植物的昆蟲侵?jǐn)_的方法,包括用dsRNA接觸侵?jǐn)_植物的昆蟲,其中所述dsRNA包括18個(gè)或更多個(gè)連續(xù)核苷酸的至少一個(gè)片斷,所述片斷的序列與所述昆蟲的靶基因的片段具有約95%到約100%的互補(bǔ)性,和其中所述靶基因的DNA序列選自SEQ ID NOs:1-12和43-44。

2.權(quán)利要求1的方法,其中所述昆蟲選自夜蛾屬、草盲蝽屬、美洲蝽屬和菜蛾屬。

3.權(quán)利要求1的方法,其中:

(a)所述昆蟲是草地夜蛾(草地粘蟲)和所述靶基因包含選自SEQ ID NOs:1-3的DNA序列;

(b)所述昆蟲是豆莢草盲蝽(西部無澤盲蝽)和所述靶基因包含選自SEQ ID NOs:4-7、43和44的DNA序列;

(c)所述昆蟲是Euschistus heros(新熱帶區(qū)褐臭蝽)和所述靶基因包含選自SEQ ID NOs:8-9的DNA序列;或

(d)所述昆蟲是小菜蛾(菜蛾)和所述靶基因包含選自SEQ ID NOs:10-12的DNA序列。

4.權(quán)利要求1的方法,其中:

(a)所述昆蟲是草地夜蛾(草地粘蟲)和所述dsRNA包含選自SEQ ID NOs:17-19的序列;

(b)所述昆蟲是豆莢草盲蝽(西部無澤盲蝽)和所述dsRNA包含選自SEQ ID NOs:14-16、22、26、45和46的序列;

(c)所述昆蟲是Euschistus heros(新熱帶區(qū)褐臭蝽)和所述dsRNA包含選自SEQ ID NOs:23-25的序列;或

(d)所述昆蟲是小菜蛾(菜蛾)和所述dsRNA包含選自SEQ ID NOs:13、20-21和28-29的序列。

5.權(quán)利要求1的方法,其中所述至少一個(gè)片斷是多個(gè)片斷。

6.權(quán)利要求1的方法,其中所述dsRNA是(a)平端的或(b)在至少一端具有懸垂。

7.權(quán)利要求1的方法,其中所述dsRNA是(a)化學(xué)合成的或(b)通過在微生物中表達(dá)、通過在植物細(xì)胞中表達(dá)、或通過微生物發(fā)酵來制備。

8.權(quán)利要求1的方法,其中所述dsRNA是化學(xué)修飾的。

9.權(quán)利要求1的方法,其中所述接觸包括向所述昆蟲表面或被所述昆蟲侵?jǐn)_的所述植物表面施用包含所述dsRNA的組合物。

10.權(quán)利要求9的方法,其中所述組合物包含固體、液體、粉末、懸浮液、乳劑、噴霧、包封劑、微珠、載體微粒、薄膜、基質(zhì)或種子處理。

11.權(quán)利要求1的方法,其中所述接觸包括在組合物中提供所述dsRNA,所述組合物進(jìn)一步包含一種或多種選自載體試劑、表面活性劑、有機(jī)硅酮化合物、多核苷酸除草劑分子、非多核苷酸除草劑分子、非多核苷酸殺蟲劑、安全劑、誘蟲劑和昆蟲生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的組分。

12.權(quán)利要求1的方法,其中所述接觸包括在組合物中提供所述dsRNA,所述組合物進(jìn)一步包含至少一種選自馬鈴薯糖蛋白、植物血凝素、植物蛻皮甾體、蘇蕓金桿菌殺蟲蛋白、致病桿菌屬殺蟲蛋白、發(fā)光桿菌屬殺蟲蛋白、側(cè)孢性桿菌殺蟲蛋白和球形芽孢桿菌殺蟲蛋白的殺蟲劑。

13.權(quán)利要求1的方法,其中所述接觸包括在被所述昆蟲攝取的組合物中提供所述dsRNA。

14.權(quán)利要求13的方法,其中所述被攝取的組合物進(jìn)一步包含一種或多種選自載體試劑、表面活性劑、有機(jī)硅酮化合物、多核苷酸除草劑分子、非多核苷酸除草劑分子、非多核苷酸殺蟲劑、安全劑、誘蟲劑和昆蟲生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的組分。

15.權(quán)利要求13的方法,其中所述被攝取的組合物進(jìn)一步包含至少一種選自馬鈴薯糖蛋白、植物血凝素、植物蛻皮甾體、蘇蕓金桿菌殺蟲蛋白、致病桿菌屬殺蟲蛋白、發(fā)光桿菌屬殺蟲蛋白、側(cè)孢性桿菌殺蟲蛋白和球形芽孢桿菌殺蟲蛋白的殺蟲劑。

16.一種在昆蟲中引起死亡或發(fā)育障礙的方法,包括在昆蟲的飲食中提供至少一種重組RNA,其包含至少一個(gè)與所述昆蟲的靶基因序列的片段基本上同一或基本上互補(bǔ)的沉默元件,其中所述靶基因序列選自SEQ ID NOs:1-12和43-44,和其中通過所述昆蟲攝取所述重組RNA導(dǎo)致所述昆蟲的死亡或發(fā)育障礙。

17.權(quán)利要求16的方法,其中所述重組RNA包含至少一條其序列與選自SEQ ID NOs:13-26、28-29、30-42、45和46的序列具有約95%到約100%同一性或互補(bǔ)性的RNA鏈。

18.權(quán)利要求16的方法,其中:

(a)所述昆蟲是草地夜蛾(草地粘蟲)和所述靶基因包含選自SEQ ID NOs:1-3的DNA序列;

(b)所述昆蟲是豆莢草盲蝽(西部無澤盲蝽)和所述靶基因包含選自SEQ ID NOs:4-7、43和44的DNA序列;

(c)所述昆蟲是Euschistus heros(新熱帶區(qū)褐臭蝽)和所述靶基因包含選自SEQ ID NOs:8-9的DNA序列;或

(d)所述昆蟲是小菜蛾(菜蛾)和所述靶基因包含選自SEQ ID NOs:10-12的DNA序列。

19.權(quán)利要求16的方法,其中:

(a)所述昆蟲是草地夜蛾(草地粘蟲)和所述沉默元件包含選自SEQ ID NOs:17-19的序列;

(b)所述昆蟲是豆莢草盲蝽(西部無澤盲蝽)和所述沉默元件包含選自SEQ ID NOs:14-16、22、26、45和46的序列;

(c)所述昆蟲是Euschistus heros(新熱帶區(qū)褐臭蝽)和所述沉默元件包含選自SEQ ID NOs:23-25的序列;或

(d)所述昆蟲是小菜蛾(菜蛾)和所述沉默元件包含選自SEQ ID NOs:13、20-21和28-29的序列。

20.權(quán)利要求16的方法,其中所述重組RNA是dsRNA。

21.權(quán)利要求16的方法,其中所述重組RNA是(a)平端的dsRNA或(b)在至少一端具有懸垂的dsRNA。

22.權(quán)利要求16的方法,其中所述重組RNA以微生物或植物細(xì)胞或微生物發(fā)酵產(chǎn)品提供。

23.權(quán)利要求16的方法,其中所述重組RNA是化學(xué)合成的。

24.權(quán)利要求16的方法,其中所述昆蟲處于幼蟲或蛹階段。

25.權(quán)利要求16的方法,其中所述昆蟲是成蟲。

26.權(quán)利要求20的方法,其中所述dsRNA包含至少一條其序列與選自SEQ ID NOs:13-26、28-29、30-42、45和46的序列具有約95%到約100%同一性或互補(bǔ)性的RNA鏈。

27.一種包含殺蟲有效量的重組RNA分子的殺蟲組合物,其中所述重組RNA分子包括18個(gè)或更多個(gè)連續(xù)核苷酸的至少一個(gè)片斷,所述片斷的序列與侵?jǐn)_植物的昆蟲的靶基因的片段具有約95%到約100%的互補(bǔ)性,和其中所述靶基因的DNA序列選自SEQ ID NOs:1-12和43-44。

28.權(quán)利要求27的殺蟲組合物,其中所述重組RNA分子包含至少一條其序列與選自SEQ ID NOs:13-26、28-29、30-42、45和46的序列具有約95%到約100%同一性或互補(bǔ)性的RNA鏈。

29.權(quán)利要求27的殺蟲組合物,其中所述重組RNA分子是包含具有選自SEQ ID NOs:13-26、28-29、30-42、45和46的序列的RNA鏈的dsRNA。

30.權(quán)利要求29的殺蟲組合物,其中所述dsRNA的長(zhǎng)度為至少50個(gè)堿基對(duì)。

31.權(quán)利要求27的殺蟲組合物,其中:

(a)所述昆蟲是草地夜蛾(草地粘蟲)和所述靶基因包含選自SEQ ID NOs:1-3的DNA序列;

(b)所述昆蟲是豆莢草盲蝽(西部無澤盲蝽)和所述靶基因包含選自SEQ ID NOs:4-7、43和44的DNA序列;

(c)所述昆蟲是Euschistus heros(新熱帶區(qū)褐臭蝽)和所述靶基因包含選自SEQ ID NOs:8-9的DNA序列;或

(d)所述昆蟲是小菜蛾(菜蛾)和所述靶基因包含選自SEQ ID NOs:10-12的DNA序列。

32.權(quán)利要求27的殺蟲組合物,其中:

(a)所述昆蟲是草地夜蛾(草地粘蟲)和所述重組RNA分子包括至少一條RNA鏈,所述RNA鏈的序列與選自SEQ ID NOs:17-19的序列具有約95%到約100%同一性或互補(bǔ)性;

(b)所述昆蟲是豆莢草盲蝽(西部無澤盲蝽)和所述重組RNA分子包括至少一條RNA鏈,所述RNA鏈的序列與選自SEQ ID NOs:14-16、22、26、45和46的序列具有約95%到約100%同一性或互補(bǔ)性;

(c)所述昆蟲是Euschistus heros(新熱帶區(qū)褐臭蝽)和所述重組RNA分子包括至少一條RNA鏈,所述RNA鏈的序列與選自SEQ ID NOs:23-25的序列具有約95%到約100%同一性或互補(bǔ)性;或

(d)所述昆蟲是小菜蛾(菜蛾)和所述重組RNA分子包括至少一條RNA鏈,所述RNA鏈的序列與選自SEQ ID NOs:13、20-21和28-29的序列具有約95%到約100%同一性或互補(bǔ)性。

33.權(quán)利要求27的殺蟲組合物,其中:

(a)所述昆蟲是草地夜蛾(草地粘蟲)和所述重組RNA分子是包含具有選自SEQ ID NOs:17-19的序列的RNA鏈的dsRNA;

(b)所述昆蟲是豆莢草盲蝽(西部無澤盲蝽)和重組RNA分子是包括具有選自SEQ ID NOs:14-16、22、26、45和46的序列的RNA鏈的dsRNA;

(c)所述昆蟲是Euschistus heros(新熱帶區(qū)褐臭蝽)和重組RNA分子是包括具有選自SEQ ID NOs:23-25的序列的RNA鏈的dsRNA;或

(d)所述昆蟲是小菜蛾(菜蛾)和重組RNA分子是包括具有選自SEQ ID NOs:13、20-21和28-29的序列的RNA鏈的dsRNA。

34.權(quán)利要求27的殺蟲組合物,進(jìn)一步包含一種或多種選自載體試劑、表面活性劑、有機(jī)硅酮化合物、多核苷酸除草劑分子、非多核苷酸除草劑分子、非多核苷酸殺蟲劑、安全劑、誘蟲劑和昆蟲生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的組分。

35.權(quán)利要求27的殺蟲組合物,進(jìn)一步包含至少一種選自馬鈴薯糖蛋白、植物血凝素、植物蛻皮甾體、蘇蕓金桿菌殺蟲蛋白、致病桿菌屬殺蟲蛋白、發(fā)光桿菌屬殺蟲蛋白、側(cè)孢性桿菌殺蟲蛋白和球形芽孢桿菌殺蟲蛋白的殺蟲劑。

36.權(quán)利要求27的殺蟲組合物,其中所述組合物為選自固體、液體、粉末、懸浮液、乳劑、噴霧、包封劑、微珠、載體微粒、薄膜、基質(zhì)或種子處理的形式。

37.用權(quán)利要求27的殺蟲組合物處理的植物或所述植物的種子,其中所述植物對(duì)所述昆蟲表現(xiàn)出改進(jìn)的抗性。

38.一種提供對(duì)昆蟲抗性改進(jìn)的植物的方法,包括在植物中表達(dá)含有編碼RNA的DNA的重組DNA構(gòu)建體,所述RNA包括至少一個(gè)與所述昆蟲的靶基因序列的片段基本上同一或基本上互補(bǔ)的沉默元件,其中所述靶基因序列選自SEQ ID NOs:1-12和43-44,和其中通過所述昆蟲攝取所述RNA導(dǎo)致所述昆蟲的死亡或發(fā)育障礙。

39.權(quán)利要求38的方法,其中所述沉默元件的序列與選自SEQ ID NOs:13-26、28-29、30-42、45和46的序列具有約95%到約100%同一性或互補(bǔ)性。

40.權(quán)利要求38的方法,其中所述重組DNA構(gòu)建體進(jìn)一步包含與編碼包括至少一個(gè)沉默元件的RNA的所述DNA可操作地連接的異源啟動(dòng)子,其中所述異源啟動(dòng)子在植物細(xì)胞中具有功能。

41.權(quán)利要求38的方法,其中所述表達(dá)借助于轉(zhuǎn)基因表達(dá)或瞬時(shí)表達(dá)。

42.權(quán)利要求38的方法,進(jìn)一步包含在所述植物中表達(dá)至少一種選自馬鈴薯糖蛋白、植物血凝素、植物蛻皮甾體、蘇蕓金桿菌殺蟲蛋白、致病桿菌屬殺蟲蛋白、發(fā)光桿菌屬殺蟲蛋白、側(cè)孢性桿菌殺蟲蛋白和球形芽孢桿菌殺蟲蛋白的殺蟲劑。

43.由權(quán)利要求38的方法提供的對(duì)昆蟲的抗性改進(jìn)的植物。

44.權(quán)利要求43的植物的果實(shí)、種子或可繁殖部分。

45.一種重組DNA構(gòu)建體,包含與編碼RNA轉(zhuǎn)錄物的DNA可操作地連接的異源啟動(dòng)子,所述RNA轉(zhuǎn)錄物包含與選自SEQ ID NOs:13-26、28-29、30-42、45和46的序列具有約95%到約100%同一性或互補(bǔ)性的序列。

46.權(quán)利要求45的重組DNA構(gòu)建體,其中所述異源啟動(dòng)子對(duì)于在(a)細(xì)菌中表達(dá)所述RNA轉(zhuǎn)錄物具有功能。

47.權(quán)利要求46的重組DNA構(gòu)建體,其中所述細(xì)菌選自大腸桿菌、桿菌屬、假單胞細(xì)菌屬、致病桿菌屬或發(fā)光桿菌屬。

48.權(quán)利要求45的重組DNA構(gòu)建體,其中所述異源啟動(dòng)子在植物細(xì)胞中具有功能。

49.一種重組載體,包含權(quán)利要求45的重組DNA構(gòu)建體。

50.權(quán)利要求49的重組載體,其中所述重組載體是重組植物病毒載體或重組桿狀病毒載體。

51.一種植物染色體或質(zhì)體,包含權(quán)利要求45的重組DNA構(gòu)建體。

52.一種轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞,在其基因組中具有權(quán)利要求45的重組DNA構(gòu)建體。

53.一種轉(zhuǎn)基因植物,包含權(quán)利要求52的轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞。

54.一種由權(quán)利要求53的轉(zhuǎn)基因植物制備的商品。

55.權(quán)利要求53的轉(zhuǎn)基因植物的轉(zhuǎn)基因后代種子或可繁殖植物部分。

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