一種露珠杜鵑的組培快速繁殖方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)技術(shù)，具體涉及一種露珠杜鵑的組培快速繁殖方法。
【背景技術(shù)】
[0002]露珠杜(Rhododendronirroratum Franch)屬于杜花科(Ericaceae)杜醒花屬常綠無鱗杜鵑亞屬，露珠杜鵑亞組中美麗、黃色大花型種類。它主要分布在四川西南部，貴州西北部及云南北部地區(qū)海拔1800?2000m的山頂灌木林中或稀草地上，常綠灌木或小喬木，高達4?Sm?；ㄆ??5月，果期9?10月，是美麗的觀賞花木。露珠杜鵑是優(yōu)良的、有待研宄開發(fā)的園林綠化樹種，可引種馴化成為露地栽培的園藝觀賞植物，是杜鵑育種的重要種質(zhì)資源。
[0003]露珠杜鵑具有很大的觀賞價值，近年來，關(guān)于同屬其他種植物的研宄頗多，但露珠杜鵑的研宄報道很少，主要是在栽培方面。露珠杜鵑的種子和扦插繁殖，由于出苗率低、常綠闊葉杜鵑枝條粗壯、稀少，扦插生根困難，移栽成活率低，又受季節(jié)和資源的限制，很難大規(guī)模育苗。為了更好的保護、開發(fā)、利用露珠杜鵑資源，研宄露珠杜鵑組培快繁技術(shù)具有重要意義。由于露珠杜鵑對于生長條件有嚴格的要求，其組培快速繁殖具有一定的困難，目前未見相關(guān)報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種培養(yǎng)周期短、不受季節(jié)限制、并且產(chǎn)量較高的露珠杜鵑帶芽莖段組培快速繁殖方法，以克服現(xiàn)有技術(shù)的不足。
[0005]本發(fā)明提供了一種露珠杜鵑組培快速繁殖方法。該方法采用組織培養(yǎng)技術(shù)，對種子播種出的無菌苗的帶芽莖段進行叢生芽誘導(dǎo)，繼而長成完整植物。
[0006]具體而言，本發(fā)明提供的方法包括以下步驟:
[0007](I)在無菌條件下，將當(dāng)年的露珠杜醒種子在75%酒精中浸泡25?35s，用無菌水洗凈種子表面殘留的酒精，在2%次氯酸鈉溶液中浸泡8?12min，用無菌水洗凈種子表面殘留的次氯酸鈉溶液，用無菌濾紙吸干種子表面水分，備用；
[0008](2)在無菌條件下，將經(jīng)步驟(I)處理后的種子抖撒在WPM培養(yǎng)基上，在溫度24?26°C、光照時間11?13h/d、光照強度1950?20501x的條件下進行無菌培養(yǎng)，種子完全萌發(fā)至無菌苗長度為2?3cm ；
[0009](3)在無菌條件下，從步驟(2)所得無菌苗上剪取I?2cm的帶芽莖段接入培養(yǎng)基中，所述培養(yǎng)基包含以下成分:WPM培養(yǎng)基，TDZ 0.2mg/L，吲哚乙酸0.1?lmg/L ;在溫度24?26°C、光照時間11?13h/d、光照強度1950?20501x的條件下進行無菌培養(yǎng)，至長出叢生芽；
[0010](4)在無菌條件下，取步驟(3)所得叢生芽，切割成單芽，轉(zhuǎn)接到培養(yǎng)基上，所述培養(yǎng)基包含以下成分:WPM培養(yǎng)基，TDZ 0.1?0.2mg/L，吲哚乙酸0.1?0.5mg/L，赤霉素3mg/L ;在溫度24?26°C、光照時間11?13h/d、光照強度1950?20501x的條件下進行無菌培養(yǎng)，叢生芽增殖、伸長；
[0011](5)從經(jīng)步驟(4)培養(yǎng)后的叢生芽中選出健康芽苗，將內(nèi)有芽苗的封口培養(yǎng)瓶在室內(nèi)放置2?3天后，每天打開培養(yǎng)瓶口 I?2h并重復(fù)2?3天，將芽苗移至培養(yǎng)瓶外，將芽苗基部的培養(yǎng)基洗凈，移栽入基質(zhì)中，所述基質(zhì)由等體積的草炭與珍珠巖組成；在溫度19?21°C、濕度60?70%、光照時間11?13h/d、光照強度1950?20501x的條件下進行培養(yǎng)，至生根。
[0012]本發(fā)明所述步驟⑴中，種子在2%次氯酸鈉溶液中浸泡的時間優(yōu)選為lOmin。
[0013]所述步驟(2)中，優(yōu)選培養(yǎng)基的組成為:WPM培養(yǎng)基，蔗糖30mg/L，瓊脂7.5mg/L?
[0014]所述步驟(3)中，優(yōu)選培養(yǎng)基的組成為::WPM培養(yǎng)基，TDZ 0.2mg/L，吲哚乙酸0.lmg/L，鹿糖 30mg/L，瓊脂 7.5mg/L。
[0015]所述步驟(4)中，優(yōu)選培養(yǎng)基的組成為::WPM培養(yǎng)基，TDZ 0.2mg/L，吲哚乙酸0.lmg/L，赤霉素 3mg/L，鹿糖 30mg/L，瓊脂 7.5mg/L。
[0016]由于露珠杜鵑在自然狀態(tài)下生長于酸性土壤中，本發(fā)明所述各個步驟的培養(yǎng)基/基質(zhì)為酸性環(huán)境，pH值優(yōu)選為5.4?5.6。
[0017]本發(fā)明提供的方法可以成功實現(xiàn)露珠杜鵑的組培快速繁殖。按照本發(fā)明提供的方法進行露珠杜鵑的組織培養(yǎng)，露珠杜鵑種子的萌發(fā)率可達45?60%，同時污染率可以控制在35%以下；在叢生芽的誘導(dǎo)階段，20左右即開始出現(xiàn)不定芽，一個半月后，叢生芽明顯增多，誘導(dǎo)率最高可達100% ;在叢生芽的繁殖和伸長培養(yǎng)階段，芽苗生長健壯，單株可高達3cm，繁殖系數(shù)高達4.6 ;在生根培養(yǎng)階段，15天左右即開始有根長出，40天后生根率可達85%以上，根長可至3?4cm。本發(fā)明提供的方法易于控制，效果顯著。
【附圖說明】
[0018]圖1，為實施例1中，步驟(2)所述抖撒在培養(yǎng)基上的種子；
[0019]圖2，為實施例1中，步驟(2)所述開始萌發(fā)的種子，有少量無菌苗出現(xiàn)；
[0020]圖3，為實施例1中，步驟⑵所得無菌苗；
[0021]圖4，為實施例1中，步驟(3)所得叢生芽；
[0022]圖5，為實施例1中，經(jīng)步驟⑷培養(yǎng)所得叢生芽；
[0023]圖6，為實施例1中，步驟(5)所述在基質(zhì)中栽培的芽苗；
[0024]圖7，為實施例1中，步驟(5)所得40天后生出的須根，根長3?4cm。
【具體實施方式】
[0025]以下實施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。
[0026]實施例1
[0027]按照以下步驟快速繁殖露珠杜鵑:
[0028](I)在無菌條件下，將當(dāng)年的露珠杜鵑種子在75%酒精中浸泡30s，用無菌水洗凈種子表面殘留的酒精，在2%次氯酸鈉溶液中浸泡lOmin，用無菌水洗凈種子表面殘留的次氯酸鈉溶液，用無菌濾紙吸干種子表面水分，備用；
[0029](2)在無菌條件下，將經(jīng)步驟(I)處理后的種子抖撒在PH5.5的培養(yǎng)基上，所述培養(yǎng)基由以下成分組成:WPM培養(yǎng)基，蔗糖30mg/L，瓊脂7.5mg/L ;在溫度25°C、光照時間12h/d、光照強度20001x的條件下進行無菌培養(yǎng)，種子完全萌發(fā)至無菌苗長度為2?3cm ;發(fā)芽率為59.7%，污染率為13.2% ;
[0030](3)在無菌條件下，從步驟(2)所得無菌苗上剪取長I?2cm的帶芽莖段接入pH5.5的培養(yǎng)基中，所述培養(yǎng)基由以下成分組成:WPM培養(yǎng)基，TDZ 0.2mg/L，吲哚乙酸0.lmg/L，蔗糖30mg/L，瓊脂7.5mg/L ;在溫度25°C、光照時間12h/d、光照強度20001x的條件下進行無菌培養(yǎng)；10天后，芽點開始膨大，培養(yǎng)至20天開始出現(xiàn)不定芽，一個半月后，叢生芽明顯增多，誘導(dǎo)率達到了 100%，繁殖系數(shù)為3.5 ;
[0031](4)在無菌條件下，取步驟(3)所得叢生芽，切割成單芽，轉(zhuǎn)接到pH5.5的培養(yǎng)基上，所述培養(yǎng)基由以下成分組成:WPM培養(yǎng)基，TDZ 0.2mg/L，吲哚乙酸0.lmg/L，赤霉素3mg/L，蔗糖30mg/L，瓊脂7.5mg/L ;溫度25°C、光照時間12h/d、光照強度20001x的條件下進行無菌培養(yǎng)；40天后基部長出叢生芽，芽苗生長健壯，單株可達3cm左右，繁殖系數(shù)為4.6 ;
[0032](5)從經(jīng)步驟(4)培養(yǎng)后的叢生芽中選出顏色嫩綠的健康芽苗，將內(nèi)有芽苗的封口培養(yǎng)瓶在室內(nèi)放置3天后，每天打開培養(yǎng)瓶口 Ih并連續(xù)重復(fù)3天，將芽苗移至培養(yǎng)瓶外，將芽苗基部的培養(yǎng)基洗凈，移栽入PH5.5的基質(zhì)中，所述基質(zhì)由等體積的草炭與珍珠巖組成；置于人工氣候箱中，在溫度25°C、濕度65%、光照時間12h/d、光照強度20001x的條件下進行培養(yǎng)；15天后，基部開始有根長出，40天后，生根率為85.7%，生根數(shù)量大于15條，有須根，根長3?4cm。
[0033]實施例2
[0034]與實施例1相比，區(qū)別僅在于，步驟(I)所述在2%次氯酸鈉溶液中浸泡的時間為8min ;步驟(2)所得種子的發(fā)芽率為61.8%，污染率為36.3%。
[0035]實施例3
[0036]與實施例1相比，區(qū)別僅在于，步驟⑴所