1.一種降低深低溫凍存組織器官冰晶損傷的方法,其特征在于,包括以下步驟:
1) 將待冷凍的器官連接預(yù)冷至4℃的梯度濃度混合程控降溫器官灌注儀,灌注25℃恒溫的間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)基,灌注時間為30-60 min;
所述間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)基為傳代5代內(nèi)脂肪、臍帶、臍血或骨髓中的一種的間充質(zhì)干細(xì)胞,在傳代后24h后長到70~80%匯合,更換無血清間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基,48h后收集的培養(yǎng)上清,經(jīng)1000~3000g離心10~30min,取上清后使用0.1μm~0.22μm微孔濾膜過濾后所得;
2)然后向器官灌注預(yù)冷至4℃的冷凍保護(hù)劑,灌注時長30min;
3)將處理完畢的器官放入冷凍袋,封口后置于程控降溫儀中,按照設(shè)定降溫程序進(jìn)行程序化降溫,待其溫度降至-80℃后投入液氮中存放;
所述程控降溫儀降溫程序設(shè)定為①4℃平衡,②以1℃/min的速度降至0℃,并保持10min,③以2℃/min的速度降至-18℃,保持15min,④以2℃/min速度降至-45℃,保持15min,⑤再以5℃/min的速度降至-90℃,保持5min;
4)復(fù)蘇器官時,將凍存器官自液氮取出后置于37℃水浴中,不斷搖動;
5)完全融化后再次進(jìn)行灌注,灌注液為12-25℃的含間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)基,灌注時間為30min-60min;
處理完成的器官可直接進(jìn)行移植。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,所述間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)基,細(xì)胞密度為1x107/L,灌注速度為1.5ml/min。