1.一種抗大腸桿菌F4ac感染的新品系豬的培育方法,其特征在于包括以下步驟:
第一階段:
以抗大腸桿菌F4ac感染的優(yōu)秀個體作為母本,以外來瘦肉型品種新美系杜洛克公豬中來源于不同家系的優(yōu)秀個體作為父本進(jìn)行雜交,在所產(chǎn)后代中選留母豬,組成第1世代母豬核心群;
第二階段:
第1世代母豬產(chǎn)生的豬卵母細(xì)胞去核;使所述卵母細(xì)胞與供體豬成纖維細(xì)胞融合,所述成纖維細(xì)胞的基因組包含至少一個抗大腸桿菌F4ac感染等位基因;激活所述卵母細(xì)胞以產(chǎn)生胚胎;
第三階段:
以胚胎中的母豬核心群為母本、抗大腸桿菌F4ac感染的公豬為父本進(jìn)行級進(jìn)雜交,在所生后代中用分子標(biāo)記和綜合選擇指數(shù)方法選留母豬,組成第2世代母豬核心群,其含有75%的抗大腸桿菌F4ac感染的豬血統(tǒng),25%的杜洛克豬血統(tǒng);
以第1世代母豬核心群為母本、新美系杜洛克公豬為父本進(jìn)行級進(jìn)雜交,杜洛克公豬來源于不同的家系,在所生后代中用分子標(biāo)記和綜合選擇指數(shù)方法選留母豬,組成第3世代母豬核心群,其含有75%的杜洛克豬血統(tǒng),25%的抗大腸桿菌F4ac感染的豬血統(tǒng);
第四階段:
以第2世代母豬核心群為母本,再以抗大腸桿菌F4ac感染的公豬為父本進(jìn)行級進(jìn)雜交,在所生后代中用分子標(biāo)記和綜合選擇指數(shù)方法選留公豬和母豬,組成第4世代豬核心群,其含有87.5%的抗大腸桿菌F4ac感染豬的血統(tǒng),12.5%的杜洛克豬血統(tǒng);
以第3世代母豬為母本,再以新美系杜洛克豬公豬為父本進(jìn)行級進(jìn)雜交,杜洛克公豬來源于不同的家系,在所生后代中用分子標(biāo)記和綜合選擇指數(shù)方法選留公豬和母豬,組成第5世代豬核心群,其含有87.5%的杜洛克豬血統(tǒng),12.5%的抗大腸桿菌F4ac感染豬的豬血統(tǒng);
第五階段:
分別以第4世代豬核心群中的公、母豬交配,以第5世代豬核心群心群中的公、母豬交配,從第4世代開始分別采用群體閉鎖繁殖和選育,進(jìn)行2~3個世代的橫交,在橫交各代豬中用分子標(biāo)記和綜合選擇指數(shù)方法選留公豬和母豬,得到橫交各代豬核心群。同一世代公豬與母豬交配,每個世代選留母豬和公豬,進(jìn)行2~3個世代的橫交后,得到抗大腸桿菌F4ac感染的新品系豬。
2.如權(quán)利要求1所述的抗大腸桿菌F4ac感染的新品系豬的培育方法,其特征在于,所述第二階段的重構(gòu)胚胎具體過程為:將成熟的卵母細(xì)胞置于顯微操作盤工作滴中,隨后將固定針固定住卵母細(xì)胞,將注射針針口正對極體且位于透明帶間隙內(nèi),緩緩吸取1/5-1/4的細(xì)胞質(zhì)并同時吸走極體,去除卵母細(xì)胞的細(xì)胞核,然后選取中等大小、活力較好的細(xì)胞注入卵母細(xì)胞卵周隙,最后采用電融合的方法形成重構(gòu)胚胎,融合電擊參數(shù)為1.3kv/mm、30us、2次脈沖,30min后觀察融合率,未融合的進(jìn)行二次融合,將融合后的卵母細(xì)胞放入38℃、5%CO2中培養(yǎng),48h后觀察卵裂率,6d后觀察囊胚發(fā)育情況。
3.如權(quán)利要求1所述的抗大腸桿菌F4ac感染的新品系豬的培育方法,其特征在于,所述第二階段后還包括胚胎移植過程,具體為:當(dāng)重組胚胎體發(fā)育至2~4細(xì)胞期后,挑選形態(tài)和發(fā)育較好的胚胎進(jìn)行移植,每頭受體移植150~250枚胚胎,共移植3~10頭母豬,胚胎移植后進(jìn)行B超妊娠檢測。
4.如權(quán)利要求1所述的抗大腸桿菌F4ac感染的新品系豬的培育方法,其特征在于,所述第五階段后還包括轉(zhuǎn)基因豬的鑒定的過程:小豬出生后采取耳朵與尾部組織提取基因組DNA,以此為模板進(jìn)行PCR、Real-time PCR和染色體步移方法來鑒定其陽性。
5.如權(quán)利要求2所述的抗大腸桿菌F4ac感染的新品系豬的培育方法,其特征在于,第一次選留在28日齡斷奶時進(jìn)行,且選擇被毛黑色,體重大于4kg,乳頭數(shù)7對及以上,體形勻稱,體質(zhì)好的母豬。
6.如權(quán)利要求3所述的抗大腸桿菌F4ac感染的新品系豬的培育方法,其特征在于,第二次選留時淘汰生長速度慢,體質(zhì)差的豬。
7.如權(quán)利要求4所述的抗大腸桿菌F4ac感染的新品系豬的培育方法,其特征在于,第三次選留時測定6月齡體重、背膘厚、計(jì)算斷奶后至90kg體重階段的日增重,料肉比,選擇日增重500g以上、料肉比小于3.2∶1的母豬留種。
8.如權(quán)利要求4所述的抗大腸桿菌F4ac感染的新品系豬的培育方法,其特征在于,第三次選留時選擇90kg時活體背膘厚20mm以下的母豬留種。
9.如權(quán)利要求4所述的抗大腸桿菌F4ac感染的新品系豬的培育方法,其特征在于,第三次選留時選擇眼肌面積大于25cm2的母豬留種。
10.如權(quán)利要求1所述的抗大腸桿菌F4ac感染的新品系豬的培育方法,其特征在于:豬種選自華南、華中、華北、江海、西南或高原型地方豬種中的任意一種。