本發(fā)明涉及生殖醫(yī)學(xué)醫(yī)療衛(wèi)生技術(shù)領(lǐng)域，特別是一種胚胎玻璃化解凍皿及使用方法。

背景技術(shù)：

胚胎玻璃化冷凍和解凍是人類輔助生殖技術(shù)實驗室中常規(guī)的操作，其可使病人在一個IVF-ET(體外受精-胚胎移植，即，試管嬰兒)治療周期中具有多次胚胎移植的機(jī)會，極大的提高了治療的成功率，而胚胎玻璃化冷凍和解凍的質(zhì)量直接關(guān)系到最后的治療結(jié)局。胚胎玻璃化冷凍和解凍是近年IVF領(lǐng)域的焦點之一，其具有比使用了20多年的慢速程序化冷凍和解凍快速、簡單、高凍融復(fù)活率的優(yōu)點，其凍融復(fù)活率高于90％。胚胎玻璃化冷凍和解凍近年來被越來越多的生殖中心實驗室采用，并有商業(yè)化的胚胎玻璃化冷凍和解凍液可以購買，但沒有對應(yīng)的胚胎玻璃化解凍器皿，目前各生殖中心實驗采用培養(yǎng)皿和四孔皿作為盛放解凍液容器，并用一頭拉細(xì)的毛細(xì)玻璃管進(jìn)行轉(zhuǎn)移胚胎，但是玻璃化冷凍胚胎從液氮轉(zhuǎn)移至解凍液中，胚胎會浮于解凍液表面，難以觀察到和吸取轉(zhuǎn)移，胚胎在稀釋液和洗液中則沉于底部，在轉(zhuǎn)移的過程中可能會丟失。如何解決上述胚胎玻璃化解凍過程中的問題，簡化胚胎玻璃化解凍操作成為了本行業(yè)急需解決的問題。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的問題是提供一種結(jié)構(gòu)簡單、使用方便、能夠減少操作失誤的胚胎玻璃化解凍皿及使用方法。

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種胚胎玻璃化解凍皿，包括相互配套的皿底和皿蓋，還包括胚胎轉(zhuǎn)移器及由彈性材料制成的胚胎限定環(huán)；皿底由等高的皿底Ⅰ和皿底Ⅱ組合形成；

皿底Ⅰ內(nèi)設(shè)置有中空的解凍腔；解凍腔頂部開口，在解凍腔的頂部開口處設(shè)置有胚胎限定環(huán)固定圈；在胚胎限定環(huán)固定圈內(nèi)設(shè)置有胚胎限定環(huán)；皿底Ⅱ內(nèi)設(shè)置有至少兩個空腔(分別作為稀釋腔、洗腔)；

胚胎轉(zhuǎn)移器包括胚胎轉(zhuǎn)移器柄、胚胎轉(zhuǎn)移器桿和胚胎網(wǎng)兜；胚胎轉(zhuǎn)移器桿為L形，胚胎轉(zhuǎn)移器桿一端與胚胎網(wǎng)兜連接、另一端與胚胎轉(zhuǎn)移器柄連接；

在皿底和皿蓋之間設(shè)置胚胎轉(zhuǎn)移器通道，胚胎轉(zhuǎn)移器桿穿越胚胎轉(zhuǎn)移器通道，胚胎轉(zhuǎn)移器柄位于皿底和皿蓋組合成的容器之外，胚胎轉(zhuǎn)移器桿位于皿底和皿蓋組合成的容器之內(nèi)。

作為本發(fā)明的胚胎玻璃化解凍皿的改進(jìn)：

皿底Ⅰ的側(cè)壁上設(shè)置有連通皿底Ⅰ頂部開口端并與解凍腔的位置相對應(yīng)的皿底Ⅰ通道；在皿蓋的側(cè)壁上沿著皿蓋底部開口向上挖設(shè)皿蓋通道Ⅰ，皿蓋通道Ⅰ與皿底Ⅰ通道相對應(yīng)；皿底和皿蓋裝配后，皿蓋通道Ⅰ的橫向頂部位于皿底Ⅰ的頂部上方且兩者間形成間隙Ⅰ；

在皿底Ⅱ的側(cè)壁上沿著皿底Ⅱ頂部開口端向下挖設(shè)凹槽，凹槽的位置與皿底Ⅱ內(nèi)的空腔相對應(yīng)；

皿蓋的側(cè)壁上設(shè)置與所述凹槽相配合的凸部，凸部置入凹槽內(nèi)后兩者間形成間隙Ⅲ；在皿蓋的側(cè)壁上沿著皿蓋底部開口向上挖設(shè)皿蓋通道Ⅱ，皿蓋通道Ⅱ與皿蓋通道Ⅰ相連通；所述間隙Ⅲ與皿蓋通道Ⅱ相連通；皿底和皿蓋裝配后，皿蓋通道Ⅱ的橫向頂部位于皿底Ⅱ的頂部上方且兩者間形成間隙Ⅱ；

皿底Ⅰ通道、皿蓋通道Ⅰ與皿底Ⅰ的頂部所形成的間隙Ⅰ、凸部與凹槽所形成的間隙Ⅲ、皿蓋通道Ⅱ與皿底Ⅱ的頂部所形成的間隙Ⅱ相連通后形成胚胎轉(zhuǎn)移器通道；

實際使用中，起始狀態(tài)時，胚胎網(wǎng)兜位于解凍腔底部。

作為本發(fā)明的胚胎玻璃化解凍皿的改進(jìn)：

位于皿底Ⅱ內(nèi)的空腔包括稀釋腔、洗腔A和洗腔B，解凍腔、稀釋腔、洗腔A和洗腔B依次排列；

位于皿底Ⅱ側(cè)壁上的凹槽包括凹槽A、凹槽B和凹槽C，所述凹槽A、凹槽B和凹槽C均分別與皿底Ⅱ的頂部開口端相連通；凹槽A、凹槽B和凹槽C分別與稀釋腔、洗腔A和洗腔B的位置相一一對應(yīng)；

位于皿蓋側(cè)壁上的凸部包括與凹槽A、凹槽B和凹槽C相一一對應(yīng)的凸起A、凸起B(yǎng)和凸起C；凸起A置入凹槽A內(nèi)后兩者間形成間隙A，凸起B(yǎng)置入凹槽B內(nèi)后兩者間形成間隙B，凸起C置入凹槽C內(nèi)后兩者間形成間隙C；所述間隙A和間隙B呈U型，間隙C呈L型；間隙A、間隙B、間隙C組成了間隙Ⅲ；

皿蓋通道Ⅱ包括皿蓋通道A、皿蓋通道B、皿蓋通道C；

皿蓋通道A與皿蓋通道Ⅰ相連通，所述皿蓋通道A的橫向頂部位于皿底Ⅱ的頂部上方且兩者間形成間隙a；間隙a分別與間隙A、間隙Ⅰ相連通；

皿蓋通道B位于凸起A與凸起B(yǎng)之間；皿蓋通道B的橫向頂部位于皿底Ⅱ的頂部上方且兩者間形成間隙b；間隙b分別與間隙A、間隙B相連通；

皿蓋通道C位于凸起B(yǎng)和凸起C之間；皿蓋通道C的橫向頂部位于皿底Ⅱ的頂部上方且兩者間形成間隙c；間隙c分別與間隙B、間隙C相連通；

皿底Ⅰ通道、間隙Ⅰ、間隙a、間隙A、間隙b、間隙B、間隙c、間隙C相連通后形成胚胎轉(zhuǎn)移器通道；

當(dāng)胚胎轉(zhuǎn)移器桿位于皿底Ⅰ通道底部時，胚胎網(wǎng)兜剛好位于解凍腔的底部；當(dāng)胚胎轉(zhuǎn)移器桿位于皿底Ⅰ通道頂部時，胚胎網(wǎng)兜位于解凍腔的正上方，且不與解凍腔相接觸。

作為本發(fā)明的胚胎玻璃化解凍皿的進(jìn)一步改進(jìn)：胚胎轉(zhuǎn)移器通道的口徑相等。即，所述皿底Ⅰ通道、間隙Ⅰ、間隙a、間隙A、間隙b、間隙B、間隙c、間隙C的寬度相等。

作為本發(fā)明的胚胎玻璃化解凍皿的進(jìn)一步改進(jìn)：解凍腔、稀釋腔、洗腔A和洗腔B的中心連線位于同一直線上；稀釋腔、洗腔A和洗腔B的高度相一致，

凹槽A、凹槽B和凹槽C的底部高度相一致，均對應(yīng)的位于稀釋腔、洗腔A和洗腔B的正上方；間隙Ⅰ、間隙a、間隙b、間隙c的高度一致。

作為本發(fā)明的胚胎玻璃化解凍皿的進(jìn)一步改進(jìn)：胚胎限定環(huán)上口的內(nèi)徑小于胚胎網(wǎng)兜的外徑；所述胚胎限定環(huán)下口的內(nèi)徑等于胚胎網(wǎng)兜的外徑；胚胎限定環(huán)下口的外徑等于胚胎限定環(huán)固定圈的內(nèi)徑。胚胎限定環(huán)固定圈起到固定胚胎限定環(huán)的作用。

作為本發(fā)明的胚胎玻璃化解凍皿的進(jìn)一步改進(jìn)：胚胎網(wǎng)兜呈空心的下半球狀，在胚胎網(wǎng)兜的上半部(即，靠近球體的中心部位，也即下半球狀的上半部)設(shè)置孔洞，孔洞的直徑小于胚胎的直徑。

具體而言，孔洞可在胚胎網(wǎng)兜的上半部排列成多個圈狀；胚胎網(wǎng)兜的這種上半部具有多圈圓形孔洞、下半部為密封的結(jié)構(gòu)，可以在轉(zhuǎn)移的過程中排除多余的液體，只保留少量液體。

作為本發(fā)明的胚胎玻璃化解凍皿的進(jìn)一步改進(jìn)：皿底Ⅱ的橫截面大于皿底Ⅰ的橫截面，胚胎轉(zhuǎn)移器通道的口徑大于胚胎轉(zhuǎn)移器桿的直徑。

作為本發(fā)明的胚胎玻璃化解凍皿的進(jìn)一步改進(jìn)：解凍腔為上小下大的圓臺形，稀釋腔、洗腔A和洗腔B均為圓柱形。

作為本發(fā)明的胚胎玻璃化解凍皿的進(jìn)一步改進(jìn)：胚胎限定環(huán)為彈性塑料限定環(huán)。

本發(fā)明還同時提供了利用上述胚胎玻璃化解凍皿進(jìn)行的胚胎玻璃化解凍方法，包括以下步驟：

1)、首先打開皿蓋，拆分皿底Ⅰ和皿底Ⅱ，胚胎轉(zhuǎn)移器的胚胎轉(zhuǎn)移器桿穿越皿底Ⅰ通道，胚胎網(wǎng)兜從上至下穿過胚胎限定環(huán)后置入解凍腔底部；在解凍腔和稀釋腔、洗腔A和洗腔B中分別加入裝有解凍液(TS)、稀釋液(DS)、洗液Ⅰ(WS1)和洗液Ⅱ(WS2)，

解凍腔中的解凍液(TS)的液面位于胚胎限定環(huán)的上表面和下表面之間；

將裝有胚胎轉(zhuǎn)移器的皿底Ⅰ置于37±1℃預(yù)熱，皿底Ⅱ置于室溫(20～24℃)平衡；

2)、當(dāng)需要解凍胚胎時，把皿底Ⅰ從預(yù)熱裝置中取出，將皿底Ⅰ和皿底Ⅱ連接組成皿底(即，將皿底Ⅰ和皿底Ⅱ通過連接件連接為一體)，將胚胎從液氮中取出，置于解凍腔內(nèi)，胚胎浮在位于胚胎限定環(huán)的上表面和下表面之間的解凍液(TS)的液面上(因此，解凍后的胚胎位于胚胎限定環(huán)內(nèi))，再將皿蓋蓋在皿底上，從而使皿蓋通道Ⅰ與皿底Ⅰ通道相對應(yīng)，且使得凸起A置入凹槽A內(nèi)，凸起B(yǎng)置入凹槽B內(nèi)，凸起C置入凹槽C內(nèi)；

當(dāng)設(shè)定的解凍時間到后(胚胎在解凍腔中停留的時間約為1分鐘)，通過胚胎轉(zhuǎn)移器柄間接帶動胚胎網(wǎng)兜向上移動，當(dāng)胚胎網(wǎng)兜通過胚胎限定環(huán)時，胚胎進(jìn)入胚胎網(wǎng)兜內(nèi)；

由于胚胎限定環(huán)由彈性材料制成且胚胎限定環(huán)的這種“上小下大”的結(jié)構(gòu)，可以確保胚胎進(jìn)入胚胎網(wǎng)兜內(nèi)部，且不會黏在胚胎網(wǎng)兜的邊緣上；

胚胎轉(zhuǎn)移器桿沿著胚胎轉(zhuǎn)移器通道滑動，從而帶動位于胚胎網(wǎng)兜內(nèi)的胚胎依次從解凍腔進(jìn)入稀釋腔、洗腔A和洗腔B；從而實現(xiàn)解凍胚胎在不同液體之間的轉(zhuǎn)移；具體如下：

3)、手握胚胎轉(zhuǎn)移器柄順著皿底Ⅰ通道往上提，帶動胚胎網(wǎng)兜從解凍腔的解凍液(TS)中移出，胚胎網(wǎng)兜中的部分解凍液(TS)從胚胎網(wǎng)兜的孔洞中流出，即，胚胎網(wǎng)兜(43)排除多余的解凍液(TS)，只保留少量解凍液(TS)；

4)、手握胚胎轉(zhuǎn)移器柄，使胚胎轉(zhuǎn)移器桿沿著胚胎轉(zhuǎn)移器通道從左至右進(jìn)行如下移動：

使胚胎轉(zhuǎn)移器桿在皿底Ⅰ通道中上移至頂部后，然后轉(zhuǎn)入間隙Ⅰ內(nèi)進(jìn)行平移，再轉(zhuǎn)入間隙a內(nèi)繼續(xù)平移；接著沿著U型的間隙A下滑，此時，胚胎網(wǎng)兜落入稀釋腔內(nèi)，當(dāng)下滑至間隙A的最底端時，胚胎網(wǎng)兜位于稀釋腔的底部，當(dāng)設(shè)定的稀釋時間到后(即，胚胎網(wǎng)兜位于稀釋腔的底部，使胚胎網(wǎng)兜內(nèi)的胚胎被稀釋液浸泡時間，約為3分鐘)；使胚胎轉(zhuǎn)移器桿沿著U型的間隙A上移，從而使胚胎網(wǎng)兜脫離稀釋腔；

然后轉(zhuǎn)入間隙b內(nèi)進(jìn)行平移，接著沿著U型的間隙B下滑，此時，胚胎網(wǎng)兜落入洗腔A內(nèi)，當(dāng)下滑至間隙B的最底端時，胚胎網(wǎng)兜位于洗腔A的底部，當(dāng)設(shè)定的首次洗滌時間到后(即，胚胎網(wǎng)兜位于洗腔A的底部，使胚胎網(wǎng)兜內(nèi)的胚胎被洗液Ⅰ(WS1)浸泡時間，約為5分鐘)；使胚胎轉(zhuǎn)移器桿沿著U型的間隙B上移，從而使胚胎網(wǎng)兜脫離洗腔A；

然后轉(zhuǎn)入間隙c內(nèi)進(jìn)行平移，接著沿著L型的間隙C下滑，此時，胚胎網(wǎng)兜落入洗腔B內(nèi)，當(dāng)下滑至間隙C的最底端時，胚胎網(wǎng)兜位于洗腔B的底部，當(dāng)設(shè)定的二次洗滌時間到后(即，胚胎網(wǎng)兜位于洗腔B的底部，使胚胎網(wǎng)兜內(nèi)的胚胎被洗液Ⅱ(WS2)浸泡時間，約為5分鐘)；打開皿蓋，使胚胎轉(zhuǎn)移器桿沿著L型的間隙C上移，從而使胚胎網(wǎng)兜脫離洗腔B；胚胎解凍完成；

再把解凍后的胚胎轉(zhuǎn)移至移植盤。

在本發(fā)明中，胚胎轉(zhuǎn)移器柄在槽最低點時胚胎網(wǎng)兜位于解凍腔、稀釋腔、洗腔A和洗腔B的底部，在槽最高點時胚胎網(wǎng)兜剛好位于解凍腔、稀釋腔、洗腔A和洗腔B的正上方。

上述步驟2)是在37±1℃的臺面環(huán)境下進(jìn)行；步驟3)和步驟4)是在室溫下進(jìn)行。

在解凍液中，因為冷凍胚胎是脫水狀態(tài)，所以浮于液面。而在后續(xù)的稀釋液、洗液中，由于液體置換進(jìn)了胚胎細(xì)胞，所以胚胎細(xì)胞沉于底部，此為常規(guī)技術(shù)。

本發(fā)明具有如下技術(shù)優(yōu)勢：

1、本發(fā)明在玻璃化冷凍胚胎解凍的過程中無需在顯微鏡下操作，即，無需像現(xiàn)有技術(shù)需要全程在顯微鏡下進(jìn)行；

2、解凍腔設(shè)置為上小下大的圓臺形，并在開口處設(shè)置上口和下口的內(nèi)徑分別小于和等于胚胎網(wǎng)兜外徑的彈性塑料組成的胚胎限定環(huán)，可以確保浮于解凍液液面上的胚胎進(jìn)入胚胎網(wǎng)兜內(nèi)部，且不會黏在胚胎網(wǎng)兜的邊緣上；

3、本發(fā)明設(shè)置了胚胎轉(zhuǎn)移器和相應(yīng)的胚胎轉(zhuǎn)移器通道，胚胎轉(zhuǎn)移器的胚胎轉(zhuǎn)移器桿能沿著胚胎轉(zhuǎn)移器通道滑動，從而帶動位于胚胎網(wǎng)兜內(nèi)的胚胎依次從解凍腔進(jìn)入稀釋腔、洗腔A和洗腔B；即，實現(xiàn)解凍胚胎的在不同解凍液之間的轉(zhuǎn)移，無需像現(xiàn)有技術(shù)需要在顯微鏡下重復(fù)吸放實現(xiàn)，有效的減少了胚胎解凍過程中的勞動強度和胚胎丟失的可能性。

綜上所述，本發(fā)明的胚胎玻璃化解凍皿結(jié)構(gòu)簡單，使用方便。使用本胚胎玻璃化解凍皿，胚胎在玻璃化解凍的過程中無需用一頭拉細(xì)的毛細(xì)玻璃管進(jìn)行吸取轉(zhuǎn)移，減少了胚胎丟失的風(fēng)險，且全程無需用顯微鏡觀察，減少了操作者的勞動強度。整個解凍過程在皿體中操作，防止污染，更加安全簡易。

附圖說明

下面結(jié)合附圖對本發(fā)明的具體實施方式作進(jìn)一步詳細(xì)說明。

圖1為本發(fā)明的胚胎玻璃化解凍皿的整體結(jié)構(gòu)示意圖；

圖2為圖1的剖視示意圖；

圖3為圖2中皿底Ⅰ1的結(jié)構(gòu)示意圖；

圖4為圖2中皿底Ⅱ2的結(jié)構(gòu)示意圖；

圖5為圖2中皿底Ⅰ1和皿底Ⅱ2組合成皿底時的結(jié)構(gòu)示意圖；

圖6為圖2中的皿蓋3的結(jié)構(gòu)示意圖；

圖7為本發(fā)明中的胚胎轉(zhuǎn)移器4的結(jié)構(gòu)示意圖；

圖8為圖2中的胚胎限定環(huán)5的結(jié)構(gòu)示意圖；

圖9為胚胎轉(zhuǎn)移器4和胚胎限定環(huán)5配合使用的結(jié)構(gòu)示意圖；

圖10為圖2中放入胚胎轉(zhuǎn)移器4時的結(jié)構(gòu)示意圖。

具體實施方式

下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步描述，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不僅限于此。

實施例1、一種胚胎玻璃化解凍皿，如圖1-10所示，包括胚胎轉(zhuǎn)移器4、胚胎限定環(huán)5以及相互配套的皿底和皿蓋3，皿底由等高的皿底Ⅰ1和皿底Ⅱ2組合形成。皿底Ⅱ2的橫截面大于皿底Ⅰ1的橫截面。即，皿底為長方體。

所述皿底Ⅰ1內(nèi)設(shè)置有用于放置胚胎轉(zhuǎn)移器4的中空的解凍腔11；解凍腔11為上小下大的圓臺形，所述解凍腔11頂部開口，在解凍腔11的開口處設(shè)置有胚胎限定環(huán)固定圈12；在胚胎限定環(huán)固定圈12內(nèi)設(shè)置有胚胎限定環(huán)5。胚胎限定環(huán)5為彈性塑料限定環(huán)。胚胎限定環(huán)固定圈12的作用是固定胚胎限定環(huán)5。

皿底Ⅰ1的側(cè)壁上設(shè)置有連通皿底Ⅰ1頂部開口端并與解凍腔11的位置相對應(yīng)的皿底Ⅰ通道13；在皿蓋3的側(cè)壁上沿著皿蓋3底部開口向上挖設(shè)皿蓋通道Ⅰ34，皿蓋通道Ⅰ34與皿底Ⅰ通道13相對應(yīng)；皿底和皿蓋3裝配后，皿蓋通道Ⅰ34的橫向頂部位于皿底Ⅰ11的頂部上方且兩者間形成間隙Ⅰ。

皿底Ⅱ2內(nèi)設(shè)置有3個空腔，分別為稀釋腔21、洗腔A22和洗腔B23，稀釋腔21、洗腔A22和洗腔B23均為圓柱形。解凍腔11、稀釋腔21、洗腔A22和洗腔B23依次排列；解凍腔11、稀釋腔21、洗腔A22和洗腔B23的中心連線位于同一直線上；稀釋腔21、洗腔A22和洗腔B23的高度一致。

在皿底Ⅱ2的側(cè)壁上沿著皿底Ⅱ2頂部開口端向下挖設(shè)凹槽，凹槽的位置與空腔相對應(yīng)；具體如下：

位于皿底Ⅱ2側(cè)壁上的凹槽包括凹槽A24、凹槽B25和凹槽C26，凹槽A24、凹槽B25和凹槽C26均分別與皿底Ⅱ2的頂部開口端相連通；凹槽A24、凹槽B25和凹槽C26分別與稀釋腔21、洗腔A22和洗腔B23的位置相一一對應(yīng)。

在皿蓋3的側(cè)壁上設(shè)置與凹槽相配合的凸部，具體如下：

位于皿蓋3側(cè)壁上的凸部包括與凹槽A24、凹槽B25和凹槽C26相一一對應(yīng)的凸起A31、凸起B(yǎng)32和凸起C33；凸起A31置入凹槽A24內(nèi)后兩者間形成間隙A，凸起B(yǎng)32置入凹槽B25內(nèi)后兩者間形成間隙B，凸起C33置入凹槽C26內(nèi)后兩者間形成間隙C；所述間隙A和間隙B呈U型，間隙C呈L型。

在皿蓋3的側(cè)壁上沿著皿蓋3底部開口向上挖設(shè)皿蓋通道Ⅱ，具體如下：

皿蓋通道Ⅱ包括皿蓋通道A35、皿蓋通道B36、皿蓋通道C37；

皿蓋通道A35與皿蓋通道Ⅰ34相連通，皿蓋通道A35的橫向頂部位于皿底Ⅱ2的頂部上方且兩者間形成間隙a；間隙a分別與間隙A、間隙Ⅰ相連通；

皿蓋通道B36位于凸起A31與凸起B(yǎng)32之間；皿蓋通道B36的橫向頂部位于皿底Ⅱ2的頂部上方且兩者間形成間隙b；間隙b分別與間隙A、間隙B相連通；

皿蓋通道C37位于凸起B(yǎng)32和凸起C34之間；皿蓋通道C37的橫向頂部位于皿底Ⅱ2的頂部上方且兩者間形成間隙c；間隙c分別與間隙B、間隙C相連通。

皿底Ⅰ通道13、間隙Ⅰ、間隙a、間隙A、間隙b、間隙B、間隙c、間隙C相連通后形成胚胎轉(zhuǎn)移器通道6。胚胎轉(zhuǎn)移器通道6的口徑相等；即，所述皿底Ⅰ通道13、間隙Ⅰ、間隙a、間隙A、間隙b、間隙B、間隙c、間隙C的寬度相等。

凹槽A24、凹槽B25和凹槽C26的底部高度相一致，均對應(yīng)的位于稀釋腔21、洗腔A22和洗腔B23的正上方；皿蓋通道Ⅰ34、皿蓋通道A35、皿蓋通道B36、皿蓋通道C37的橫向頂部高度一致；即，間隙Ⅰ、間隙a、間隙b、間隙c的高度一致。

胚胎轉(zhuǎn)移器4包括胚胎轉(zhuǎn)移器柄41、胚胎轉(zhuǎn)移器桿42和胚胎網(wǎng)兜43；胚胎轉(zhuǎn)移器桿42為L形，胚胎轉(zhuǎn)移器桿42的一端與胚胎網(wǎng)兜43連接、另一端與胚胎轉(zhuǎn)移器柄41連接。胚胎轉(zhuǎn)移器桿42穿越胚胎轉(zhuǎn)移器通道6，胚胎轉(zhuǎn)移器柄41位于皿底的外圍。胚胎轉(zhuǎn)移器通道6的口徑大于胚胎轉(zhuǎn)移器桿42的直徑。

胚胎限定環(huán)5上口的內(nèi)徑(即，胚胎限定環(huán)5上表面開口的直徑)小于胚胎網(wǎng)兜43的外徑；所述胚胎限定環(huán)5下口的內(nèi)徑(即，胚胎限定環(huán)5下表面開口的直徑)等于胚胎網(wǎng)兜43的外徑；胚胎限定環(huán)5下口的外徑(即，胚胎限定環(huán)5下表面的外徑)等于胚胎限定環(huán)固定圈12的內(nèi)徑。

胚胎網(wǎng)兜43呈空心的下半球狀，在胚胎網(wǎng)兜43的上半部(即，靠近球體的中心部位，也即下半球狀的上半部)設(shè)置孔洞，孔洞的直徑小于胚胎的直徑。具體而言，孔洞可在胚胎網(wǎng)兜43的上半部排列成多個圈狀。胚胎網(wǎng)兜43的這種上部具有多圈圓形孔洞、下部為密封的結(jié)構(gòu)，可以在轉(zhuǎn)移的過程中排除多余的液體，只保留少量液體。

實驗一、利用上述胚胎玻璃化解凍皿進(jìn)行的胚胎玻璃化解凍方法，依次進(jìn)行以下步驟：

1)、首先打開皿蓋3，拆分皿底Ⅰ1和皿底Ⅱ2，胚胎轉(zhuǎn)移器4的胚胎轉(zhuǎn)移器桿42穿越皿底Ⅰ通道13，胚胎網(wǎng)兜43從上至下穿過胚胎限定環(huán)5后置入解凍腔11底部；在解凍腔11和稀釋腔21、洗腔A22和洗腔B23中分別加入裝有解凍液(TS)、稀釋液(DS)、洗液Ⅰ(WS1)和洗液Ⅱ(WS2)，

解凍腔11中的解凍液(TS)的液面位于胚胎限定環(huán)5的上表面和下表面之間；

將裝有胚胎轉(zhuǎn)移器4的皿底Ⅰ1置于37±1℃預(yù)熱，皿底Ⅱ2置于室溫(20～24℃)平衡；

2)、要需要解凍胚胎時，把皿底Ⅰ1從預(yù)熱裝置中取出，將皿底Ⅰ1和皿底Ⅱ2連接組成皿底(即，將皿底Ⅰ1和皿底Ⅱ2通過連接件123連接為一體)，將胚胎從液氮中取出，置于解凍腔11內(nèi)，胚胎浮在位于胚胎限定環(huán)5的上表面和下表面之間的解凍液(TS)的液面上(因此，解凍后的胚胎位于胚胎限定環(huán)5內(nèi))，再將皿蓋3蓋在皿底上，從而使皿蓋通道Ⅰ35與皿底Ⅰ通道13相對應(yīng)，且使得凸起A31置入滑槽A24內(nèi)，凸起B(yǎng)32置入滑槽B25內(nèi)，凸起C34置入滑槽C26內(nèi)；

當(dāng)設(shè)定的解凍時間到后(胚胎在解凍腔11中停留的時間為1分鐘)，通過胚胎轉(zhuǎn)移器柄41間接帶動胚胎網(wǎng)兜43向上移動，當(dāng)胚胎網(wǎng)兜43通過胚胎限定環(huán)5時，胚胎進(jìn)入胚胎網(wǎng)兜43內(nèi)；

備注說明：由于胚胎限定環(huán)5由彈性材料制成且胚胎限定環(huán)5的這種“上小下大”的結(jié)構(gòu)，可以確保胚胎進(jìn)入胚胎網(wǎng)兜43內(nèi)部，且不會黏在胚胎網(wǎng)兜43的邊緣上；

胚胎轉(zhuǎn)移器桿42沿著胚胎轉(zhuǎn)移器通道6滑動，從而帶動位于胚胎網(wǎng)兜43內(nèi)的胚胎依次從解凍腔11進(jìn)入稀釋腔21、洗腔A22和洗腔B23；從而實現(xiàn)解凍胚胎在不同液體之間的轉(zhuǎn)移。

圖9是解凍胚胎在解凍液中處理1min后，將胚胎轉(zhuǎn)移器4往上提，胚胎網(wǎng)兜43從解凍腔11底部往上移動到達(dá)胚胎限定環(huán)5下表面時的結(jié)構(gòu)示意圖。

3、手握胚胎轉(zhuǎn)移器柄41順著皿底Ⅰ通道13往上提，帶動胚胎網(wǎng)兜43從解凍腔11的解凍液(TS)中移出，胚胎網(wǎng)兜43中的部分解凍液(TS)從胚胎網(wǎng)兜43的孔洞中流出，即，胚胎網(wǎng)兜43排除多余的解凍液(TS)，只保留少量解凍液(TS)。

4、手握胚胎轉(zhuǎn)移器柄41，使胚胎轉(zhuǎn)移器桿42沿著胚胎轉(zhuǎn)移器通道6從左至右進(jìn)行如下移動：

使胚胎轉(zhuǎn)移器桿42在皿底Ⅰ通道13中上移至頂部后，然后轉(zhuǎn)入間隙Ⅰ內(nèi)進(jìn)行平移，再轉(zhuǎn)入間隙a內(nèi)繼續(xù)平移；接著沿著U型的間隙A下滑，此時，胚胎網(wǎng)兜43落入稀釋腔21內(nèi)，當(dāng)下滑至間隙A的最底端時，胚胎網(wǎng)兜43位于稀釋腔21的底部，當(dāng)設(shè)定的稀釋時間到后(即，胚胎網(wǎng)兜43位于稀釋腔21的底部，使胚胎網(wǎng)兜43內(nèi)的胚胎被稀釋液DS浸泡的時間，約為3分鐘)；使胚胎轉(zhuǎn)移器桿42沿著U型的間隙A上移，從而使胚胎網(wǎng)兜43脫離稀釋腔21；

然后轉(zhuǎn)入間隙b內(nèi)進(jìn)行平移，接著沿著U型的間隙B下滑，此時，胚胎網(wǎng)兜43落入洗腔A22內(nèi)，當(dāng)下滑至間隙B的最底端時，胚胎網(wǎng)兜43位于洗腔A22的底部，當(dāng)設(shè)定的首次洗滌時間到后(即，胚胎網(wǎng)兜43位于洗腔A22的底部，使胚胎網(wǎng)兜43內(nèi)的胚胎被洗液ⅠWS1浸泡的時間，約為5分鐘)；使胚胎轉(zhuǎn)移器桿42沿著U型的間隙B上移，從而使胚胎網(wǎng)兜43脫離洗腔A22；

然后轉(zhuǎn)入間隙c內(nèi)進(jìn)行平移，接著沿著L型的間隙C下滑，此時，胚胎網(wǎng)兜43落入洗腔B23內(nèi)，當(dāng)下滑至間隙C的最底端時，胚胎網(wǎng)兜43位于洗腔B23的底部，當(dāng)設(shè)定的二次洗滌時間到后(即，胚胎網(wǎng)兜43位于洗腔B23的底部，使胚胎網(wǎng)兜43內(nèi)的胚胎被洗液ⅡWS2浸泡的時間，約為5分鐘)；打開皿蓋3，使胚胎轉(zhuǎn)移器桿42沿著L型的間隙C上移，從而使胚胎網(wǎng)兜43脫離洗腔B23；胚胎解凍完成；

再把解凍后的胚胎轉(zhuǎn)移至移植盤。

上述整個步驟2)是在37℃的臺面上進(jìn)行，步驟3)、步驟4)是在室溫下進(jìn)行。

解凍液(TS)、稀釋液(DS)、洗液Ⅰ(WS1)和洗液Ⅱ(WS2)等可由日本加藤公司的玻璃化解凍試劑盒提供。

對比例1：取消實施例1中的胚胎限定環(huán)5，其余等同于實施例1。以此案例所得的解凍皿如同實驗一進(jìn)行實驗，手握胚胎轉(zhuǎn)移器柄41順著皿底Ⅰ通道13往上提、帶動胚胎網(wǎng)兜43從解凍腔11的解凍液(TS)中移出時，很容易發(fā)生胚胎無法進(jìn)入胚胎網(wǎng)兜43的不利后果。

對比例2：將實施例1中的皿底Ⅰ1和皿底Ⅱ2固定連接，不可拆分，其余等同于實施例1。以此案例所得的解凍皿如同實驗一進(jìn)行實驗，由于解凍液(TS)和稀釋液(DS)、洗液Ⅰ(WS1)、洗液Ⅱ(WS2)所需的預(yù)熱溫度不一樣，會導(dǎo)致兩者的預(yù)熱條件無法同時滿足，導(dǎo)致冷凍胚胎復(fù)蘇存活率低的不利后果。

對比例3：取消實施例1中的胚胎網(wǎng)兜43上的孔洞的設(shè)置，其余等同于實施例1。以此案例所得的解凍皿如同實驗一進(jìn)行實驗，會導(dǎo)致胚胎網(wǎng)兜43從解凍腔11進(jìn)入稀釋腔21時攜帶過多的解凍液(TS)，造成稀釋腔21中的稀釋液(DS)被稀釋，胚胎網(wǎng)兜43從稀釋腔21進(jìn)入洗腔A22以及從洗腔A22進(jìn)入洗腔B23也存在同樣的問題，最后導(dǎo)致冷凍胚胎復(fù)蘇效果不理想的不利后果。

最后應(yīng)說明的是：以上各實施例僅用于說明本發(fā)明的技術(shù)方案，而非對其限制；盡管參照簽署各實施例對本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解：其依然可以對前處各實施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對其中部分或者全部技術(shù)特征進(jìn)行等同替換；而這些修改或者替換，并不使相應(yīng)技術(shù)方案的本質(zhì)脫離發(fā)明各實施例方案的范圍。