本發(fā)明涉及一種薔薇屬植物的繁殖方法，尤其是一種月季的快速繁殖方法。

背景技術：

月季為薔薇科薔薇屬木本植物，素有“花中皇后”之稱，因其四季開花又被稱為月月紅。月季分布廣泛，適應性強，不僅適合園林綠化也可作盆栽切花等。目前市場對月季需求量增加，而其傳統(tǒng)育種方法包括扦插法和嫁接法因受原材料限制較大，難以大量快速繁殖。本發(fā)明通過組織培養(yǎng)技術，通過外植體的取材時間及部位，外植體的消毒方法，誘導培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)過程中培養(yǎng)基的配方和激素配比以及培養(yǎng)過程中溫濕度、光照的設置，移栽步驟及基質配比優(yōu)化，提高月季的繁殖率，可以有效提高月季的繁殖速度實現(xiàn)月季的工廠化育苗，滿足市場需要。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種月季快速繁殖方法。

本發(fā)明采用的技術方案為：

一種月季快速繁殖方法，包括外植體的制備、外植體的消毒、誘導培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)和移栽步驟。

具體地，該方法包括如下步驟：

(1)外植體的制備

春季4-5月或秋季10-11月取材，選取當年生無病蟲害的健康枝條，且選擇枝條中上段飽滿而未萌發(fā)側芽，去葉去刺剪成帶單腋芽的莖段；(春季4-5月或秋季10-11月是外植體取材的最佳時期，該時期的外植體在接種后污染率和褐化率相對較低，組培成活率相對較高。)

(2)外植體的消毒

將經(jīng)過步驟(1)處理的外植體先用洗衣粉水刷洗枝條表面，再用流水沖洗1h，在無菌環(huán)境下，先用75％酒精消毒30s，分兩次進行，每次處理后用無菌水沖洗3-5次，再用5％次氯酸鈉消毒15-18分鐘，分兩次進行，每次處理后用無菌水沖洗4-5次，消毒后置于已滅菌濾紙上晾干等待接種。

(3)誘導培養(yǎng)

在無菌條件下，將消毒好的外植體切去上下表面與消毒劑接觸的部分，切成2-3cm帶一個腋芽的莖段置于誘導培養(yǎng)基中，于23℃/白天，21℃/黑夜，12h/白天，12h/黑夜，濕度50％，光照強度3000-4000Lux條件下培養(yǎng)；誘導培養(yǎng)基包括MS+30g/L蔗糖+7-7.5g/L瓊脂+0.5mg/L6-芐氨基嘌呤+0.0075-0.01mg/L萘乙酸，pH5.8±0.1。

(4)增殖培養(yǎng)

待經(jīng)誘導培養(yǎng)的不定芽長至4-5cm且葉片完全展開時，進行增殖培養(yǎng)；在無菌條件下，將誘導的不定芽完整的切割并去除原莖段，接種于增殖培養(yǎng)基上，于23℃/白天，21℃/黑夜，12h/白天，12h/黑夜，濕度50％，光照強度3000-4000Lux條件下培養(yǎng)，平均每3-4周繼代一次，繼代三次，增殖培養(yǎng)基包括MS+30g/L蔗糖+7-7.5g/瓊脂+0.5-1.5mg/L 6-芐氨基嘌呤+0.01-0.1mg/L萘乙酸，pH5.8±0.1。

(5)生根培養(yǎng)

在無菌條件下，將經(jīng)過增殖培養(yǎng)的月季組培苗切成單株接種到生根培養(yǎng)基上，于23℃/白天，21℃/黑夜，12h/白天，12h/黑夜，濕度50％，光照強度3000-4000Lux條件下培養(yǎng)；生根培養(yǎng)基包括MS+20-30g/L蔗糖+7-7.5g/L瓊脂+0.1-0.3mg/L萘乙酸，pH5.8±0.1。

(6)移栽

待月季組培苗長出白根4-5cm后，先將生根苗移至室溫條件下進行煉苗5d以上，將月季組培苗移出，移栽的基質為蛭石、草炭、園土中的一種或兩種組合。

優(yōu)選地，所述增殖培養(yǎng)中，第一次的增殖培養(yǎng)基為MS+30g/L蔗糖+7g/瓊脂+1mg/L 6-芐氨基嘌呤+0.02mg/L萘乙酸，pH5.8；第二次的增殖培養(yǎng)基為MS+30g/L蔗糖+7g/瓊脂+1.5mg/L6-芐氨基嘌呤+0.05mg/L萘乙酸，pH5.8；第三次的增殖培養(yǎng)基為MS+30g/L蔗糖+7g/瓊脂+1.5mg/L 6-芐氨基嘌呤+0.08mg/L萘乙酸，pH5.8。

本發(fā)明所具有的有益效果：

本發(fā)明將月季組培方法進行優(yōu)化，簡化生產(chǎn)程序，既縮短生長周期又提高成活率。

具體地：

外植體消毒：本發(fā)明將外植體消毒方式進行改進，將消毒時間縮短，消毒次數(shù)增加，且每次消毒后盡快用滅菌水沖洗以減少消毒液對外植體的傷害，此方法既保證了外植體的消毒效果又降低了外植體褐變率，提高成活。

誘導培養(yǎng)：誘導培養(yǎng)基的激素配比有效提高了出芽率，達到100％，且芽健壯，生長較快。

增殖培養(yǎng)：增殖采用三種培養(yǎng)基，依次提高培養(yǎng)基的激素，以增強芽的適應性，繼代到第三周期增值率最高，達到3以上。

生根培養(yǎng)：生根培養(yǎng)基激素濃度可有效提高生根率，根的生長情況較好，根數(shù)量5條以上且長勢健壯。

具體實施方式

下面通過具體實施例對本發(fā)明作進一步說明，但不限定本發(fā)明的保護范圍。

一種月季的快速繁殖方法，包括如下步驟：

一、外植體的取材

在秋季11月取材，選取生長健壯且無病蟲害的當年生嫩枝，用飽滿且尚未萌發(fā)的側芽作外植體，側芽選取中上部，去除頂部兩個芽。剝除枝條上葉片、葉柄及皮刺，剪成帶單腋芽的莖段以備消毒處理。

二、外植體的消毒

將步驟一處理后的外植體用洗衣粉水清洗，再用流水沖洗1h，置于濾紙晾干。在超凈工作臺中將外植體用75％酒精消毒20s，用無菌水沖洗3次，再用75％酒精消毒15s，用無菌水沖洗5次，之后用5％次氯酸鈉消毒10分鐘，用無菌水沖洗5次，再用5％次氯酸鈉消毒8分鐘，用無菌水沖洗5次。之后置于已滅菌濾紙上晾干等待接種。

三、誘導培養(yǎng)

于超凈工作臺中，將滅菌后的外植體切去與消毒劑接觸的上下兩面，切成2-3cm帶一個腋芽的莖段，晾干后垂直接種于誘導培養(yǎng)基中，保持形態(tài)學上端向上，置于誘導培養(yǎng)基中。于23℃/白天，21℃/黑夜，12h/白天，12h/黑夜，濕度50％，光照強度3000Lux條件下培養(yǎng)。誘導培養(yǎng)基包括MS+30g/L蔗糖+7g/L瓊脂+0.5mg/L 6-芐氨基嘌呤+0.01mg/L萘乙酸，pH5.8。

四、增殖培養(yǎng)

經(jīng)誘導培養(yǎng)長出不定芽后，待不定芽長至4-5cm且葉片完全展開時將不定芽切下并去除多余的老化組織接種于增殖培養(yǎng)基中。每3-4周繼代一次，繼代時將叢生芽切成單芽。繼代到第三次，增殖達到最佳，達到3左右。第一次增殖培養(yǎng)基為MS+30g/L蔗糖+7g/瓊脂+1mg/L 6-芐氨基嘌呤+0.02mg/L萘乙酸，pH5.8；第二次增殖培養(yǎng)基為MS+30g/L蔗糖+7g/瓊脂+1.5mg/L6-芐氨基嘌呤+0.05mg/L萘乙酸，pH5.8；第三次增殖培養(yǎng)基為MS+30g/L蔗糖+7g/瓊脂+1.5mg/L 6-芐氨基嘌呤+0.08mg/L萘乙酸，pH5.8。增殖培養(yǎng)條件為23℃/白天，21℃/黑夜，12h/白天，12h/黑夜，濕度50％，光照強度3000-4000Lux。

五、生根培養(yǎng)

在無菌條件下，將經(jīng)過增殖培養(yǎng)的月季組培苗切成單株接種到生根培養(yǎng)基上。生根培養(yǎng)基為MS+25g/L蔗糖+7g/L瓊脂+0.3mg/L萘乙酸，pH5.8。生根培養(yǎng)條件為23℃/白天，21℃/黑夜，12h/白天，12h/黑夜，濕度50％，光照強度3000Lux。

六、移栽

待月季組培苗長出白根4-5cm，株高約8cm時，將生根苗移至室溫條件下打開瓶蓋進行煉苗7d，取出生根苗后要將基部的培養(yǎng)基洗干凈以免生菌。移栽基質為蛭石：園土＝2:1(體積比)，移栽前先將基質于高壓蒸汽滅菌(121℃，30min)，基質要澆透水，在移栽初期套塑料薄膜進行保濕和保溫，溫度保持在25℃左右，相對濕度在80％左右。

本發(fā)明40-50天可得到株高約10cm，根數(shù)量約為5條以上的月季組培苗，增加繼代次數(shù)，可于70-90天擴繁植株3倍以上。本發(fā)明將月季組培方法進行優(yōu)化，簡化生產(chǎn)程序，既縮短生長周期又提高成活率。