1.一種基于改良培養(yǎng)基的五針白皮松組培快繁方法,其過程為:
步驟1,種子的滅菌消毒
將五針白皮松種子洗凈后,采用以下任意一種方法滅菌消毒:(1)先用75%的酒精消毒1min、無菌水沖洗兩次,再用2%次氯酸鈉溶液消毒15min、無菌水沖洗5次,吸干水分后備用;(2)先用酒精消毒1min、無菌水沖洗兩次,再用0.1%升汞溶液消毒10min、無菌水沖洗5次,吸干水分后備用;
步驟2,種胚萌發(fā)誘導(dǎo)培養(yǎng)獲取組培苗
(1)獲取種胚:將所述步驟1中滅菌消毒后的種子在超凈臺(tái)上,在無菌條件下吸干水分后剝種殼,獲取種胚;
(2)誘導(dǎo)培養(yǎng)種胚:將處理后的種胚接種到1/3GD改良誘導(dǎo)培養(yǎng)基中,在24-26℃條件下暗培養(yǎng)4-7天;待種仁萌發(fā)后在26-28℃條件下光照培養(yǎng)25-30天,平均每天光照12小時(shí),光照強(qiáng)度為1500-2000lux,使誘導(dǎo)培養(yǎng)的苗長至4-6cm,并且伴有側(cè)芽萌發(fā),即為初代誘導(dǎo)的組培苗;
步驟3,組培苗增殖培養(yǎng)
將所述步驟2初代誘導(dǎo)的增殖苗切割分株后接種于GD改良培養(yǎng)基上,于26-28℃條件下培養(yǎng)20-25天為繼代增殖苗,平均每天光照14小時(shí),光照強(qiáng)度為3000-3500lux;
步驟4,增殖苗壯苗培養(yǎng)
將所述步驟3的繼代增殖苗切割分株后接種于MS改良培養(yǎng)基上,在26-28℃條件下培養(yǎng)10-15天,平均每天光照14小時(shí),光照強(qiáng)度為3000-3500lux;
步驟5,增殖苗生根誘導(dǎo)培養(yǎng)
將所述步驟4壯苗培養(yǎng)后的增殖苗分株接種于1/2MS改良培養(yǎng)基,在26-28℃條件下培養(yǎng)20-25天,平均每天光照14小時(shí),光照強(qiáng)度為3000-3500lux;
步驟6,生根苗的練苗培養(yǎng)
包含兩階段:第一階段將生根苗連同組培瓶一起放到大棚內(nèi)培養(yǎng),培養(yǎng)溫度為25-28℃,光照為大棚內(nèi)非太陽直接照射的自然光,培養(yǎng)時(shí)間為7-14天;第二階段將瓶苗移栽到經(jīng)過消毒處理的練苗土壤中,培養(yǎng)溫度為25-28℃,光照為大棚內(nèi)非太陽直接照射的自然光,培養(yǎng)30-50天,即可。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于改良培養(yǎng)基的五針白皮松組培快繁方法,其特征在于,所述步驟2中的1/3GD改良誘導(dǎo)培養(yǎng)基為1/3GD+成熟土豆泥1%+成熟香蕉泥1%+蔗糖20.0g/L+瓊脂5.0g/L+6-BA 0.1-0.5mg/L+NAA 0.1-0.5mg/L。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于改良培養(yǎng)基的五針白皮松組培快繁方法,其特征在于,所述步驟3中GD改良培養(yǎng)基為GD+成熟土豆泥1%+成熟香蕉泥1%+蔗糖20.0g/L+瓊脂5.0g/L+6-BA 0.5-2.0mg/L+NAA 0.1mg/L。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于改良培養(yǎng)基的五針白皮松組培快繁方法,其特征在于,所述步驟4中MS改良培養(yǎng)基為MS+成熟土豆泥1%+成熟香蕉泥1%+蔗糖20.0g/L+瓊脂5.0g/L+6-BA 0.1-1.0mg/L+NAA 0.5mg/L。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于改良培養(yǎng)基的五針白皮松組培快繁方法,其特征在于,所述步驟5中1/2MS改良培養(yǎng)基為1/2MS+成熟土豆泥1%+成熟香蕉泥1%+蔗糖20.0g/L+瓊脂5.0g/L+6-BA 0.1mg/L+NAA 1.0-5.0mg/L。